中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)研究進(jìn)展

李 洋，邱智東，王偉楠*

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130000）

生物轉(zhuǎn)化是化學(xué)、生物學(xué)和生物工程學(xué)的交叉學(xué)科，是利用生命體、離體組織、細(xì)胞或酶對(duì)特定底物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾和改造，獲得有價(jià)值的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物以滿足化學(xué)品、醫(yī)藥、能源和材料等領(lǐng)域需要的一種技術(shù)，也是與生命和人類活動(dòng)關(guān)系最為密切的自然現(xiàn)象之一[1-2]。生物轉(zhuǎn)化相對(duì)于化學(xué)轉(zhuǎn)化而言具有轉(zhuǎn)化效率高、專屬性強(qiáng)、能耗低、無(wú)污染等優(yōu)勢(shì)，目前已廣泛的應(yīng)用到食品和醫(yī)藥工業(yè)生產(chǎn)當(dāng)中[3-4]?，F(xiàn)代中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)又稱中藥發(fā)酵技術(shù)，是在繼承傳統(tǒng)的中藥炮制發(fā)酵方法的基礎(chǔ)上，吸收微生態(tài)學(xué)的研究成果，并結(jié)合現(xiàn)代的生物轉(zhuǎn)化工程而形成的中藥制藥新技術(shù)[5]。中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)主要分為液體發(fā)酵[6]和固體發(fā)酵兩種形式，而在傳統(tǒng)固體發(fā)酵的基礎(chǔ)上，又發(fā)展出了藥用真菌雙向固體發(fā)酵技術(shù)[7]。目前，國(guó)內(nèi)外科研人員圍繞中藥生物轉(zhuǎn)化領(lǐng)域做了大量的研究，一些工作也取得了非常顯著的成果，因此，本文擬從技術(shù)應(yīng)用的角度對(duì)該領(lǐng)域近幾年的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，并探討生物轉(zhuǎn)化技術(shù)在中藥相關(guān)產(chǎn)品開發(fā)中的意義和可行性。為中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)的推廣提供理論支持，為大宗中藥品種及傳統(tǒng)經(jīng)典名方的二次開發(fā)及深度利用提供新的思路和途徑。

1 傳統(tǒng)中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)

中藥生物轉(zhuǎn)化歷史悠久，早在1 500多年前，人們就開始采用發(fā)酵的方法對(duì)中藥進(jìn)行炮制。傳統(tǒng)中藥發(fā)酵形式一般分為兩類：一類是藥材與面粉混合發(fā)酵，如六神曲[8]、半夏曲[9]等；還有一類是藥材直接進(jìn)行發(fā)酵，如紅曲、淡豆豉、百藥煎等[10]。由于傳統(tǒng)發(fā)酵過程多憑經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行，缺乏規(guī)范性的工藝技術(shù)及適宜的監(jiān)控指標(biāo)，發(fā)酵所得中藥產(chǎn)品質(zhì)量差別較大，難以制定出統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)方法，無(wú)法保證發(fā)酵中藥產(chǎn)品的安全性和穩(wěn)定性，且存在著發(fā)酵時(shí)間長(zhǎng)、占地面積大、勞動(dòng)強(qiáng)度高、衛(wèi)生條件差等問題，因此，隨著現(xiàn)代生物工程技術(shù)的發(fā)展，不斷有研究人員提出新的方法對(duì)中藥發(fā)酵工藝進(jìn)行革新，而傳統(tǒng)的方法逐漸被淘汰或趨于規(guī)范。

2 當(dāng)代中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)

2.1 酶發(fā)酵技術(shù)

酶發(fā)酵技術(shù)就是利用酶所具有的生物催化功能，改變?cè)衔锢砘瘜W(xué)性質(zhì)，將其轉(zhuǎn)化生成有用物質(zhì)的一門技術(shù)。新鮮植物采摘之后，在自然條件下放置一段時(shí)間就會(huì)變質(zhì)，導(dǎo)致這個(gè)過程的主要原因是植物及其內(nèi)生菌所分泌的酶對(duì)原有化學(xué)成分進(jìn)行了生物轉(zhuǎn)化，雖然這種轉(zhuǎn)化的結(jié)果是不可預(yù)期的，但是通過合理的體外設(shè)計(jì)，可以利用這些酶去定向改造中藥的活性成分，達(dá)到增效減毒的作用。喻春皓等[11-12]利用自制復(fù)合酶對(duì)生曬參95%乙醇提取物、人參莖葉及三七莖葉總皂苷等系列中藥有效部位進(jìn)行了酶發(fā)酵，將原生苷轉(zhuǎn)化生成低極性皂苷。這些低極性皂苷具有抗癌、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)等多種藥效作用，還具有化學(xué)穩(wěn)定性高、生物利用度好等特點(diǎn)，因此利用這種技術(shù)研制的產(chǎn)品具有極大的開發(fā)潛力。曹國(guó)瓊等[13]利用神曲與α-淀粉酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、脂肪酶、混合酶分別對(duì)化風(fēng)丹藥母溶液進(jìn)行發(fā)酵，測(cè)定不同組別間的雙酯型生堿類成分即化風(fēng)丹藥母中毒性成分含量的變化，實(shí)現(xiàn)了對(duì)化風(fēng)丹藥母毒性的降低。歐志敏等[14]利用β-葡萄糖苷酶轉(zhuǎn)化牛蒡子苷，希望能夠制備具有治療或預(yù)防慢性腎功能衰竭及腎纖維化、抗病毒、抗腫瘤等功效的牛蒡子苷元，結(jié)果β-葡萄糖苷酶成功地將牛蒡子苷轉(zhuǎn)化成了牛蒡子苷元，也為酶法炮制中藥牛蒡子提供可借鑒和使用的新方法。李秧針等[15]報(bào)道了單寧酶轉(zhuǎn)化沒食子酸單寧生成沒食子酸和葡萄糖的研究。沒食子酸有較強(qiáng)的抗病毒、抗腫瘤等功效，通過酶轉(zhuǎn)化法高效特異性的生產(chǎn)沒食子酸，可以為工業(yè)生產(chǎn)沒食子酸相關(guān)產(chǎn)品提供一條重要的途徑。還有報(bào)道，用酶法轉(zhuǎn)化中藥黃芩并提取黃芩的有效成分，發(fā)現(xiàn)所提黃芩素和漢黃芩素等苷元的含量較傳統(tǒng)方法提取的含量高很多，研究結(jié)果為中藥的提取方法提供了新方向[16]。酶發(fā)酵技術(shù)是現(xiàn)代生物轉(zhuǎn)化技術(shù)中的重要組成部分，在中藥創(chuàng)新研發(fā)過程中將具有舉足輕重的作用。

2.2 組織發(fā)酵技術(shù)

藥物進(jìn)入體內(nèi)后，一般都要經(jīng)過組織器官的轉(zhuǎn)化才能發(fā)揮治療作用，由此而衍生的將動(dòng)物組織當(dāng)作催化媒介的一種的生物轉(zhuǎn)化技術(shù)，即組織發(fā)酵技術(shù)。該技術(shù)多是運(yùn)用組織的整個(gè)體系發(fā)揮作用，這類技術(shù)不僅為中藥的生物轉(zhuǎn)化開辟了新方向，而且也對(duì)臨床用藥具有重要的指導(dǎo)意義。隋志剛等[17]曾報(bào)道過，利用家兔的腸道對(duì)烏頭堿進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，并采用高效液相色譜-電噴霧電離-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometry，LC-ESI-MS/MS）的方法對(duì)家兔腸道內(nèi)的烏頭堿代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，結(jié)果表明，烏頭堿被轉(zhuǎn)化生成毒性更小的其他生物堿類成分，起到了減毒的作用。同時(shí)，有研究表明[18]，復(fù)方丹參片經(jīng)肝臟中肝藥酶轉(zhuǎn)化后，所形成的代謝產(chǎn)物會(huì)提高人體某種細(xì)胞色素450（cytochrome 450，CYP450）酶的活力，而這種酶存在著使致癌物質(zhì)活化的潛在危險(xiǎn)性，因此復(fù)方丹參片不宜長(zhǎng)期使用。楊秀偉等[19-20]以人腸內(nèi)細(xì)菌為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，將人腸作為轉(zhuǎn)化物質(zhì)，對(duì)芍藥苷進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，并做了一系列的對(duì)照、檢測(cè)試驗(yàn)。研究結(jié)果表明，腸內(nèi)菌是中藥進(jìn)入腸內(nèi)發(fā)生代謝的主要催化物質(zhì)，起到了改變藥性、提高生物利用度等作用，不但在中藥有效成分和中藥毒性成分的發(fā)現(xiàn)上有重要意義，并且在腸內(nèi)微生態(tài)變化相關(guān)的疾病治療上也有著重要的作用。馮培生等[18]利用大鼠腸道厭氧菌群對(duì)嘔吐毒素進(jìn)行體外轉(zhuǎn)化，生成脫環(huán)氧-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇，定量測(cè)定結(jié)果顯示，大腸中盲腸菌群代謝能力最強(qiáng)。劉揚(yáng)子等[21]利用志愿者的糞便進(jìn)行了人腸內(nèi)菌叢培養(yǎng)及其對(duì)延胡索甲素和延胡索乙素的生物轉(zhuǎn)化，目的是在于觀察延胡索素在人腸內(nèi)是否能被穩(wěn)定吸收。通過研究結(jié)果表明，延胡索所含主要成分生物堿類化合物能良好地吸收進(jìn)入體循環(huán)，可以作為評(píng)價(jià)和控制延胡索質(zhì)量的標(biāo)示物，為確定延胡索的有效成分及其效應(yīng)物質(zhì)提供了人腸吸收方面的科學(xué)理論依據(jù)。還有關(guān)于人體轉(zhuǎn)化中藥有毒物質(zhì)的研究結(jié)果表明[22]，在受試條件下根據(jù)體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化和代謝不穩(wěn)定的特性，可以判斷出服用藥物的原形化合物為毒性成分。實(shí)驗(yàn)的意義在于從中藥成分的體內(nèi)過程可以確定毒性效應(yīng)物質(zhì)，然后找到原形化合物，為保障中藥的安全性和有效性做出了貢獻(xiàn)。

2.3 植物細(xì)胞培養(yǎng)

植物細(xì)胞培養(yǎng)是在離體條件下，將愈傷組織細(xì)胞或其他易分散的組織細(xì)胞置于特定液體培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，并以擴(kuò)繁后的細(xì)胞體為媒介進(jìn)行目標(biāo)代謝產(chǎn)物的合成或轉(zhuǎn)化，以達(dá)到提高活性成分含量或增加新的物質(zhì)基礎(chǔ)等目的的一項(xiàng)技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)主要應(yīng)用于植物有效成分的生產(chǎn)和生物轉(zhuǎn)化這兩個(gè)方面。隨著人口的激增和人們對(duì)自然資源不計(jì)后果的開發(fā)，很多珍貴植物資源已經(jīng)滅絕或者正面臨著滅絕的危機(jī)。利用植物細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)植物中的天然有效成分可能將會(huì)成為解決這種危機(jī)的有效方法。早在1984年日本的Mitsui石化公司就利用紫草的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)紫草寧，規(guī)模達(dá)到750 L，產(chǎn)物最終質(zhì)量濃度達(dá)到1 400 mg/L[23]。而近些年來(lái)這項(xiàng)技術(shù)更是廣泛被應(yīng)用到中藥活性成分合成與修飾的領(lǐng)域中。張志強(qiáng)等[24]對(duì)海巴戟天細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，使得海巴戟天懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)速率明顯加快，蒽醌含量增加，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為中藥的細(xì)胞培養(yǎng)提供重要參考。王晗等[25]利用植物細(xì)胞培養(yǎng)的方法，對(duì)臺(tái)灣金線蓮進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，獲得了藥理作用極為廣泛的金線蓮苷，為大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn)這種稀缺的野生資源奠定了理論基礎(chǔ)。王和勇等[26]通過水楊酸和硝酸銀的配伍誘導(dǎo)，實(shí)現(xiàn)了植物細(xì)胞培養(yǎng)中誘導(dǎo)子之間的協(xié)同作用，并成功獲得發(fā)酵產(chǎn)物紫杉醇39 mg/L，比兩個(gè)誘導(dǎo)子單獨(dú)作用時(shí)獲得紫杉醇最高含量之和還高出50%。李萍等[27]對(duì)懷牛膝懸浮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明細(xì)胞培養(yǎng)液中的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物符合用藥標(biāo)準(zhǔn)，可以作為懷牛膝藥材活性成分的替代品使用。還有研究表明，培養(yǎng)紫衫植物干細(xì)胞能夠獲得具有抗癌活性的松香烷型三環(huán)二萜、美麗紅豆杉素A和美麗紅豆杉素B，產(chǎn)率較高，為將來(lái)臨床用藥提供物質(zhì)基礎(chǔ)[28]。利用植物細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行有效成分的合成或修飾活性成分結(jié)構(gòu)，已經(jīng)取得了令人矚目的成就。隨著這方面研究的不斷發(fā)展，植物細(xì)胞培養(yǎng)這項(xiàng)技術(shù)將在生產(chǎn)有價(jià)值的植物天然成分方面發(fā)揮越來(lái)越大的作用，將會(huì)有越來(lái)越多的天然植物成分可以實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的發(fā)酵生產(chǎn)。

2.4 微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)

微生物轉(zhuǎn)化法是利用微生物在代謝過程中產(chǎn)生的某種或者某一系列的物質(zhì)能夠?qū)ο鄳?yīng)的中藥成分進(jìn)行加工修飾，起到增效減毒，產(chǎn)生活性成分等作用。如口服人參皂苷類成分的腸內(nèi)微生物轉(zhuǎn)化[29]。崔磊等[30]從土壤中分離得到所需菌株，對(duì)人參進(jìn)行了直接液體發(fā)酵和酸處理后發(fā)酵，通過對(duì)比發(fā)酵前后稀有皂苷含量，結(jié)果顯示發(fā)酵后的稀有皂苷含量明顯增加。本研究對(duì)利用微生物轉(zhuǎn)化法提高人參的生物活性和制備抗腫瘤稀有人參皂苷均具有重要的指導(dǎo)意義。另有報(bào)道，白靜等[31]利用酵母菌液體發(fā)酵的方法發(fā)酵艾葉水提物，研究表明艾葉發(fā)酵物對(duì)組胺具有拮抗作用，能致豚鼠離體小腸平滑肌收縮，對(duì)未來(lái)指導(dǎo)臨床有著重要意義。TAO J Y等[32]采用白腐菌對(duì)6種中藥進(jìn)行發(fā)酵研究，通過比較中藥發(fā)酵前后的降血脂作用的變化，發(fā)現(xiàn)有部分中藥經(jīng)過發(fā)酵以后降血脂的功效明顯增強(qiáng)；戴萬(wàn)生等[33]利用酵母菌發(fā)酵大黃后，測(cè)定其發(fā)酵品中的結(jié)合蒽醌的含量較原有含量有所降低，緩和了大黃的瀉下作用；朱新術(shù)等[34]報(bào)道了利用乳酸菌發(fā)酵黃芪，提高了黃芪中粗多糖的提取率；劉亮鏡等[35]研究發(fā)現(xiàn)，用朱紅栓菌發(fā)酵馬錢子，能達(dá)到對(duì)有毒藥材馬錢子“去毒”與“存效”并重的目的；李國(guó)紅等[36]用枯草芽孢桿菌對(duì)50種中藥進(jìn)行發(fā)酵，并對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物的抗菌活性進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)部分中藥的發(fā)酵產(chǎn)物抗菌活性增強(qiáng)、部分中藥活性降低、還有部分中藥活性不變。

還有一種微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)是利用植物內(nèi)生菌對(duì)中藥進(jìn)行轉(zhuǎn)化，由于內(nèi)生菌的優(yōu)勢(shì)在于對(duì)植物的體內(nèi)環(huán)境較為熟悉，很多與寄生植物具有相同或相近的代謝系統(tǒng)，對(duì)絕大多數(shù)的植物代謝產(chǎn)物都能夠?qū)崿F(xiàn)結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)化，降低了中藥生物轉(zhuǎn)化菌種篩選的盲目性。江東福等[37]在研究中發(fā)現(xiàn)，內(nèi)生真菌對(duì)龍血樹中血竭的形成具有很強(qiáng)的促進(jìn)作用，可使血竭的產(chǎn)量提高，而且接種于瀕死的龍血樹同樣可促進(jìn)血竭樹脂的形成和積累。付少彬等[38]報(bào)道，從藥用植物蛇足石杉中分離內(nèi)生菌，篩選具有轉(zhuǎn)化烏蘇酸能力的菌株，利用內(nèi)生菌對(duì)天然產(chǎn)物烏蘇酸進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化。結(jié)果證明植物內(nèi)生菌可以對(duì)烏蘇酸的結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，產(chǎn)生多種多樣的物質(zhì)基礎(chǔ)，為進(jìn)一步開發(fā)具有不同藥理活性的相關(guān)產(chǎn)物提供了方法和技術(shù)的支持。王園園等[39]用內(nèi)生菌轉(zhuǎn)化蘆丁，并得到轉(zhuǎn)化物槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷，該轉(zhuǎn)化物抗氧化能力很強(qiáng)，可以替代蘆丁使用。劉發(fā)貴等[40]建立了藥用植物內(nèi)生菌對(duì)青藤堿的生物轉(zhuǎn)化模型，從藥用植物內(nèi)生菌中篩選出5株對(duì)青藤堿具有轉(zhuǎn)化能力的菌株，得到了不同的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，其研究結(jié)果為青藤堿的結(jié)構(gòu)改造和尋找活性更強(qiáng)的先導(dǎo)化合物提供了有效途徑。微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)操作較為簡(jiǎn)便、易于放大、微生物種類繁多、代謝譜廣，是實(shí)現(xiàn)中藥增效減毒和深度開發(fā)利用的關(guān)鍵技術(shù)。

2.5 雙向固體發(fā)酵技術(shù)

20世紀(jì)90年代，莊毅等[41-43]提出藥用真菌“新型”固體發(fā)酵（簡(jiǎn)稱雙向型固體發(fā)酵）概念，即采用具有活性成分的藥材或藥渣作為基質(zhì)進(jìn)行藥用真菌發(fā)酵，它們之間由于真菌的生長(zhǎng)，會(huì)產(chǎn)生一系列復(fù)雜的分解合成代謝，產(chǎn)生新成分和新功能，使發(fā)酵的作用從原來(lái)僅由農(nóng)副產(chǎn)品構(gòu)成的營(yíng)養(yǎng)機(jī)制提供真菌生長(zhǎng)所需要的碳、氮等養(yǎng)分的單向型，發(fā)展到應(yīng)用真菌的生理活動(dòng)使藥性基質(zhì)中的有效成分發(fā)生轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生新的成分，從而具有雙向型，形成了新型固體發(fā)酵。目前只有“雙向發(fā)酵工程”最能有效的被用來(lái)開發(fā)藥渣，以產(chǎn)生各種有用的藥性菌質(zhì)，它作為一種新資源可繼續(xù)研發(fā)成新藥或保健品等[44]。

雷公藤被廣泛用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、各種腎病、癌癥及系統(tǒng)性紅斑狼瘡等病癥的治療且療效顯著，然而其不良反應(yīng)較大，限制了它的應(yīng)用。張普照等[45-47]運(yùn)用雙向性固體發(fā)酵技術(shù)，采用多種藥用真菌與雷公藤組成發(fā)酵組合，對(duì)其發(fā)酵前后的毒性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)發(fā)酵后雷公藤的主要毒性成分雷公藤甲素的量大幅降低，而其生物堿的量變化不大，即降低了雷公藤毒性的同時(shí)也保持了雷公藤的藥效。張李陽(yáng)等[48-49]對(duì)于藥用真菌及其發(fā)酵產(chǎn)物對(duì)愛拔益加肉雞（AA肉雞）的免疫功能的影響進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)藥用真菌與中藥結(jié)合的發(fā)酵產(chǎn)物能明顯提高肉雞的免疫能力，后期又對(duì)發(fā)酵工藝中菌質(zhì)中化學(xué)成分的變化進(jìn)行了研究，為相關(guān)菌質(zhì)新藥的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。潘揚(yáng)等[50]對(duì)馬錢子雙向固體發(fā)酵前后的生物堿的量及高效液相色譜指紋譜的變化進(jìn)行了研究，也證明雙向發(fā)酵前后其類生物堿的質(zhì)和量均發(fā)生了明顯的變化，為馬錢子的減毒增效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究做了一定的研究工作。付建國(guó)[51]采用大型食藥兼用菌，對(duì)西洋參進(jìn)行固體發(fā)酵，并測(cè)定了發(fā)酵產(chǎn)物稀有成分人參皂苷CK、人參皂苷Rh2、人參皂苷Rg3的含量，其含量較西洋參藥材提高了幾倍至十幾倍。雙向性固體發(fā)酵工程體現(xiàn)了藥用真菌與中藥材之間的有機(jī)結(jié)合，二者交叉可形成大量的不同性質(zhì)的發(fā)酵組合，故而雙向性固體發(fā)酵技術(shù)展現(xiàn)了極為美好的前景。

3 結(jié)論與展望

不同的生物轉(zhuǎn)化技術(shù)具有不同的特點(diǎn)，在當(dāng)前技術(shù)水平下，也存在各自的問題：生命體和離體組織的轉(zhuǎn)化可以從宏觀的角度真實(shí)反映物質(zhì)在體內(nèi)的變化，為闡明中藥活性物質(zhì)基礎(chǔ)和功效機(jī)理提供有力的支持，但轉(zhuǎn)化過程很難控制，很多物理、化學(xué)和生物反應(yīng)參雜其中，不同生命個(gè)體轉(zhuǎn)化差異較大，轉(zhuǎn)化產(chǎn)物比較復(fù)雜；酶轉(zhuǎn)化法雖然條件明確、機(jī)理清晰、效率高、專屬性強(qiáng)，但酶的成本相對(duì)較高，對(duì)轉(zhuǎn)化條件要求也較為苛刻，很多反應(yīng)只能在實(shí)驗(yàn)室級(jí)別實(shí)現(xiàn)，故限制了其在工業(yè)上的應(yīng)用；微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)是在中藥生物轉(zhuǎn)化中應(yīng)用最為成熟和廣泛的一種技術(shù)，具有成本低、污染小、效率高等特點(diǎn)，在合理的菌種篩選基礎(chǔ)上，還可以確保生產(chǎn)和使用的安全性，目前在中國(guó)已形成良好的產(chǎn)業(yè)基礎(chǔ)。

近些年來(lái)，中醫(yī)藥越來(lái)越被世界所認(rèn)可和接受，隨著丹參等藥材的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)入美國(guó)和歐洲藥典后，中藥國(guó)際化腳步也越來(lái)越快。在這種情況下，為了確保中藥的安全有效性，提高中藥產(chǎn)品質(zhì)量和科技含量，對(duì)中藥進(jìn)行炮制和加工顯得尤為重要?，F(xiàn)代中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)為中藥的發(fā)展帶來(lái)了新的啟發(fā)，也解決了許多傳統(tǒng)方法沒能解決的問題，是中藥乃至天然藥物活性成分生產(chǎn)與結(jié)構(gòu)修飾所采用的最佳手段之一，也是利用現(xiàn)代生物技術(shù)助推中藥產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要途徑。通過中藥生物轉(zhuǎn)化技術(shù)的推廣，可以為藥材的深度開發(fā)、新活性成分的發(fā)現(xiàn)、解決藥用物質(zhì)來(lái)源不足等問題提供有力的支撐，為推進(jìn)我國(guó)中醫(yī)藥事業(yè)的現(xiàn)代化和國(guó)際化進(jìn)程，提升中國(guó)民族醫(yī)藥國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力注入強(qiáng)大的活力。

[1]LAVADO R,SCHLENK D.Microsomal biotransformation of chlorpyrifos,parathion and fenthion in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)and coho salmon(Oncorhynchus kisutch):mechanistic insights into interspecific differences in toxicity[J].Aquat Toxicol,2011,101(1):57-63.

[2]MA B P,FENG B,HUANG H Z,et al.Biotransformation of Chinese herbs and their ingredients[J].World Sci Technol,2010,12 (2):150-154.

[3]盧定強(qiáng)，韋 萍，周 華，等.生物催化與生物轉(zhuǎn)化的研究進(jìn)展[J].化工進(jìn)展，2004，23（6）：585-589.

[4]馮 冰，馬百平.天然產(chǎn)物的生物轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展[J].中草藥，2005，36（6）：941-945.

[5]李 爽，王延年.淺談中藥發(fā)酵炮制技術(shù)[C]//中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥炮制分會(huì)2011 年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集，貴陽(yáng)：中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥炮制分會(huì)，2011.

[6]史同瑞，劉 宇，王 爽，等.現(xiàn)代中藥發(fā)酵技術(shù)及其優(yōu)勢(shì)[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2014，34（1）：51-54.

[7]莊 毅，洪 凈.藥用真菌雙向性固體發(fā)酵工程與中成藥藥渣再開發(fā)[J].中國(guó)中藥雜志，2006，31（22）：1918-1919.

[8]鄒吉野，李 瑩，王德馨，等.六神曲的發(fā)酵菌種分離及純種發(fā)酵考察[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（16）：12-14.

[9]王世宇，任振麗，傅超美，等.半夏曲發(fā)酵處方的篩選[J].華西藥學(xué)雜志，2009，24（4）：367-369.

[10]賈 冰.淺談中藥發(fā)酵技術(shù)[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2013（5）：26-27.

[11]喻春皓，吳 潔.生曬參乙醇提取物直接酶法轉(zhuǎn)化及液質(zhì)分析[J].中成藥，2012，34（9）：1747-1752.

[12]喻春皓，魏 峰，何志敏.酶法修飾人參莖葉總皂苷及其HPLC 圖譜研究[J].中草藥，2007，38（1）：46-50.

[13]曹國(guó)瓊，張永萍，徐 劍，等.神曲與酶對(duì)化風(fēng)丹藥母發(fā)酵過程中毒性成分的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21（4）：1-4.

[14]歐志敏，楊根生，馮 海.β-葡萄糖苷酶水解牛蒡子苷制備牛蒡子苷元[J].藥物生物技術(shù)，2009，16（5）：443-446.

[15]李秧針，邱樹毅，保玉心，等.單寧酶發(fā)酵生產(chǎn)的研究進(jìn)展[J].中國(guó)釀造，2008，26（11）：1-6.

[16]喻春皓，張海江，張 萍.中草藥生物轉(zhuǎn)化工程與中醫(yī)藥創(chuàng)新[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（6）：1-4.

[17]隨志剛，姜雅秋，劉志強(qiáng)，等.烏頭堿在家兔腸道內(nèi)代謝產(chǎn)物的LC/ESIMSn研究[J].化學(xué)學(xué)報(bào)，2009，21（67）：2439-2444.

[18]馮培生，沈建忠，吳海霞，等.體外大鼠腸道菌群代謝脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的研究[J].分析化學(xué)，2012，40（1）：119-123.

[19]楊秀偉，徐 嵬.中藥化學(xué)成分的人腸內(nèi)細(xì)菌生物轉(zhuǎn)化模型和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的建立[J].中國(guó)中藥雜志，2011，36（1）：19-26.

[20]楊秀偉，楊曉達(dá)，王 瑩.中藥化學(xué)成分腸吸收研究中Caco-2 細(xì)胞模型和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的建立[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào)，2007，5（6）：634-641.

[21]劉揚(yáng)子，楊鑫寶，楊秀偉，等.延胡索甲素和乙素的人源腸內(nèi)菌叢生物轉(zhuǎn)化及在人源Caco-2 細(xì)胞單層模型的吸收轉(zhuǎn)運(yùn)[J].中國(guó)中藥雜志，2013，38（1）：112-118.

[22]楊秀偉.基于體內(nèi)過程的中藥毒性成分和毒性效應(yīng)物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)策略[J].中華中醫(yī)藥雜志，2007，22（2）：67-72.

[23]宋關(guān)玲，楊 謙，高興喜，等.植物細(xì)胞培養(yǎng)中天然植物成分生產(chǎn)在工業(yè)上的應(yīng)用[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，5（31）：78-80.

[24]張志強(qiáng)，李永成.海巴戟天愈傷組織誘導(dǎo)及細(xì)胞懸浮培養(yǎng)試驗(yàn)[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，41（4）：108-112.

[25]王 晗，雷曉婧，吳 瓊，等.臺(tái)灣金線蓮細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及其培養(yǎng)條件優(yōu)化的研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（36）：12888-12889.

[26]王和勇，羅 恒，孫 敏.誘導(dǎo)子在藥用植物細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用[J].中草藥，2004，35（8）：3-7.

[27]李 萍，趙喜亭，李明軍，等.懷牛膝懸浮培養(yǎng)細(xì)胞生理生化特性研究[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，44（2）：106-110.

[28]LEE E K,JIN Y W,PARK J H,et al.Cultured cambial meristematic cells as a source of plant natural products[J].Nat Biotechnol,2010,28(11):1213-1217.

[29]HASEGAWA H.Proof of the mysterious efficacy of ginseng:basicand clinical trials:metabolic activation of ginsenoside:deglycosylation by intestinal bacteria and esterification with fatty acid[J].J Pharmacol Sci,2004,95:153-157.

[30]崔 磊，金護(hù)定，尹成日.人參總皂苷的發(fā)酵及其產(chǎn)物的抗癌活性研究[J].延邊大學(xué)學(xué)報(bào)，2014（4）：314-319.

[31]白 靜，韓 婷，胡 雷，等.艾葉水提物及其發(fā)酵物對(duì)豚鼠離體小腸平滑肌收縮性的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013（7）：104.

[32]TAO J Y,ZHENG G H,ZHAO L,et al.The anti-hyperlipidemia activities of six herbs before and after fermentation with white rot fungi[J].J Chin Pharm Sci,2009,18(2):136-140.

[33]戴萬(wàn)生，趙榮華.發(fā)酵法對(duì)大黃蒽醌類成分含量的影響[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2005，26（1）：38-39.

[34]朱新術(shù)，楊志強(qiáng)，李建喜，等.發(fā)酵黃芪的乳酸菌的馴化及其與黃芪相互作用研究[J].中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，2008，20（5）：450-451.

[35]劉亮鏡，曹 亮，蔣亞平，等.馬錢子經(jīng)朱紅栓菌發(fā)酵前后毒性及鎮(zhèn)痛、抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，25（3）：205-208.

[36]李國(guó)紅，張克勤，沈月毛.枯草芽孢桿菌對(duì)50 種中藥的發(fā)酵及抗菌活性檢測(cè)[J].中藥材，2006，29（2）：154-157.

[37]江東福，馬 萍，楊 靖，等.9568D 鐮孢霉作用于死態(tài)龍血樹形成血脂的研究[J].應(yīng)用生態(tài)學(xué)報(bào)，2003，14（3）：477-478.

[38]付少彬，楊峻山，崔晉龍，等.藥用植物內(nèi)生菌對(duì)烏蘇酸的微生物轉(zhuǎn)化篩選[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2011，8（16）：1225-1228.

[39]王園園，余伯陽(yáng)，李 星，等.灰色鏈霉菌對(duì)蘆丁的生物轉(zhuǎn)化及產(chǎn)物的抗氧化活性[J].中國(guó)天然藥物，2006，4（1）：66-69.

[40]劉發(fā)貴，潘 燁，鄧艾平，等.藥用植物內(nèi)生菌對(duì)青藤堿的微生物轉(zhuǎn)化篩選[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2014，2（26）：268-272.

[41]蘇明聲，謝小梅，羅閎丹，等.雷公藤解毒持效雙向發(fā)酵工藝的建立[J].菌物學(xué)報(bào)，2010，29（2）：294-299.

[42]謝小梅，賀 婧，羅閎丹，等.靈芝雙向發(fā)酵雷公藤的解毒持效作用[J].中草藥，2009，40（12）：1925-1929.

[43]莊 毅.菌質(zhì)中藥的一個(gè)新領(lǐng)域[J].中國(guó)新藥與臨床藥理，1992，3（2）：49-50.

[44]莊 毅.菌物與藥物[J].中國(guó)食用菌，2004，23（3）：31.

[45]張普照，楊麗娟，侯志帆，等.雷公藤雙向固體發(fā)酵過程中的化學(xué)成分變化研究[J].中國(guó)食用菌，2010，16（10）：59-62.

[46]王衛(wèi)倩，戴丹丹，羅閎丹，等.靈雷菌質(zhì)的急性毒性實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)食用菌，2008，27（3）：36-38.

[47]馬偉光，畢 云，黃之鐠，等.雷公藤固態(tài)生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物減毒增效作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中草藥，2010，41（6）：927-930.

[48]張李陽(yáng)，周業(yè)飛，張敦林.藥用真菌發(fā)酵及其產(chǎn)物對(duì)AA 肉雞免疫功能及生長(zhǎng)的影響[J].畜牧與獸醫(yī)，2005，37（6）：9-12.

[49]阮 鳴，張李陽(yáng)，陳玉勝，等.芝芪菌質(zhì)中化學(xué)成分的動(dòng)態(tài)變化[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（28）：12313-12314.

[50]潘 揚(yáng)，張 弦，蔣亞平，等.雙向發(fā)酵前后馬錢子生物堿含量及其HPLC 指紋譜的比較[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，22（6）：362-365.

[51]付建國(guó).人參皂苷微生物轉(zhuǎn)化的研究[J].長(zhǎng)春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)博士論文，2004.