緣毛紫菀化學(xué)成分研究

邊 櫻，馮天龍，張朝鳳，許翔鴻，張 勉

(中國藥科大學(xué)生藥學(xué)研究室，江蘇南京 211198)

緣毛紫菀(Aster souliei Franch.)為菊科紫菀屬植物，分布于甘肅、青海、四川、云南、西藏等地海拔2700～4000 m的高山針葉林體外緣、灌叢以及山坡草地或河灘草壩［1］。緣毛紫菀的頭狀花序是藏藥藏紫菀的來源之一，性溫，味辛，具有潤下氣、止咳等功能，臨床上主要用于支氣管炎、咳痰、肺結(jié)核咳血、喉痹和小便不利等的治療［2］?，F(xiàn)代研究表明緣毛紫菀具有抗菌和抗腫瘤活性［3］。緣毛紫菀的化學(xué)成分研究較少，為了闡明緣毛紫菀中的化學(xué)成分并為進(jìn)一步的抗菌、抗腫瘤等藥理活性的研究奠定基礎(chǔ)，本課題組對緣毛紫菀的化學(xué)成分進(jìn)行了研究。目前從緣毛紫菀頭狀花序中分離鑒定了9個化合物，主要為黃酮類化合物，分別為槲皮素(quercetin，1)、芹菜素(apigenin，2)、山柰酚(kaempferol，3)、柚皮素(naringnin，4)、芹菜素－7－O－β－D－吡喃葡萄糖苷(apigenin－7－O－β－D－pyranglucos，5)、芹菜素－7－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸苷(apigenin－7－O－β－D－pyranglycuronide，6)、β－谷甾醇(β－sitostero，7)、β－胡蘿卜苷(β－daucosterin，8)和α－菠甾醇－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷(α－spinasteryl－β－D－glucopyranoside，9)，其中化合物4、9為首次從緣毛紫菀中分離得到。

1 儀器材料

Brucker ACF－300、500型核磁共振儀;Agilent 1100LC－ESI/MS型液－質(zhì)聯(lián)用儀;Agilent 1200分析型液相色譜;薄層層析硅膠(GF254)和柱層析硅膠(100～200目、200～300目均為青島海洋化工集團(tuán)公司生產(chǎn));羥丙基葡聚糖凝膠(Sephadex LH－20，Pharmacia公司);MCI gel－CHP－20P分離填料(日本三菱化工);所用試劑均為分析純。

緣毛紫菀藥材于2012年購于西藏拉薩亞朗中藏藥材部，經(jīng)本文作者之一張勉教授鑒定為緣毛紫菀(Aster souliei Franch.)干燥頭狀花序，憑證標(biāo)本存放于中國藥科大學(xué)生藥學(xué)研究室。

2 化學(xué)成分分離與鑒定

2.1 提取分離

緣毛紫菀干燥頭狀花序(7 kg)，加80%乙醇熱回流提取2次，每次1 h，合并提取液，回收乙醇至無醇味，得總浸膏1.83 kg。將總浸膏混懸在水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇萃取，萃取3次，分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位浸膏。其中乙酸乙酯部位浸膏256.5 g，取乙酸乙酯部位浸膏采用干法拌樣進(jìn)行硅膠柱層析分離，以二氯甲烷－甲醇(100∶0～0∶100)為流動相梯度洗脫，收集各梯度流分，用薄層檢視合并相似的點(diǎn)分為FrA～FrK流分。FrB合并之前靜置底部分別析出黃色顆粒狀化合物1、化合物2的粗品，粗品經(jīng)反復(fù)重結(jié)晶得到化合物1(7.39 g)、化合物2(1.80 g);FrB經(jīng)多次硅膠柱層析后得到化合物7(0.31 g)、化合物3(0.25 g);FrC靜置底部析出白色片狀化合物9粗品，粗品經(jīng)重結(jié)晶得到化合物9(2.19 g);FrC經(jīng)MCI－gel(70%甲醇－水)除色素后，硅膠柱層析的到化合物化合物4(5 mg)、化合物8(28 mg);FrD經(jīng)硅膠柱層析后，采用聚酰胺層析柱(70%甲醇－水)得到化合物5(0.56 g)。正丁醇部位浸膏364.2 g，取正丁醇部位浸膏10 g采用干法拌樣進(jìn)行硅膠柱層析分離，以二氯甲烷－甲醇(5∶1～1∶1)為流動相梯度洗脫得到化合物6粗品，粗品經(jīng)多次聚酰胺柱層析(70%乙醇)洗脫得到化合物6(56 mg)。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1黃色粉末(甲醇);10%硫酸－乙醇顯色劑顯色黃色斑點(diǎn)加深，鹽酸－鎂粉反應(yīng)呈陽性，表明是黃酮類化合物。將化合物1與槲皮素對照品共薄層，多個溶劑系統(tǒng)展開相同Rf值的位置有顏色一致的斑點(diǎn)。故確定化合物1為槲皮素。

化合物2黃色粉末(甲醇);10%硫酸－乙醇顯色劑顯色黃色斑點(diǎn)加深，鹽酸－鎂粉反應(yīng)呈陽性，表明是黃酮類化合物。將化合物2與芹菜素對照品共薄層，多個溶劑系統(tǒng)展開相同Rf值的位置有顏色一致的斑點(diǎn)。故確定化合物2為芹菜素。

化合物3黃色粉末(甲醇);10%硫酸－乙醇顯色劑顯色黃色斑點(diǎn)加深，鹽酸－鎂粉反應(yīng)呈陽性，表明是黃酮類化合物。1H－NMR(500 MHz，DMSO－d6)δ:6.19(1H，d，J=1.8 Hz，H－ 6)，6.44(1H，d，J=1.8 Hz，H－8)，6.92(2H，d，J=8.6 Hz，H－3'，5')，8.03(2H，d，J=8.6 Hz，H－2'，6')，12.47(1H，s，5－ OH)，10.76(1H，s，7－OH)，10.08(1H，s，4'－OH)，9.35(1H，s，3－OH);13C－ NMR(125 MHz，DMSO－ d6)δ:146.8(C－2)，135.8(C－3)，175.8(C－4)，156.5(C－5)，98.5(C－6)，163.8(C－7)，93.5(C－8)，160.6(C－9)，103.0(C－10)，121.6(C－1')，129.4(C－2'，6')，115.4(C－3'，5')，159.1(C－4')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］基本一致，故鑒定化合物3為山柰酚。

化合物4無色針晶(甲醇);ESI－MS m/z 273［M+H］+，271［M+H］－，1H－NMR(300 MHz，CD3OD)δ:7.33(2H，d，J=8.25 Hz，H－2'，6')，6.85(2H，d，J=8.25 Hz，H－3'，5')，5.90(1H，d，J=2.0 Hz，H－8)，5.89(1H，d，J=2.0 Hz，H－6)，5.35(1H，dd，J=3.0，12.6 Hz，H－ 2)，3.15(1H，dd，J=12.6，17.2 Hz，H－ 3a)，2.73(1H，dd，J=3.0，17.2 Hz，H－ 3b);13C－ NMR(75 MHz，CD3OD)δ:80.8(C－ 2)，44.3(C－3)，198.0(C－4)，165.5(C－5)，97.1(C－6)，168.3(C－ 7)，96.2(C－ 8)，164.8(C－ 9)，104.8(C－10)，131.6(C－1')，129.5(C－2'，6')，116.8(C－3'，5')，159.3(C－4')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］基本一致，故鑒定化合物4為柚皮素。

化合物5黃色粉末(甲醇);1H－NMR(300 MHz，DMSO－d6)δ:7.96(2H，d，J=8.7 Hz，H－2'，6')，6.94(2H，d，J=8.7 Hz，H－ 3'，5')，6.84(1H，d，J=2.1 Hz，H－8)，6.45(1H，d，J=2.1 Hz，H－6)，6.86(1H，s，H－3)，5.07(1H，d，J=6.9 Hz，H－1')，3.18 ～3.75(6H，m，H－2'～6').13C－NMR(125 MHz，DMSO－d6)δ:164.1(C－2)，103.0(C－3)，181.8(C－4)，161.3(C－5)，99.4(C－6)， 162.9(C－ 7)，94.7(C－ 8)，156.8(C－ 9)，105.3(C－10)，120.9(C－1')，128.4(C－2'，6')，115.9(C－3'，5')，161.0(C－4')，99.9(C－1″)，73.1(C－ 2″)，76.5(C－ 3″)，69.6(C－4″)，77.2(C－5″)，60.6(C－6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］基本一致，故鑒定化合物5為芹菜素－7－O－β－D－吡喃葡萄糖苷。

化合物6黃色粉末(甲醇);10%硫酸－乙醇顯色劑顯色黃色斑點(diǎn)加深，鹽酸－鎂粉反應(yīng)呈陽性，表明是黃酮類化合物。ESI－MSm/z 445.1［M－H］－。將化合物6與芹菜素－7－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸苷對照品共薄層，多個溶劑系統(tǒng)展開相同Rf值的位置有顏色一致的斑點(diǎn)。故確定化合物6為芹菜素－7－O－β－D－吡喃葡萄糖醛酸苷。

化合物7無色針晶(乙酸乙酯);10%硫酸－乙醇溶液顯紫紅色，將化合物7與β－谷甾醇對照片共薄層，多個溶劑系統(tǒng)展開相同Rf值的位置均有顏色一致的斑點(diǎn)，故確定化合物7為β－谷甾醇。

化合物8白色粉末(甲醇);10%硫酸－乙醇溶液顯紫紅色，將化合物8與β－胡蘿卜苷對照片共薄層，多個溶劑系統(tǒng)展開相同Rf值的位置均有顏色一致的斑點(diǎn)，故確定化合物8為β－胡蘿卜苷。

化合物9白色片狀結(jié)晶(二氯甲烷－甲醇);1H－ NMR(300MHz，C5D5N)δ:0.58 ～1.10(18H，－CH3×6)，3.96－5.03(7H，H－2'～6')，5.05(1H，dd，H－7)，5.07～5.23(2H，m，H－22，23).13C－ NMR(75 MHz，C5D5N)δ:37.1(C－1)，31.9(C－2)，78.3(C－3)，34.5(C－4)，39.5(C－5)，29.8(C－6)，117.6(C－7)，139.3(C－8)，49.4(C－9)，34.3(C－10)，21.5(C－11)，39.9(C－12)，43.2(C－13)，55.1(C－14)，23.1(C－15)，28.7(C－16)，12.0(C－18)，12.8(C－19)，40.9(C－20)，21.1(C－21)，138.4(C－22)，129.4(C－23)，51.2(C－24)，21.4(C－26)，19.0(C－27)，25.5(C－28)，12.3(C－29)，102.1(C－1')，75.1(C－2')，76.9(C－3')，71.6(C－4')，78.4(C－5')，62.7(C－6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定化合物9為α－菠甾醇－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷。

［1］中國科學(xué)院植物研究所.中國高等植物圖鑒:第4冊［M］.北京:科學(xué)出版社，1987:433.

［2］中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中藥志:第2冊［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1982:198.

［3］Zhang Y H，Wang Y L，Cai A H，et al.A bioactive diterpene from the Chinese Herb Aster souliei［J］.Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，2004，13(4):285－287.

［4］陳屏，楊駿山.蒲葵子化學(xué)成分的研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2008，43(21):1669－1670.

［5］管慧娟，張雪，屠鳳娟，等.鐵皮石斛化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，2009，40(12):1873－1876.

［6］潘春媛，張國剛，米文珍.火絨草中的黃酮苷類成分［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2008，26(11):886－888.

［7］熊江，周俊，戴好富，等.多蕊商陸的化學(xué)成分研究［J］.云南植物研究，2002，24(3):401－405.