山茱萸果核果肉化學(xué)成分差異初探

董海鵬　李軍　姜華　等

【摘要】目的：研究山茱萸果核果肉化學(xué)成分的異同。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱：YWG C18（250mm × 4.6mm，5μm）；流動相：甲醇（A）- 0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫[0～60 min，A- B（15∶[KG-*2]85） →（50∶[KG-*2]50）]；流速：1.0mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：270 nm。結(jié)果：山茱萸果核果肉中共有的成分有5個(gè)，果核中特有的成分有18個(gè)，果肉中特有的成分有5個(gè)。結(jié)論：山茱萸果核果肉成分差異較大，二者不宜同用。

【關(guān)鍵詞】山茱萸；果核；果肉；化學(xué)成分

【中圖分類號】R284.1【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2014）02-0015-02

《中華人民共和國藥典》[1]2010年版規(guī)定山茱萸為山茱萸科植物山茱萸的干燥成熟果肉”。但山茱萸市場需求量大，供需矛盾尖銳，加工去核的勞動量大，加之部分的學(xué)者認(rèn)為山茱萸可以與核同用[2]，造成市售山茱萸摻有15～85%的果核。究竟摻核山茱萸能否在臨床使用，是否造成不良反應(yīng)，臨床病例報(bào)道不一，爭論頗大[3]。為了進(jìn)一步指導(dǎo)山茱萸的合理使用，本文采用HPLC-PDA技術(shù)對山茱萸果核果肉的中所含化學(xué)成分的異同進(jìn)行初步研究。現(xiàn)報(bào)道如下：

1儀器與試藥

Waters 600高效液相色譜儀，PDA檢測器，Empower色譜工作站，KQ-50DB超聲波清洗器（昆山超聲波儀器有限公司），METTLER-AE 240型電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。山茱萸果核果肉采自河南省洛陽市嵩縣羅莊村、河南省洛陽市欒川縣十里坪和河南省南陽市西峽，經(jīng)河南科技大學(xué)路西明教授鑒定為山茱萸科植物山茱萸的果核及其果肉。甲醇（色譜純），屈臣氏蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1供試品溶液的制備

2.1.1山茱萸果肉取干燥的山茱萸果肉5g，精密稱定，用50%乙醇回流提取3次，每次1h，溶劑用量50mL，趁熱過濾，合并濾液，減壓濃縮，將其定量轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶，并用50%乙醇定容置至刻度，搖勻，待用。取上述溶液1.0mL，稀釋至50mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.1.2山茱萸果核取適當(dāng)粉碎的山茱萸果核5g，其余操作同“2.1.1”項(xiàng)下山茱萸果肉樣品的制備方法。

2.2色譜條件YWG C18色譜柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇（A） - 0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫 [0～60 min，A- B（15：85） →（50：50）]；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30℃；檢測波長：270nm；進(jìn)樣量：20μL。

2.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取洛陽嵩縣羅莊村山茱萸果核果肉適量，按照“2.1”項(xiàng)下方法制備各供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣，記錄指紋圖譜。結(jié)果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色譜峰相對保留時(shí)間和相對峰面積比值無明顯變化，RSD分別為1.10～2.07%、1.05～1.89%。說明供試品溶液在10小時(shí)之內(nèi)穩(wěn)定。

2.4精密度實(shí)驗(yàn)取洛陽嵩縣羅莊村山茱萸果核果肉適量，按照“2.1”項(xiàng)下方法制備各供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄指紋圖譜。結(jié)果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色譜峰相對保留時(shí)間和相對峰面積比值無明顯變化，RSD分別為0.50～1.21%、0.22～0.87%。說明儀器精密度良好。

2.5重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取洛陽嵩縣羅莊村山茱萸果核果肉適量，按照“2.1”項(xiàng)下方法制備各供試品溶液6份，記錄色譜圖。結(jié)果表明，山茱萸果核果肉成分的各主要色譜峰相對保留時(shí)間和相對峰面積比值的RSD為1.55～2.14%、1.30～1.98%。說明重復(fù)性良好。

2.6樣品測定取不同產(chǎn)地的山茱萸果核果肉（河南省洛陽市嵩縣羅莊村、河南省洛陽市欒川縣十里坪和河南省南陽市西峽），參照“2.1”項(xiàng)下方法制備山茱萸果核果肉供試品溶液，并按照“2.2”項(xiàng)下色譜方法記錄指紋圖譜。樣品典型的HPLC指紋圖譜見圖1。

2.7果核、果肉成分比較對比不同產(chǎn)地的山茱萸果核果肉HPLC指紋圖譜，并結(jié)合相應(yīng)色譜峰的紫外光譜，發(fā)現(xiàn)果核果肉中的成分存在較大的差異，具體結(jié)果見表1

3討論

3.1通過比較山茱萸果核果肉在225、270、300、330nm波長下各樣品的HPLC指紋圖譜，結(jié)果顯示270nm波長下各供試品圖譜中色譜峰的數(shù)目較多，基線漂移較小，故確定色譜條件的檢測波長為270nm。

3.2建立HPLC指紋圖譜時(shí)考察的洗脫條件有：A[0～30 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 （50∶[KG-*2]50） →（100∶[KG-*2]0）]、B[0～30～50 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液（10∶[KG-*2]90） → （50∶[KG-*2]50） →（100∶[KG-*2]0）]、C[0～50～55 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液（15∶[KG-*2]85） → （60∶[KG-*2]40） →（100∶[KG-*2]0）]、D[0～60 min，甲醇-0.1%磷酸水溶液 （15：85） →（50：50）]。通過比較上述條件下各樣品的HPLC圖譜，發(fā)現(xiàn)在洗脫條件D下，樣品中各色譜峰的分離度較好。

3.3根據(jù)各色譜峰的PDA光譜可知：果核特有的成分可分為兩類，即保留時(shí)間在20.202、22.385min的成分，其最大吸收波長在220、260nm，和保留時(shí)間在4.950、6.210、8.190、11.262、12.000、13.911、16.842、19.002、20.202、22.385、23.215、24.285、29.001、30.192、30.999、33.211、45.322、46.680min的成分，其最大吸收波長在220、275nm，其典型的紫外吸收光譜圖分別為圖2中的A和B。果肉中特有的成分可分為兩類，即保留時(shí)間在24.258、30.999min的成分，其最大吸收波長在240nm，和保留時(shí)間在3.988、20.000、53.951min的成分，其典型的紫外吸收光譜圖分別為圖2中的C和B。果核果肉共有的成分的典型的紫外吸收光譜圖分別為圖2中的B。據(jù)文獻(xiàn)[4、5]推測紫外光譜A、B代表沒食子酸類相關(guān)化合物，C代表馬錢苷、莫諾苷等環(huán)烯醚萜類化合物。

3.4研究結(jié)果表明山茱萸果核果肉中的成分存在較大的差異，果核中所含的成分遠(yuǎn)多于果肉中的成分，且其中的成分以沒食子酸類相關(guān)化合物為主。基于此，本文認(rèn)為山茱萸一定要去核使用。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2013.12.05）