D J-1在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及其臨床意義

酈秀芳，張海勇，呂艷婷，胡孟鈞，魏建麗（諸暨市人民醫(yī)院，浙江 諸暨 311800）

D J-1在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及其臨床意義

酈秀芳，張海勇，呂艷婷，胡孟鈞，魏建麗（諸暨市人民醫(yī)院，浙江 諸暨 311800）

目的探討DJ-1蛋白在甲狀腺腫瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義。方法選擇甲狀腺腫瘤石蠟組織標(biāo)本90例為研究對(duì)象，其中甲狀腺癌60例和甲狀腺腺瘤30例，另選擇同期行非毒性結(jié)節(jié)性甲狀腺腫瘤切除術(shù)中周邊正常甲狀腺組織40例。應(yīng)用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測(cè)DJ-1蛋白的表達(dá)，分析DJ-1蛋白的表達(dá)與甲狀腺癌的臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果甲狀腺癌中DJ-1陽(yáng)性表達(dá)明顯高于甲狀腺腺瘤和正常甲狀腺組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而不同類型甲狀腺癌組織間DJ-1陽(yáng)性表達(dá)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。從單因素分析中所得出的與DJ-1的表達(dá)密切相關(guān)的指標(biāo)再進(jìn)行多因素非條件Logistic回歸分析，結(jié)果顯示頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期是DJ-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性的獨(dú)立影響因素。結(jié)論DJ-1異常表達(dá)與甲狀腺癌的發(fā)生、浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等惡性潛能密切相關(guān)，DJ-1高表達(dá)的甲狀腺癌組織具有更強(qiáng)的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力，可作為反映甲狀腺癌惡性生物學(xué)行為的重要標(biāo)記物之一。

甲狀腺腫瘤；免疫組織化學(xué)；DJ-1

甲狀腺腫瘤是內(nèi)分泌系統(tǒng)最常見(jiàn)的腫瘤之一，其起病隱匿，患者多以發(fā)現(xiàn)無(wú)痛性甲狀腺結(jié)節(jié)而就診。由于甲狀腺腫瘤良、惡性病變的生物學(xué)特征存在差異，治療措施和患者預(yù)后也隨之不同，因此鑒別診斷甲狀腺良惡性腫瘤具有十分重要的意義[1]。目前，DJ-1作為一種多功能蛋白，在多種腫瘤中表達(dá)異常，并與惡性腫瘤的不良預(yù)后和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等過(guò)程密切相關(guān)，DJ-1有望成為一種腫瘤診斷和預(yù)后判斷的理想標(biāo)記物，也是抗腫瘤藥物作用的重要靶分子[2-3]。目前尚未見(jiàn)DJ-1在甲狀腺腫瘤中的表達(dá)及其與甲狀腺癌臨床病理特征的關(guān)系報(bào)道，現(xiàn)將DJ-1在60例甲狀腺癌中的表達(dá)情況報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2009年8月～2014年3月本院行手術(shù)切除的甲狀腺腫瘤石蠟組織標(biāo)本90例（甲狀腺癌60例，甲狀腺腺瘤30例）為研究對(duì)象，入選病例排除合并其他腫瘤，其中男32例，女58例；年齡21～72歲，平均（40.5±4.6）歲；60例甲狀腺癌中乳頭狀癌26例，濾泡狀癌24例，未分化癌10例。另選擇同期行非毒性結(jié)節(jié)性甲狀腺腫瘤切除術(shù)中周邊正常甲狀腺組織40例，均經(jīng)病理診斷證實(shí)為正常甲狀腺組織。

1.2方法 采用SP法檢測(cè)入選組織標(biāo)本中DJ-1蛋白的表達(dá)，SP試劑盒購(gòu)自福州邁新生物有限公司，DJ-1鼠抗人多克隆抗體購(gòu)自Bioworld Technology公司。操作程序按說(shuō)明書進(jìn)行。結(jié)果判斷：DJ-1蛋白主要在細(xì)胞核和細(xì)胞漿中表達(dá)，呈棕黃色顆粒狀，隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野（400倍），計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞占全部計(jì)數(shù)癌細(xì)胞的比率，陽(yáng)性細(xì)胞＞10%為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1各種甲狀腺組織中DJ-1的表達(dá) 甲狀腺癌中DJ-1陽(yáng)性表達(dá)明顯高于甲狀腺腺瘤和正常甲狀腺組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），而不同類型甲狀腺癌組織間DJ-1陽(yáng)性表達(dá)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見(jiàn)表1。DJ-1在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞中的表達(dá)詳見(jiàn)圖1。

2.2甲狀腺癌組織中DJ-1表達(dá)與其臨床病理特征的關(guān)系 在60例甲狀腺癌組織中，DJ-1的表達(dá)與是否有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、包膜完整性以及TNM分期密切相關(guān)（P＜0.01），詳見(jiàn)表2。將單因素分析中得出的與DJ-1表達(dá)密切相關(guān)的3個(gè)指標(biāo)進(jìn)行多因素非條件Logistic回歸分析，結(jié)果顯示有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期進(jìn)入回歸模型，詳見(jiàn)表3。

表1 DJ-1在各型甲狀腺組織中的表達(dá)

圖1 DJ-1在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞中呈胞漿和胞核陽(yáng)性

表2 甲狀腺癌組織中DJ-1與臨床病理特征的關(guān)系

表3 Logistic回歸分析結(jié)果

3 討論

目前影像學(xué)、細(xì)胞學(xué)甚至病理學(xué)診斷對(duì)甲狀腺腫瘤性質(zhì)的鑒別診斷仍存在一定誤差，可能導(dǎo)致甲狀腺癌誤漏診。因此，尋找輔助鑒別甲狀腺良惡性腫瘤的分子診斷標(biāo)志物，并進(jìn)一步探討甲狀腺良惡性腫瘤在形成和轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)演變過(guò)程的分子機(jī)制已成為臨床研究甲狀腺腫瘤的熱點(diǎn)[4]。

DJ-1最早是1997年由Nagakubo.D發(fā)現(xiàn)并報(bào)道的一種新的絲裂原依賴性癌基因，它在進(jìn)化上高度保守。人類DJ-1/PARK7基因位于染色體1P36.2-P36.3，全長(zhǎng)約24Kb。野生型的DJ-1在溶液中都是以二聚體的形式存在的，通過(guò)N末端的螺旋結(jié)構(gòu)和C末端的兩個(gè)螺旋結(jié)構(gòu)所形成的疏水區(qū)相互連接[5-6]。DJ-1蛋白廣泛表達(dá)于人體各種組織，并在胚胎組織中有表達(dá)，尤其在睪丸、肝臟、胰腺、腎臟、心臟、骨骼肌等組織中呈高表達(dá)[7]。DJ-1的具體功能及調(diào)控機(jī)制還并不是非常明確，目前發(fā)現(xiàn)體內(nèi)野生型DJ-1蛋白以二聚體形式參與人體中多種病理生理過(guò)程的調(diào)控，其中包括細(xì)胞轉(zhuǎn)化、抗凋亡、抗氧化應(yīng)激、分子伴侶活性及負(fù)性調(diào)節(jié)等，這些調(diào)控功能均可能在促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有重要意義[8-9]。在原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中，DJ-1的表達(dá)高于正常細(xì)胞，并發(fā)現(xiàn)DJ-1高表達(dá)與患者預(yù)后和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)[10]。在黑色素瘤、食道癌、前列腺癌、子宮頸癌、乳腺癌和喉癌中，發(fā)現(xiàn)DJ-1的表達(dá)水平隨癌細(xì)胞的惡性程度升高而增加，且DJ-1表達(dá)高的腫瘤細(xì)胞呈高轉(zhuǎn)移潛能[11-13]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，甲狀腺癌中DJ-1陽(yáng)性表達(dá)明顯高于正常甲狀腺組織和甲狀腺腺瘤 （均P＜0.05），表明DJ-1蛋白的異常表達(dá)參與了甲狀腺癌的發(fā)生過(guò)程，可以作為早期鑒別診斷甲狀腺腫瘤良惡性的輔助參考指標(biāo)。本組中不同類型甲狀腺癌組織間DJ-1蛋白陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），提示DJ-1蛋白在各種類型甲狀腺癌的形成過(guò)程中所起的作用可能相同，均可促進(jìn)癌細(xì)胞更具有浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移性。本文從單因素分析中所得出的與DJ-1的表達(dá)密切相關(guān)的指標(biāo)再進(jìn)行多因素非條件Logistic回歸分析，結(jié)果顯示頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期進(jìn)入回歸模型，證明DJ-1異常表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，DJ-1高表達(dá)的癌組織具有更強(qiáng)的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力，可作為反映甲狀腺癌惡性生物學(xué)行為的重要標(biāo)記物之一。本結(jié)論為進(jìn)一步探討甲狀腺癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)的分子機(jī)制開辟新思路，為早期診斷甲狀腺癌、判斷甲狀腺腫瘤生物學(xué)行為，以及為其預(yù)后及靶向分子治療研究提供了新方向。

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