T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)在結(jié)核性胸膜炎診斷中的臨床價(jià)值

T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)在結(jié)核性胸膜炎診斷中的臨床價(jià)值

闞 威

目的分析T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)診斷結(jié)核性胸膜炎的臨床價(jià)值。方法選擇初診結(jié)核性胸膜炎患者、惡性胸腔積液患者、非結(jié)核性胸膜炎患者以及同期健康體檢者，經(jīng)T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)各組受試者外周血單個(gè)核細(xì)胞中對(duì)結(jié)核分枝桿菌早期分泌靶向抗原6和培養(yǎng)液蛋白10致敏的T細(xì)胞。結(jié)果結(jié)核性胸膜炎組T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)陽(yáng)性率較其他各組均有所升高（P＜0．05）；T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)對(duì)結(jié)核性胸膜炎診斷的敏感性、特異性以及準(zhǔn)確性均較腺苷脫氨酶高（P＜0．05）。結(jié)論T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)在結(jié)核性胸膜炎輔助診斷中具有臨床價(jià)值。

T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)；結(jié)核性胸膜炎；診斷

本次研究出于分析T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)診斷結(jié)核性胸膜炎價(jià)值的目的，選取我院收治的初診結(jié)核性胸膜炎、惡性胸腔積液、非結(jié)核性胸膜炎以及同期健康體檢者，經(jīng)T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)上述各組受試者的外周血單個(gè)核細(xì)胞中對(duì)結(jié)核分枝桿菌早期分泌靶向抗原6和培養(yǎng)液蛋白10致敏的T細(xì)胞，匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究中資料來(lái)源于2012年5月～2015年7月收治的初診結(jié)核性胸膜炎患者32例、惡性胸腔積液患者27例、非結(jié)核性胸膜炎患者30例以及同期健康體檢者45例，各組基本資料比較無(wú)較大差異（P＞0.05），可比較。

1.2 方法

采集各組受試者外周血標(biāo)本4 ml，將其置于抗凝試管中，試管中應(yīng)置入適量肝素鋰，并及時(shí)進(jìn)行混合，混合后及時(shí)進(jìn)行PBMC分離，且應(yīng)提前將RPMI1640液置于離心管內(nèi)，RPMI1640液應(yīng)控制在4 ml，然后將處理后的抗凝全血置于離心管中，并進(jìn)行混合處理，同時(shí)將3 ml淋巴細(xì)胞分離液置于另外一個(gè)離心管內(nèi)，然后將混勻的8 ml細(xì)胞懸液置于淋巴細(xì)胞分離液上方，進(jìn)行離心運(yùn)動(dòng)，離心時(shí)間應(yīng)控制在20 min左右，離心后采用加樣器進(jìn)行處理，吸取白細(xì)胞層并置于15 ml的離心管當(dāng)中，而后加入11 ml的RPMI1640，離心7 min，分離出上清液。然后置入1 m AIMV，混勻細(xì)胞，并逐漸增加至10 ml，混勻。吸取適量細(xì)胞計(jì)數(shù)，通常應(yīng)控制為10 ul，然后根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)算AIMV量。選取合適的離心管沉淀細(xì)胞，去除上清液，并置于預(yù)算好的AIMV量，制成細(xì)胞工作液。取出板條，并對(duì)各個(gè)標(biāo)本進(jìn)行處理，每個(gè)標(biāo)本制四個(gè)孔，并將AIMV、抗原和陽(yáng)性對(duì)照置于孔內(nèi)，而后均加入細(xì)胞工作液100 ul，在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16～20 h，培育完成后取出板條，將液體棄去，每孔經(jīng)PBS反復(fù)清洗4次，而后繼續(xù)加入50 ul的間隙磷酸酶標(biāo)記的小鼠抗人INF-γ單克隆抗體，在4～8℃條件下溫育1 h，溫育后取出，清除液體，并利用PBS對(duì)各孔進(jìn)行清洗，通常每孔應(yīng)清洗四遍，清洗后置入50 ul顯色底物，并將其置于溫室內(nèi)庇蔭處溫育，溫育時(shí)間為7 min，溫育后利用清水沖洗，晾干，2～3 h后查看結(jié)果。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，若是因?qū)φ湛装唿c(diǎn)形成細(xì)胞不足6，（檢測(cè)孔斑點(diǎn)形成細(xì)胞-陰性對(duì)照孔形成細(xì)胞）×4不低于24，則可視為檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性；若是陰性對(duì)照孔斑點(diǎn)形成細(xì)胞不低于6，檢測(cè)孔斑點(diǎn)形成細(xì)胞為陰性對(duì)照孔的2倍，則視為檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果

2.1 各組檢測(cè)陽(yáng)性率比較

健康對(duì)照組無(wú)陽(yáng)性，結(jié)核性胸膜炎組陽(yáng)性29例，陽(yáng)性率90.63%，惡性胸腔積液組陽(yáng)性2例，陽(yáng)性率7.41%，非結(jié)核性胸膜炎組陽(yáng)性2例，陽(yáng)性率6.67%。結(jié)核性胸膜炎組陽(yáng)性率較其他各組均有所升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。。

2.2 T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對(duì)結(jié)核性胸膜炎診斷中的性能

經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對(duì)結(jié)核性胸膜炎診斷的敏感性為87.50%，特異性為93.7%，準(zhǔn)確率為87.50%。腺苷脫氨酶法對(duì)結(jié)核性胸膜炎診斷的敏感性為68.75%，特異性為84.38%，準(zhǔn)確性為71.88%。前者高于后者（P＜0.05）。

3 討論

結(jié)核性胸膜炎是引起胸腔積液的主要因素之一，研究顯示我國(guó)結(jié)核性胸膜炎患者所占比例在49.5%～54.5%［1］，因這一類疾病缺乏臨床特異性表現(xiàn)，經(jīng)細(xì)胞學(xué)方法進(jìn)行檢測(cè)的陽(yáng)性率相對(duì)較低，胸膜活檢的創(chuàng)傷性使其應(yīng)用具有較大的限制性，分子生物學(xué)雖屬于快速診斷技術(shù)的一種，然而其仍存在較大問(wèn)題，比如假陽(yáng)性較高等，因此對(duì)一種敏感、特異的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)進(jìn)行尋找為當(dāng)務(wù)之急［2］。

T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)時(shí)經(jīng)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)發(fā)展而來(lái)，本次研究中采取結(jié)核分枝桿菌特異性T淋巴細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)來(lái)對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染狀態(tài)進(jìn)行判斷，在結(jié)核性胸膜炎診斷中進(jìn)行應(yīng)用［3］。通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，結(jié)核性胸膜炎組T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)陽(yáng)性率較其他各組均升高；T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)對(duì)結(jié)核性胸膜炎診斷的敏感性、特異性以及準(zhǔn)確性均較腺苷脫氨酶、結(jié)核抗體檢測(cè)方法高。這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相似，由此證實(shí)，T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)在結(jié)核性胸膜炎輔助診斷中具有較大的臨床價(jià)值，意義重大，值得關(guān)注。

［1］馬瑞新．結(jié)核性胸膜炎105例臨床分析［J］．中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2015，7（12）：69-70．

［2］王永生，徐小雅，楊華，等．T-SPOT．TB試劑盒在結(jié)核性胸膜炎臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值［J］．四川醫(yī)學(xué)，2011，32（12）：1854-1856．

［3］劉琛琛，高興林，羅澤如．慢性阻塞性肺疾病患者誘導(dǎo)痰T細(xì)胞巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子的表達(dá)及其意義［J］．實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2014，30（8）：1238-1241．

The Clinical Value of T Cell Spot Test Technology in the Diagnosis of Tuberculous Pleurisy

KAN Wei Baicheng Hospital of Traditional Chinese Medicine in Jilin，Baicheng 137000，China

ObjectiveTo analyze the T cell spot test technology the clinical value of diagnosis of tuberculous pleurisy．MethodsFirst diagnosis of tuberculous pleurisy patients, patients with malignant pleural effusion and tuberculous pleurisy patients and healthy physical examination was selected to study during this period, T Spot TB test subjects in each group，test the targeting antigens 6 early secreted from mycobacterium tuberculosis and Protein 10- sensitized T cells in culture fluid in peripheral blood mononuclear cells．ResultsTuberculous pleurisy group T cells spot test technology test positive rate than other groups were significantly higher （P＜0．05）; T cells spot test technique for diagnosis of tuberculous pleurisy sensitivity， specificity and accuracy were relatively high adenosine deaminase （P＜0．05）．ConclusionT-cell spot test technique in assistant diagnosis of the tuberculous pleurisy has significant clinical value．

T cells spot test technology，Tuberculous pleurisy，The diagnosis

R521．7

B

1674-9316（2015）29-0153-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2015．29．113

137000 吉林省白城中醫(yī)院