補腎中藥對H-P-O軸干預的實驗研究進展*

楊麗娟，周惠芳

(1．南京中醫(yī)藥大學，南京 210029;2．云南中醫(yī)學院，昆明 650200)

補腎中藥對H-P-O軸干預的實驗研究進展*

楊麗娟1，2，周惠芳1△

(1．南京中醫(yī)藥大學，南京 210029;2．云南中醫(yī)學院，昆明 650200)

H-P-O性腺軸對女性的月經(jīng)和生殖有重要影響，近年來關于補腎類中藥對性腺軸結構和內(nèi)分泌功能的研究不斷深入?？v觀近年來相關實驗報道，補腎中藥從形態(tài)學、內(nèi)分泌學及神經(jīng)遞質(zhì)學等方面均對H-P-O性腺軸有改善和保護作用，間接證明了中醫(yī)腎主生殖理論的科學性及心(腦)-腎-子宮軸與H-P-O性腺軸的相關性，為今后該領域的中西醫(yī)實驗研究提供了思路。

H-P-O性腺軸;補腎中藥;實驗研究

1977年Besedovsky，HO提出了神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡調(diào)節(jié)理論，下丘腦-垂體-性腺軸(HPG軸)是其中重要的組成部分。下丘腦分泌促性腺激素釋放激素(GnRH)，在正中隆起處經(jīng)垂體門脈系統(tǒng)到達垂體前葉，使垂體前葉分泌并釋放促卵泡激素(FSH)和黃體生成激素(LH)，促性腺激素調(diào)控卵巢的分泌及生殖功能，同時卵巢分泌的性激素又對垂體和下丘腦有反饋調(diào)節(jié)作用，下丘腦、垂體和卵巢之間相互協(xié)調(diào)、相互影響，形成完整而又協(xié)調(diào)的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，即下丘腦-垂體-卵巢軸(H-P-O axis)［1］。這一性腺軸對女性的月經(jīng)和生殖有著極其重要的影響，其功能失調(diào)常導致月經(jīng)不調(diào)、不孕或流產(chǎn)等。中醫(yī)認為腎藏精、主生殖，腎氣的盛衰與生殖關系密切，腎氣盛，天癸至，精血充沛，任通沖盛，才能正常行經(jīng)，兩精相搏才能受孕。諸因損于腎，傷及沖任，可導致腎失封藏、沖任不固，終致不孕或孕后流產(chǎn)?，F(xiàn)代藥理學認為，補腎中藥在激素水平上的調(diào)節(jié)主要體現(xiàn)在對下丘腦-垂體-性腺軸(H-P-G)的調(diào)節(jié)，除對促卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)等有明顯的調(diào)節(jié)作用外，還對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的調(diào)節(jié)作用［2］。目前國內(nèi)有許多研究者進行了與之相關的臨床研究及動物實驗研究，現(xiàn)將近年來的研究情況綜述如下。

1 補腎類中藥對卵巢-子宮的影響

1.1 補腎類中藥對性腺靶器官微結構的影響

張森等［3］研究補腎中藥淫羊藿苷(ICA)促動物生殖作用，給性成熟雌性大鼠不同劑量的ICA，觀察其對大鼠卵巢和子宮質(zhì)量的影響，并通過組織切片觀察其對卵泡發(fā)育和子宮發(fā)育的影響。結果表明，ICA能提高大鼠卵巢和子宮質(zhì)量。組織切片顯示，ICA能明顯促進大鼠卵泡發(fā)育。該研究提示，ICA可以促進大鼠卵巢和子宮的發(fā)育。周惠芳等［4］觀察補腎助孕方對SD大鼠胚胎著床期子宮內(nèi)膜及卵巢的形態(tài)學變化，結果顯示中藥補腎助孕方中、高劑量組與模型組比較，能明顯促進胚胎著床期子宮內(nèi)膜的生長及子宮內(nèi)膜腺體的增生和發(fā)育，并能促進胚胎著床期卵巢黃體細胞的發(fā)育。由此得出中藥補腎助孕方通過促進子宮內(nèi)膜的生長及內(nèi)膜腺體的發(fā)育，使腺體和間質(zhì)發(fā)育同步，促進卵巢黃體細胞的增生和改善黃體細胞的結構，從而提高子宮內(nèi)膜的容受性及改善黃體功能，有利于胚胎著床和發(fā)育。

從上述研究可以看出，補腎類中藥有類激素樣作用，可以促進性腺器官的發(fā)育，增加其質(zhì)量，在微結構方面促進子宮內(nèi)膜腺體和卵巢黃體細胞的發(fā)育，利于胚胎的著床及發(fā)育。

1.2 補腎類中藥對性激素分泌的影響

夏天等［5］運用血清藥理學方法，觀察補腎調(diào)沖方對高雄激素培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細胞增殖與分泌功能的影響。結果顯示，補腎調(diào)沖方含藥血清可改善高雄激素對顆粒細胞功能的抑制狀態(tài)，促進細胞增殖及E2和P的分泌，其作用呈劑量依賴性。并由此推測，補腎調(diào)沖方通過促卵泡發(fā)育、提高雌孕激素水平、改善雌/雄激素比值來調(diào)節(jié)卵巢功能。葛翠蓮等［6］以未成年雌性大鼠為對象，采用放免法檢測補腎健脾方高、中、低劑量組、陽性對照組和空白對照組大鼠血清FSH、LH、E2和P水平;各組大鼠卵巢、子宮稱重并作比較，結果顯示，補腎健脾方組血清FSH、LH、E2、P水平顯著增高，卵巢和子宮質(zhì)量明顯增重。提示該方能提高大鼠生殖激素水平，促進卵巢和子宮的發(fā)育，改善卵巢功能以促進排卵，也說明該方對下丘腦-垂體-卵巢軸功能有整體調(diào)節(jié)作用。

2 補腎類中藥對下丘腦-垂體的影響

2.1 補腎類中藥對下丘腦-垂體超微結構影響

宋春風等［7］以大量醋酸可的松造成大鼠腎陽虛模型，取其垂體制成超薄切片進行電鏡觀察。結果顯示，腎陽虛大鼠垂體內(nèi)分泌細胞存在著不同程度的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體擴張、線粒體空化、細胞變形、核固縮等超微結構損傷。使用益氣補腎中藥后，減輕腎陽虛大鼠超微結構的損傷，提示益氣補腎中藥可能通過調(diào)節(jié)細胞的蛋白質(zhì)和能量代謝，減輕垂體的超微結構損傷，達到糾正腎陽虛證的效應。錢風雷等［8］以溫補腎陽為主、滋補腎陰為輔的補腎中藥，觀察其對長期大運動量游泳運動所致大鼠低血睪酮和下丘腦-垂體-性腺軸(HPG)功能的調(diào)節(jié)作用。實驗結果表明，下丘腦-垂體-性腺軸調(diào)節(jié)功能減退是造成運動性低血睪酮的重要原因，而合理采用補腎中藥能顯著改善運動性低血睪酮大鼠垂體和性腺激素水平，對調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸功能和維持性腺軸各級細胞超微結構的正常和完整性有保護作用。

2.2 補腎類中藥對下丘腦-垂體蛋白表達及神經(jīng)遞質(zhì)的影響

陸煒等［9］觀察補腎中藥對垂體促性腺激素釋放激素(GnRH)受體及其基因表達的影響，將SD大鼠(35 d齡，相當于青春啟動期)分為對照組、滋陰瀉火組和益腎填精組，采用免疫組織化學方法檢測GnRH受體的蛋白表達水平，采用原位雜交組織化學方法檢測GnRH受體mRNA表達水平。結果顯示，給予滋陰瀉火中藥合劑后，大鼠垂體GnRH受體mRNA表達水平顯著下調(diào)，GnRH受體蛋白合成減少;而給予益腎填精中藥合劑后，大鼠垂體GnRH受體mRNA表達水平顯著上調(diào)，GnRH受體蛋白合成增多。由此可見，不同補腎中藥可通過改變垂體GnRH受體及其mRNA表達水平，調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸的功能。張森等［10］通過腺垂體細胞的原代培養(yǎng)技術和半定量RT-PCR技術，觀察補腎中藥淫羊藿苷對大鼠腺垂體合成分泌GTH的影響，建立了腺垂體細胞總RNA的提取，F(xiàn)SH和LH特異基因的PCR擴增體系和條件，并以B-actin為內(nèi)參照與FSH和LH特異基因進行多重比較。結果淫羊藿苷能提高大鼠腺垂體細胞中GTHmRNA水平，但并非與劑量呈線性關系。

沈皓等［11］以正常青春啟動期雌性SD大鼠為實驗動物模型，按隨機數(shù)字表法分為3組，分別喂飼生理鹽水、滋陰瀉火中藥合劑和益腎填精中藥合劑，灌胃法喂飼每日1次，劑量5 ml，共30 d。采用免疫組織化學法及計算機圖像處理技術對下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)、弓狀核和正中隆起3處的GnRH和神經(jīng)肽Y (neuropeptide Y，NPY)進行定量形態(tài)觀察，采用組織勻漿法和放射免疫法測定下丘腦視前區(qū)GnRH含量，采用腦片孵育實驗和高效液相色譜法測定內(nèi)側(cè)基底下丘腦單胺類遞質(zhì)的釋放量，采用推挽灌流技術及放射免疫法測定下丘腦視前區(qū)GnRH和NPY的釋放量，高效液相色譜法測定該部位單胺類遞質(zhì)的釋放量。結果顯示，滋陰瀉火中藥可以顯著抑制下丘腦GnRH周期性分泌中心及緊張性分泌中心GnRH的合成與釋放，而益腎填精中藥則顯著促進其合成與釋放。滋陰瀉火中藥可能通過抑制下丘腦GnRH緊張性分泌中心去甲腎上腺素的釋放，促進下丘腦GnRH周期性分泌中心多巴胺的釋放，并同時促進這兩個GnRH分泌中心NPY的合成和釋放，使下丘腦GnRH神經(jīng)元的功能活動顯著降低，從而明顯抑制下丘腦-垂體的促性腺機能。益腎填精中藥則可能通過降低下丘腦GnRH緊張性分泌中心NPY的合成和釋放，使GnRH神經(jīng)元功能顯著活躍，從而明顯促進下丘腦-垂體的促性腺機能。該實驗可以看出，補腎中藥可能通過對下丘腦GnRH及其相關神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素、多巴胺和NPY合成與釋放的調(diào)節(jié)作用，調(diào)整下丘腦-垂體的促性腺機能。

2.3 補腎類中藥對下丘腦-垂體激素分泌影響

徐紅艷［12］等研究中藥壯陽促孕散，對雌性腎陽虛大鼠垂體性腺軸分泌激素的影響，并初步探討其作用機制。先用氫化可的松造雌性大鼠腎陽虛模型，造模21 d，從試驗第8天開始中藥治療組灌胃中藥壯陽促孕散，陽性對照組灌胃金匱腎氣丸，連續(xù)給藥14 d，放射免疫法測定血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、黃體生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)。結果表明，模型對照組造模后大鼠出現(xiàn)明顯的陽虛癥狀，體質(zhì)量下降，血清中E2、P下降，F(xiàn)SH、LH升高。給藥后，陽性對照組中藥治療組大鼠體質(zhì)量增加，血清中E2、P升高，F(xiàn)SH、LH下降。由此可見，中藥壯陽促孕散可調(diào)節(jié)雌性腎陽虛大鼠血清中FSH、LH、E2和P的分泌，對生殖內(nèi)分泌有促進作用。

李亞麗等［13］用D-半乳糖連續(xù)腹腔注射致亞急性衰老動物模型，造模后灌胃六味地黃湯連續(xù)60 d后，大鼠斷頭取垂體、卵巢。采用全自動微粒子化學發(fā)光免疫分析方法檢測各組大鼠血清LH、E2、FSH含量，原位雜交方法檢測各組大鼠卵巢細胞FSHR 和LHR的變化，Western Bloting法檢測各組大鼠卵巢ER的變化。結果顯示，與正常對照組比較，模型組大鼠垂體指數(shù)和卵巢指數(shù)均明顯降低，血清E2含量明顯降低，LH、FSH升高，ER、FSHR、LHR的表達明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義。與模型組比較，六味地黃湯組垂體指數(shù)和卵巢指數(shù)都明顯升高，血清E2含量明顯上升，LH、FSH降低，ER、FSHR、LHR的表達明顯升高，呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。研究發(fā)現(xiàn)，衰老大鼠的ER、FSHRmRNA和LHRmRNA表達量明顯下降，而六味地黃湯能上調(diào)卵巢的 ER、FSHRmRNA和LHRmRNA水平，提示該藥可以通過調(diào)節(jié)激素受體而發(fā)揮對內(nèi)分泌的調(diào)控作用。其可能機制即雌激素與受體結合發(fā)揮生物學效應，使生殖軸的反饋機制得以恢復，降低FSH和LH水平，同時雌激素又可上調(diào)自身受體和FSHR、LHR，使FSH和LH發(fā)揮生物學效應，促進卵泡發(fā)育，構成良性循環(huán)，恢復H-P-O軸的調(diào)控功能。

3 總結及展望

國家級名老中醫(yī)夏桂成教授總結多年臨床實踐，創(chuàng)造性地提出了“心(腦)-腎-子宮軸”為女性的生殖軸學說，指出腎在維持女性正常的行經(jīng)、胎孕等方面起著主導作用，所以補腎應貫穿于疾病治療的始終。該學說與與H-P-O軸相對應，H-P-O軸功能的正常決定了女性的生殖生理功能正常。腎虛證與臨床上許多疾病有著密切關聯(lián)。實驗研究證明，補腎類中藥對多臟器多系統(tǒng)均有調(diào)節(jié)作用，其對于下丘腦-垂體-卵巢的調(diào)節(jié)作用是多方面的，既能直接促進性腺細胞分泌促性腺激素及性激素，又能通過調(diào)節(jié)激素受體的表達而發(fā)揮內(nèi)分泌的調(diào)控作用?？v觀近年來的研究，大多集中在補腎類中藥對性腺軸結構和分泌功能的影響上，卻鮮有對補腎中藥干預下丘腦-垂體信號傳導通路的分子機制研究，應盡快完善該方面的研究，以明確中藥作用靶點及通路，這必將對中醫(yī)藥理論、實踐的創(chuàng)新和發(fā)展起到良好的推動作用。

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R289．1

A

1006-3250(2015)02-0370-02

2014-11-21

江蘇省自然科學基金資助項目(BK2010565)

楊麗娟(1979-)，女，云南大理人，在讀博士，從事不孕癥的基礎與臨床研究。

△通訊作者:周惠芳(1962-)，女，主任醫(yī)師，教授，博士研究生導師，從事不孕癥的基礎與臨床研究，E-mail: zhouhuifang2011301@163．com。