豬偽狂犬病病毒和豬副豬嗜血桿菌混合感染的診斷與防制

邵　軍，張擁軍（.新疆石河子大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，新疆石河子83000；.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第七師畜牧獸醫(yī)站，新疆奎屯83300）

豬偽狂犬病病毒和豬副豬嗜血桿菌混合感染的診斷與防制

邵軍1，張擁軍2
（1.新疆石河子大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，新疆石河子832000；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第七師畜牧獸醫(yī)站，新疆奎屯833200）

1　發(fā)病情況

2014年6月16日新疆奎屯市某豬場從石河子墾區(qū)某團(tuán)豬場購進(jìn)斷奶仔豬180頭，飼喂?jié)饪s料，并在飼料中加入泔水，該豬群曾經(jīng)做過豬瘟、圓環(huán)病毒滅活苗、鏈球菌蜂膠滅活苗和豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗免疫，發(fā)病之前生長良好。8月25日該批豬發(fā)生咳嗽、呼吸困難、犬坐姿勢、跛行、體溫升高、流涎、嘔吐，剖檢：肺臟心葉、尖葉、膈葉均有大理石樣的變化，腎臟表面有針尖大小的出血點(diǎn)，心包內(nèi)有大量纖維素沉著物，呈現(xiàn)絨毛心，肝臟表面有針尖至拇指大小灰白色壞死灶、腦膜尤其是小腦呈現(xiàn)樹枝狀充血、岀血。畜主發(fā)現(xiàn)病情后應(yīng)用華神聯(lián)抗注射液（黃芪多糖）、頭孢重病克注射液（頭孢噻呋鈉）、高熱救牲（板藍(lán)根）、青霉素、鏈霉素等藥物進(jìn)行治療，均無療效，8月30日前來我站就診，經(jīng)過流行病學(xué)、臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)等綜合確診為豬偽狂犬病病毒和豬副豬嗜血桿菌混合感染，診療過程報(bào)告如下。

2　臨床癥狀

患豬精神沉郁，食欲減退或廢絕，體溫在40.5℃～41.5℃之間，病豬喜歡扎堆，眼屎分泌物較多；呼吸困難，咳嗽，喘氣，口吐白色泡沫，呈腹式呼吸，初期鼻孔流少量的黏性分泌物，后期鼻孔流膿性鼻液；嚴(yán)重的患豬出現(xiàn)嘔吐，張口呼吸，犬坐姿勢，肌肉震顫，四肢運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)，臥倒時(shí)呈游泳狀；前肢腕關(guān)節(jié)或后肢跗關(guān)節(jié)發(fā)生腫脹，走路跛行,站立不穩(wěn);耳朵、頸部、腹部等處皮膚出現(xiàn)紅紫色，尿液呈深黃色，拉羊糞蛋樣的糞便。最后患豬因衰竭而死。發(fā)病數(shù)為108頭，發(fā)病率為60%，死亡數(shù)為36頭，死亡率為20%，病程為3～5 d。

3　病理剖檢

共計(jì)剖檢病死豬6頭，肺臟水腫，肺臟心葉、尖葉、膈葉均有大理石樣的變化，支氣管內(nèi)積有大量泡沫樣的分泌物；心肌冠狀溝附著米黃色膠凍樣沉積物，心包內(nèi)積有淡黃色的積液，心包內(nèi)有大量纖維素沉著物，呈現(xiàn)絨毛心；肝臟表面有針尖至拇指大小灰白色壞死，胸膜表面有干酪樣滲出物附著，腸系膜、腹膜等部位表面沉積大量的纖維素滲出物，盲腸和結(jié)腸粘連成團(tuán)；脾臟腫大呈紫黑色；腦膜尤其是小腦呈現(xiàn)樹枝狀充血、岀血；腎臟腫大，色蒼白，表面有針尖大小的出血點(diǎn)；關(guān)節(jié)腔內(nèi)有少量的積液；其他臟器均有不同程度的敗血癥變化。

4　實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)

4.1涂片鏡檢無菌操作取心包膜滲出物、關(guān)節(jié)腔滲出物、肺、脾臟進(jìn)行涂片，革蘭染色，鏡檢可見到少量革蘭陰性短小桿菌、短絲狀細(xì)菌。

4.2細(xì)菌分離培養(yǎng)取病豬的心包膜滲出物、肺、關(guān)節(jié)腔滲出物分別接種于血液瓊脂平板,經(jīng)37℃培養(yǎng)48 h后，可見邊緣整齊、圓形、扁平、灰白色、半透明不溶血的小菌落，將此菌涂片鏡檢，形態(tài)及染色特征與直接涂片一致。

4.3生化試驗(yàn)將細(xì)菌純化培養(yǎng)后，分別接種生化培養(yǎng)基，結(jié)果表明，該菌能發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵乳糖和甘露醇，M.R.、V-P、醋酸鉛試驗(yàn)陰性，硝酸鹽還原試驗(yàn)陽性。證明是副豬嗜血桿菌。

4.4藥敏試驗(yàn)將細(xì)菌純培養(yǎng)物接種于高壓巧克力瓊脂平板，選用含有頭孢噻呋鈉、阿莫西林、丁胺卡那霉素、慶大霉素、林可霉素、青霉素、氟苯尼考等藥物紙片進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn)（藥敏紙片由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20140202），37℃培養(yǎng)48 h結(jié)果，該菌對阿莫西林、氟苯尼考高敏；對丁胺卡那霉素、頭孢噻呋鈉中敏；對慶大霉素、林可霉素、青霉素低敏。

4.5血清學(xué)檢測采集10頭份病豬的血液，經(jīng)3 000 r/min離心3 min，分離出血清，使用豬偽狂犬乳膠凝集試劑盒（由武漢科前動(dòng)物生物制品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為20140108），結(jié)果為陽性8頭，陽性率為80%（8/10）。

4.6動(dòng)物試驗(yàn)采取乳膠凝集試驗(yàn)陽性的病豬腦在無菌條件下研磨成糊狀，再加入青霉素80萬IU/ mL、鏈霉素100萬μg/mL及5倍量滅菌生理鹽水，置4℃冰箱24 h。以4 000 r/min離心沉淀10 min，取其上清液，頸部皮下注射健康家兔5只，每只4 mL，注射15 h后，3只兔子開始啃咬注射部位，并出現(xiàn)興奮不安的神經(jīng)癥狀，最后均表現(xiàn)角弓反張，抽搐而死。

5　診斷

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、病例剖檢、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，確診該病為豬偽狂犬病病毒和豬副豬嗜血桿菌混合感染。

6　防制措施

6.1深埋死豬，隔離病豬，用2%全無敵﹙山東德州神牛動(dòng)物藥業(yè)生產(chǎn)，主要成分為戊二醛﹚按1∶500比例噴霧消毒，連用14 d，加強(qiáng)滅鼠工作，杜絕飼喂泔水。

6.2全群緊急注射豬偽狂犬活疫苗﹙武漢科前動(dòng)物生物制品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為140425，含豬偽狂犬病病毒（HB-98株）雙基因缺失株，每頭2 mL。間隔一周全群注射副豬嗜血桿菌滅活疫苗﹙武漢科前動(dòng)物生物制品有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為140218﹚，每頭豬2 mL。

6.3注射豬偽狂犬活疫苗24 h后，飼料中加入10%氟苯尼考、10%黃芪多糖粉和多種維生素，連用7 d。6.4注苗24 h后，對患病豬應(yīng)用毒喘至尊注射液（阿莫西林）和神奇注射液（氟苯尼考），分別肌肉注射，每日1次。連用5 d。采取以上措施，經(jīng)過5 d，全群恢復(fù)正常。

7　討論

7.1病因分析飼喂的泔水未加消毒，直接與飼料混在一起,病原有可能由此帶入豬場，另一方面豬場內(nèi)老鼠較多，也有可能攜帶病原傳入豬場。該場未嚴(yán)格消毒，外來人員自由出入，也有可能攜帶病原傳入。副豬嗜血桿菌是豬的常在菌，各種應(yīng)激因素均可誘發(fā)和促進(jìn)本病的發(fā)生和流行。豬偽狂犬病病毒可能造成該批育肥豬機(jī)體抵抗力下降給副豬嗜血桿菌病提供發(fā)病的條件，該豬場飼養(yǎng)密度大，空氣流動(dòng)性差，兩種病原均是通過咳嗽、噴嚏等主要方式傳播該病，造成發(fā)病率較高，臨床癥狀較為嚴(yán)重。

7.2豬偽狂犬病的推薦免疫程序豬偽狂犬病抗體陰性仔豬，在出生后1周內(nèi)滴鼻或肌肉注射免疫；具有豬偽狂犬病母源抗體的仔豬在45日齡左右肌肉注射，每頭份2 mL，每6個(gè)月注苗1次。經(jīng)產(chǎn)母豬，每4個(gè)月免疫1次。后備母豬6月齡左右肌肉注射1次，間隔1個(gè)月后加強(qiáng)免疫1次，產(chǎn)前1個(gè)月左右再免疫1次。種公豬每年春、秋兩季各免疫1次。

豬副豬嗜血桿菌病的推薦免疫程序：種公豬每半年接種1次，后備母豬在產(chǎn)前8～9周齡首免，3周后二免，以后每胎產(chǎn)前4～5周齡免疫1次。仔豬在14日齡首免，3周后二免，每次肌肉注射1頭份，免疫劑量為2 mL/頭份，不論豬只大小。