苦參及其制劑中生物堿成分測(cè)定方法研究進(jìn)展

牛天增,喬玉峰,李明花,李建偉

(1.山西振東制藥股份有限公司，山西 長(zhǎng)治 047100；2.長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系，山西 長(zhǎng)治 046000)

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苦參及其制劑中生物堿成分測(cè)定方法研究進(jìn)展

牛天增1,喬玉峰1,李明花1,李建偉2*

(1.山西振東制藥股份有限公司，山西 長(zhǎng)治 047100；2.長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系，山西 長(zhǎng)治 046000)

苦參為豆科槐屬植物，主要成分為生物堿，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為其具有清熱燥濕、殺蟲利尿等功效，廣泛用于中成藥及臨床方劑之中?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，苦參具有抗病原體、抗肝炎、抗炎、抗過(guò)敏、平喘、抗腫瘤、解熱、止瀉、抗心律失常及心肌缺血等作用。對(duì)近年來(lái)苦參及其制劑中生物堿成分的測(cè)定方法進(jìn)行總結(jié)，為其進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

苦參；生物堿；苦參堿；含量測(cè)定

苦參是豆科槐屬植物苦參(SophoraflavescensAit)的干燥根，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是我國(guó)常用的傳統(tǒng)中藥，其味苦、性寒，具有清熱解毒、祛風(fēng)燥濕、殺蟲止痛之功效[1]，多用于熱痢便血、黃疸尿閉、赤白帶下、陰腫陰癢、濕疹濕瘡等癥，外治滴蟲性陰道炎[2]。苦參的主要化學(xué)成分是生物堿，具有廣泛的藥理活性，使得苦參大量用于中成藥和臨床處方。隨著現(xiàn)代分離分析技術(shù)的發(fā)展，高效液相色譜、高效毛細(xì)管電泳色譜、氣相色譜及質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等，由于其分離效率高、選擇性強(qiáng)、靈敏度高、適應(yīng)性廣等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于苦參生物堿的分析方法中。本文對(duì)近年來(lái)苦參及其制劑生物堿成分的測(cè)定方法進(jìn)行全面總結(jié)，以期為今后對(duì)苦參及其制劑的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供參考。

1 薄層色譜法

薄層掃描法因操作簡(jiǎn)便、響應(yīng)快速、重現(xiàn)性好、靈敏度較高、樣品前處理要求低等特點(diǎn)，在生物堿成分的檢測(cè)分析方面有著較多的應(yīng)用。宋茹等[3]以甲苯-丙酮-乙醇-氨水(10∶10∶1∶ 0.1)為展開(kāi)劑，用薄層掃描法對(duì)復(fù)方苦參注射液中苦參堿進(jìn)行含量測(cè)定。樣品含量在2.16～7.56μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，平均回收率99.0%。徐馨等[4]建立了苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿和槐定堿的薄層層析檢測(cè)體系。任欣等[5]用薄層色譜法對(duì)遼寧產(chǎn)苦參不同組織中苦參堿和氧化苦參堿的含量進(jìn)行了測(cè)定。其中苦參堿含量以種子中為最高(0.065%)，氧化苦參堿含量以根最高(3.85%)。

2 滴定法

滴定法是測(cè)定生物堿的傳統(tǒng)方法，該法較為復(fù)雜，對(duì)操作過(guò)程要求高，多用于生物總堿的定量測(cè)定。陳依群等[6]采用陰離子表面活性劑雙相滴定法測(cè)定苦參堿葡萄糖注射液中苦參堿的含量。在酸性條件下進(jìn)行滴定，苦參堿含量回收率為99.3%，重復(fù)性試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.43%，中間精密度RSD為0.48%和0.41%。馮偉旭等[7]采用滴定法檢測(cè)苦參栓中苦參堿的含量，苦參堿含量為97.87%。吳用彥等[8]用滴定法和高效液相色譜法對(duì)苦參原藥材、乙醇提取液及酸水提取液中苦參總堿進(jìn)行含量測(cè)定，滴定法所得的RSD值較高效液相色譜法(HPLC)低。

3 酸性染料比色法

陳靜等[9]采用酸性染料比色法分析苦參不同組織部位中總生物堿的含量，總堿含量自高到低依次為韌皮部(35.14mg/g)、木質(zhì)部(33.12mg/g)、髓部(31.46mg/g)、木栓層(低于線性范圍)。仵文英等[10]利用該法測(cè)得苦參脂質(zhì)體中苦參堿的含量為1.51mg/mL。邵晶等[11]用此法測(cè)定不同產(chǎn)地苦參藥材中總生物堿的含量，不同產(chǎn)地苦參藥材中總生物堿含量差異較大。酸性染料比色法在檢測(cè)過(guò)程中會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)，并且顯色劑的濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果有干擾，其結(jié)果的準(zhǔn)確性與操作過(guò)程及相應(yīng)試劑相關(guān)。

4 高效液相色譜法

高效液相色譜已經(jīng)成為當(dāng)今化學(xué)成分分析檢測(cè)最常用、最有力的工具之一。其分析速度快、定量精確、應(yīng)用廣泛，在現(xiàn)代藥物分析中不可或缺。周秀梅等[12]利用HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方苦參注射液中苦參堿、槐定堿及氧化苦參堿的含量，酸性洗脫系統(tǒng)出峰快、峰型好，3種生物堿及雜質(zhì)分離完全。張萍等[13]建立了同時(shí)測(cè)定苦參中5種生物堿含量的HPLC方法，所建立的方法精密度和準(zhǔn)確度均良好。邊敏等[14]首次應(yīng)用離子液體1-丁基-3甲基咪唑四氟硼酸鹽和三乙胺作流動(dòng)相添加劑分離苦參中的生物堿，離子液體使生物堿達(dá)到完全分離、抑制生物堿分離時(shí)的拖尾，且對(duì)生物堿的保留影響較小。陳靜等[15]以氧化苦參堿為參照物，建立氧化苦參堿與槐果堿、苦參堿、氧化槐果堿、槐定堿的相對(duì)校正因子，采用外標(biāo)法測(cè)定該5種生物堿的含量，其相對(duì)校正因子重現(xiàn)性較好；21批苦參藥材和飲片中5個(gè)生物堿的含量用一測(cè)多評(píng)法進(jìn)行測(cè)定，其計(jì)算值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值間無(wú)明顯差異。

5 氣相色譜法

氣相色譜法分離效率高，分析速度快，檢測(cè)靈敏度高，選擇性好。只是在對(duì)組分直接定性分析時(shí)，須用已知物或已知數(shù)據(jù)與相應(yīng)的色譜峰進(jìn)行比對(duì)，或與其他方法聯(lián)用，才能獲得肯定的結(jié)果。江林等[16]對(duì)苦參堿和氧化苦參堿的填充柱氣相色譜行為進(jìn)行對(duì)比，確定苦參總堿的響應(yīng)峰，對(duì)苦參及其制劑中生物堿的含量進(jìn)行測(cè)定。王青虎等[17]利用氣相色譜法測(cè)定查干湯中苦參堿的含量。苦參堿在0.2～1.0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為98.80%。侯偉雄等[18]以二十三烷為內(nèi)標(biāo)，用氣相色譜法測(cè)定了婦炎平泡騰片中苦參堿的含量。

6 近紅外光譜測(cè)定法

近紅外光譜技術(shù)分析快速、無(wú)損、綠色，在大批量和過(guò)程分析中優(yōu)勢(shì)獨(dú)特。陳晨等[19]分別采用近紅外透射和反射模式采集樣品光譜，建立近紅外光譜與參考值之間的校正模型，并對(duì)未知樣品的含量進(jìn)行預(yù)測(cè)，建立的苦參堿、槐果堿、氧化槐果堿和氧化苦參堿模型性能良好。鞏曉宇等[20]采用近紅外漫反射光譜技術(shù)對(duì)苦參中苦參堿和氧化苦參堿的含量進(jìn)行測(cè)定，建立了苦參總堿的定量分析模型。所建立的模型可較為準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)未知苦參提取物中苦參總堿含量。陳晨等[21]在線采集滲漉液的近紅外光譜，以總生物堿含量為對(duì)照，建立近紅外光譜與對(duì)照值之間的校正模型，并對(duì)滲漉過(guò)程的未知樣品進(jìn)行含量預(yù)測(cè)，所建立的定量模型準(zhǔn)確度高，方法方便快速、準(zhǔn)確可靠。

7 毛細(xì)管電泳及電分析法

YIN JY等[22]利用毛細(xì)管電泳配置電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器檢測(cè)喹諾里西啶類生物堿?；倍▔A，苦參堿和氧化苦參堿在13min內(nèi)得以完全分離，槐定堿和苦參堿的檢測(cè)限為1.0nM，氧化苦參堿的檢測(cè)限為40nM。WANG HY等[23]采用毛細(xì)管電泳配合場(chǎng)放大樣品堆積技術(shù)對(duì)苦參中5種生物堿含量進(jìn)行測(cè)定，被檢測(cè)物的檢測(cè)限為0.004～0.0013μg/mL。SONG JZ等[24]建立非水相毛細(xì)管電泳快速測(cè)定喹諾里西啶生物堿的方法。10種生物堿在18min內(nèi)得以分離。對(duì)其中5個(gè)生物堿進(jìn)行方法學(xué)考察，加樣回收率為98.0～101.3%。10個(gè)生物堿的檢測(cè)限為0.93～2.31μg/mL。

李利軍等[25]利用電堆集-場(chǎng)放大進(jìn)樣非水毛細(xì)管電泳法分離測(cè)定苦參中的槐定堿、苦參堿和氧化苦參堿。三種生物堿在15min內(nèi)出峰，峰面積的RSD均小于5%。檢出限在1.01～2.02μg/L之間，比電動(dòng)進(jìn)樣法靈敏度提高了23倍。和傳統(tǒng)重力進(jìn)樣方法相比，三種生物堿用場(chǎng)放大電堆集法的相對(duì)富集倍數(shù)分別為201、178和258倍。姚慧琴等[26]研究了苦參堿類生物堿在玻碳電極上的直接電化學(xué)行為。玻碳電極上苦參堿和槐定堿在0.81V和0.92V附近均產(chǎn)生1個(gè)不可逆氧化峰，并且在一定條件下電極反應(yīng)為擴(kuò)散步驟控制，在相同條件下氧化苦參堿和氧化槐定堿均無(wú)氧化峰出現(xiàn)。在固體玻碳電極上運(yùn)用直接電化學(xué)方法測(cè)定苦參堿和槐定堿含量的精密度和準(zhǔn)確度符合測(cè)定要求。

8 質(zhì)譜法

黃曉文等[27]以利用氣相色譜-質(zhì)譜法分離并測(cè)定了苦參中7種生物堿。朱燕萍等[28]采用液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定苦參總堿片中苦參堿、氧化苦參堿和槐果堿的含量，三種生物堿平均回收率分別為99.2%、98.6%和98.9%。ZHANG L等[29]對(duì)大鼠進(jìn)行口服苦參提取物后，以血漿中的鹽酸偽麻黃堿作為內(nèi)標(biāo)物對(duì)苦參堿、氧化苦參堿和氧化槐果堿進(jìn)行HPLC-MS分析。單次進(jìn)樣分析在12min內(nèi)完成，三種成分的定量限分別為苦參1.0ng/mL，氧化苦參堿和氧化槐果堿為2.0ng/mL。LIU GO等[30]利用HPLC-ESI法對(duì)苦參中的生物堿進(jìn)行了全面、系統(tǒng)的分離和表征，共鑒定了22個(gè)成分。通過(guò)保留時(shí)間和對(duì)離子碎片的分析，5個(gè)生物堿得到了明確鑒定。其它17個(gè)成分通過(guò)對(duì)離子碎片以及分子量信息的分析和檢索進(jìn)行了初步鑒定。該方法對(duì)苦參中活性生物堿成分進(jìn)行了有益的表征，對(duì)苦參制劑的應(yīng)用也多有幫助。

9 逆流色譜

LING JY等[31]采用超臨界萃取苦參中的生物堿，利用高速逆流色譜進(jìn)行分離，兩相溶劑氯仿-甲醇-2.3×10-2M NaH2PO4，一步分離分別得到10.02mg苦參堿、22.07mg氧化槐果堿和79.93mg的氧化苦參堿，其含量分別為95.6%、95.8%和99.6%。YANG FQ等[32]利用pH區(qū)帶精制逆流色譜從苦參根提取物中分離生物堿，甲基叔丁基醚和水平衡后，加入三乙胺(10mM)，以鹽酸(5～10mM)水溶液洗脫，水相作為流動(dòng)相，有機(jī)相作為固定相。4.5h內(nèi)從1.0g苦參提取物中分離得到槐果堿(170mg)和苦參堿(600mg)，其純度均超過(guò)98%。

10 其它測(cè)定方法

劉志才等[33]利用島津ΜV-210紫外分光光度計(jì)對(duì)苦參膏中苦參總堿的含量進(jìn)行了測(cè)定?？鄥⒖倝A的光譜圖在200nm處有最大吸收，并且吸收值與苦參總堿的含量間存在著良好的線性關(guān)系。龐志功等[34]用丙二酸和醋酐縮合自制乙酸(β-二羧基-α-甲基)乙烯酯熒光試劑，利用苦參堿、氧化苦參堿對(duì)其有定量猝滅作用，達(dá)到測(cè)定苦參堿、氧化苦參堿的目的。其線性范圍為2×10-9～8×10-6g/mL，最低檢測(cè)限苦參堿為1.4×10-11g/mL，氧化苦參堿為4.5×10-12g/mL，測(cè)得苦參中苦參堿的含量為0.16%，氧化苦參堿的含量為2.5%。

11 結(jié)語(yǔ)

苦參及其制劑中生物堿的測(cè)定方法較多，不同的方法均有各自的適用性。隨著現(xiàn)代分析測(cè)定技術(shù)的發(fā)展，更快速、更靈敏、更高效、適用性更強(qiáng)的分析方法不斷地被開(kāi)發(fā)出來(lái)。高效液相色譜法是含量測(cè)定強(qiáng)有力的工具。高效毛細(xì)管電泳技術(shù)、液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)等在苦參生物堿的測(cè)定中有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，顯示了較好的應(yīng)用前景。而對(duì)苦參生物堿含量的測(cè)定也向同時(shí)測(cè)定更多種成分發(fā)展，以便更全面地控制苦參藥材及其制劑的質(zhì)量，更有效地研究苦參炮制與配伍機(jī)理以及生物體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)。近年來(lái)有關(guān)苦參類生物堿的體外分析方法研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展, 而對(duì)其體內(nèi)代謝的進(jìn)一步深入探索仍是研究的重點(diǎn)。

[1] 南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1977：1293-1294.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010：188.

[3] 宋茹,張曉席,袁繼民,等.薄層掃描法測(cè)定復(fù)方苦參注射液中苦參堿的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào),1999,15(6):43-45.

[4] 徐馨,周慶民,馮萬(wàn)宇,等.二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)優(yōu)化苦參生物堿薄層層析條件研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2013,5(9):141-142.

[5] 任欣,于昉,閆建議,等.苦參不同器官中的生物堿含量分析[J].大連大學(xué)學(xué)報(bào),2006,27(4): 79-81.

[6] 陳依群,林婉紅,李開(kāi)誠(chéng).陰離子表面活性劑雙相滴定法測(cè)定苦參堿葡萄糖注射液含量[J]. 現(xiàn)代食品與藥品雜志,2006,16(3):55-57.

[7] 馮偉旭,姜榴.滴定法測(cè)定苦參堿的含量[J].黑龍江醫(yī)藥,2011,24(1):12-13.

[8] 吳用彥,竇霞,劉濤,等.滴定法與高效液相色譜法測(cè)定苦參提取液中苦參總堿含量比較研究[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2013,29(12):1813-1814,1816.

[9] 陳靜,孫飛,孟江,等.苦參不同組織部位的生物堿含量研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥,2013,9(1): 22-25.

[10] 仵文英,劉碩,張抗懷,等.酸性染料比色法測(cè)定苦參堿脂質(zhì)體中苦參堿的含量[J].中國(guó)藥房,2005,16(22):1734-1735.

[11] 邵晶,倪京滿,郭玫,等.苦參藥材中總生物堿含量的測(cè)定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(36): 15950-15951.

[12] 周秀梅,史岑.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方苦參注射液中的3種生物堿[J].中國(guó)中藥雜志,2007,29(7):705-706.

[13] 張萍,楊璐,王耀欣,等.HPLC-DAD法測(cè)定商品苦參根莖和根中5個(gè)生物堿的含量[J].藥物分析雜志,2012,32(3):512-514.

[14] 邊敏,尹浩,張尊建.以離子液體和三乙胺作流動(dòng)相添加劑分離苦參中的生物堿[J].南京工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版,2012,34(1):117-120.

[15] 陳靜,王淑美,孟江,等.一測(cè)多評(píng)法測(cè)定苦參中5種生物堿的含量[J].中國(guó)中藥雜志, 2013, 38(9): 1406-1410.

[16] 江林,王海霞.氣相色譜法測(cè)定苦參及其制劑中的苦參堿類生物堿[J].分析測(cè)試儀器通訊, 2007,7(4):222-227.

[17] 王青虎,包明蘭,高玉峰,等.氣相色譜法測(cè)定查干湯中苦參堿的含量[J].中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志,2004,69:232-234.

[18] 侯偉雄,陳靜君,李思華.氣相色譜法測(cè)定婦炎平泡騰片中苦參堿的含量[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào),2009,21(3):254-255.

[19] 陳晨,李文龍,瞿海斌,等.復(fù)方苦參注射液兩類中間體中生物堿含量的近紅外光譜測(cè)定方法[J].藥物分析雜志,2012,32(10):1781-1786.

[20] 鞏曉宇,尹利輝,余馳,等.近紅外技術(shù)對(duì)苦參提取物的定量分析研究[J].藥物分析雜志, 2010,30(10):1935-1937.

[21] 陳晨,李文龍,瞿海斌,等.復(fù)方苦參注射液滲漉過(guò)程的近紅外光譜在線檢測(cè)方法[J]. 中國(guó)藥學(xué)雜志,2012,47(21):1698-1702.

[22] YIN JY, XU YH, LI J, et al.Analysis of quinolizidine alkaloids in Sophora flavescens Ait.by capillary electrophoresis with tris(2.2'-bipyridyl)rutheniμm (II)-based electrochemiluminescence detection[J].Talanta,2012,5(1):38-42.

[23] WANG HY, LU YC, CHEN J, et al.Subcritical water extraction of alkaloids in Sophora flavescens Ait. and determination by capillary electrophoresis with field-amplified sample stacking[J].J Pharm Biomed Anal,2012,58(25):146-151.

[24] SONG JZ,XU HX,TIAN SJ,et al.Determination of quinolizidine alkaloids in traditional Chinese herbal drugs by nonaqueous capillary electrophoresis[J].J Chromatogr A,2009,857(1-2):303-311.

[25] 李利軍,孫科,吳美艷,等.電堆集-場(chǎng)放大進(jìn)樣非水毛細(xì)管電泳法測(cè)定苦參中的三種生物堿[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào),2013,29(2):154-158.

[26] 姚慧琴,高作寧,韓曉霞,等.苦參堿類生物堿在玻碳電極上的直接電化學(xué)行為及電分析方法研究[J].中國(guó)中藥雜志,2009,30(10):765-768.

[27] 黃曉文,范華均,黃慶華,等.氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定苦參中生物堿[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè), 2009,45(2):190-191,230.

[28] 朱燕萍,王軍.LC-MS法測(cè)定苦參總堿片中3種生物堿的含量[J].陜西中醫(yī),2012,33(1): 92-93.

[29] ZHANG L,LIU WT,ZHANG RW,et al.Pharmacokinetic study of matrine, oxymatrine and oxysophocarpine in rat plasma after oral administration of Sophora flavescens Ait. extract by liqμid chromatography tandem mass spectrometry[J]. J Pharm Biomed Anal，2008,47(4):892-898.

[30] LIU GO, DONG J, WANG H, et al. Characterization of alkaloids in Sophora flavescens Ait. by high performance liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry[J].J Pharm Biomed Anal，2011,54(5):1065-1072.

[31] LING JY, ZHANG GY, CUI ZJ, et al. Supercritical fliud extraction of quinolizidine alkaloids from Sophora flavescens Ait. and purification by high-speed counter-current chromatography[J].J Chromatogr A，2007,1145(1):123-127.

[32] YANG FQ, QUAN J, ZHANG TY, et al.Preparative separation of alkaloids from the root of Sophora flavescens Ait. by pH-zone-refining counter-current chromatography[J]. J Chromatogr A，2008,822(2):316-320.

[33] 劉志才,畢鴻亮.應(yīng)用紫外分光光度法測(cè)定苦參總堿的含量[J].黑龍江醫(yī)藥,2011,14(3): 174-175.

[34] 龐志功,汪寶琪,王翔,等.用熒光猝滅法測(cè)定苦參堿和氧化苦參堿[J].藥物分析雜志, 2008,18(6):378-380.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

Research Progress on the Determination Methods for Alkaloid inSophoraflavescensAit. and its Preparations.

Niu Tianzeng1, Qiao Yufeng1, Li Minghua1, Li Jianwei2*

(1.Shanxi Zhendong Pharmaceutical Co. Ltd., Changzhi 047100, China;2.Department of Pharmacy, Changzhi Medical College, Changzhi 046000, China)

SophoraflavescensAit. belong to Leguminosae sp., Sophora Linn plant, which main chemical ingredient is alkaloid. It have clearing heat, eliminating dampness, desinsection and dieresis effects in traditional medicine, widely used in traditional Chinese medicine and clinical prescriptions. Modern pharmacology studies suggest it possess effects such as antipathogenic, anti-hepatitis, anti-inflammatory, anti-allergy, relieving asthma, antitumor, antipyretic, antidiarrheal, anti-arrhythmia and anti-myocardial ischemia and so on. This paper summarized determination methods of alkaloid inSophoraflavescensAit. and its preparations in recent years, and to provide basis for its further development and use.

SophoraflavescensAit.; Alkaloid; Matrine; Content Determination

2015-05-15

牛天增(1985-)，男，博士，山西振東制藥股份有限公司工程師，研究方向?yàn)橹兴庂|(zhì)量控制。

李建偉(1973-)，男，長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)樗幬镏苿W(xué)。E-mail: baolingf@126.com

R284.1

A

1673-2197(2015)19-0056-03

10.11954/ytctyy.201519023