陜西省宮頸人乳頭瘤病毒感染亞型分布特征分析

樊 靜，李 娜，張忠明，安瑞芳，李 嬌，趙靜妮，鄒余糧，茍文麗，楊筱鳳

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710061)

陜西省宮頸人乳頭瘤病毒感染亞型分布特征分析

樊 靜，李 娜，張忠明，安瑞芳，李 嬌，趙靜妮，鄒余糧，茍文麗，楊筱鳳

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710061)

目的 明確陜西省及周邊地區(qū)成年女性宮頸人乳頭瘤病毒(HPV)感染基因亞型的分布及年齡特征。方法 分析2009年11月至2015年4月在西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科門(mén)診22 306例宮頸樣本21種HPV基因分型檢測(cè)結(jié)果。HPV分型檢測(cè)采用凱普醫(yī)用核酸分子快速導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)。結(jié)果 HPV總感染率為28.84%。高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)感染率為26.26%，占HPV陽(yáng)性標(biāo)本的91.05%；低危型HPV(6、11、42、43、44、81)感染率為4.81%；高危/低危HPV混合感染率為2.22%。感染率最高的基因亞型為HPV16(9.31%)，其他常見(jiàn)高危亞型依次為HPV52(5.08%)、HPV58(4.99%)、HPV18(2.09%)、HPV31(1.95%)、HPV39(1.86%)、HPV33(1.74%)；常見(jiàn)低危亞型為HPV6(2.02%)、11(1.56%)、81(1.02%)。HPV總體感染率和高危HPV亞型感染高峰年齡在30～34歲之間，以后隨年齡增長(zhǎng)逐漸降低，各年齡組間HPV檢出率有顯著性差異(χ2值為4.743～85.971，均P<0.05)。結(jié)論 陜西省及周邊地區(qū)女性宮頸HPV處于較高的感染水平；其HPV感染基因型符合亞洲人群分布規(guī)律，但有一定區(qū)域性差異；隨著年齡的增高，高危型HPV感染比例逐步緩慢增加。該結(jié)果對(duì)區(qū)域?qū)m頸癌防治和疫苗制備具指導(dǎo)意義。

人乳頭瘤病毒亞型；宮頸；分布特征；陜西省

宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一。大量流行病學(xué)及分子生物學(xué)研究資料表明，持續(xù)的高危型人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染是子宮頸癌及其癌前病變發(fā)生的必要條件[1]。HPV被確認(rèn)為引發(fā)宮頸癌的根本性致病因子[2]。HPV感染狀況具有很強(qiáng)的地域性，不同國(guó)家與地區(qū)HPV感染基因分型的流行病學(xué)分布不同[3]。因此，開(kāi)展篩查工作，明確HPV感染類(lèi)型，及早和有針對(duì)性的處理HPV感染及其相關(guān)病變已成為防治宮頸癌的關(guān)鍵。本研究以西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院近6年間一個(gè)大樣本的HPV分型檢測(cè)結(jié)果為對(duì)象，分析陜西省區(qū)域性女性宮頸HPV感染基因亞型分布特征及年齡特點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

2009年11月至2015年4月在西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科門(mén)診接受HPV檢測(cè)的女性共計(jì)22 306人次，年齡為18～87歲，平均年齡37.96±9.82歲。研究對(duì)象納入范圍包括全部以篩查宮頸癌及其相關(guān)病變?yōu)槟康牡挠幸庠甘軝z者。排除3天內(nèi)有陰道用藥或沖洗史，24小時(shí)內(nèi)有性行為及月經(jīng)期患者,受檢者全部來(lái)自陜西地區(qū)。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器與試劑

PCR擴(kuò)增儀、HybriMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀、HPV分型檢測(cè)試劑盒(PCR+膜雜交法)。

1.2.2 標(biāo)本采集和處理

暴露宮頸，搽除宮頸粘液。將專(zhuān)用宮頸刷置于宮頸口輕輕搓動(dòng)旋轉(zhuǎn)5圈取樣，放入加有專(zhuān)用保存液的取樣管中送檢。送檢樣本于4℃保存，48小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

1.2.3 檢測(cè)方法

①DNA提?。喝”４嬗袑m頸刷取細(xì)胞的保存液0.5mL，離心后棄上清液，細(xì)胞裂解液提取DNA；②PCR擴(kuò)增：將PCR混合液、Taq酶和DNA模板按要求的比例混勻，25μL/反應(yīng)體系擴(kuò)增；③雜交：采用凱普HybriMax核酸分子快速雜交儀及配套試劑盒，在雜交平臺(tái)上放入標(biāo)記有21種HPV基因型寡核苷酸探針的低密度基因芯片雜交膜，按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行導(dǎo)流雜交，酶標(biāo)顯色；④結(jié)果判定：檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性點(diǎn)為清晰的藍(lán)紫色圓點(diǎn)。根據(jù)膜條HPV分型分布圖，判斷陽(yáng)性點(diǎn)為何種HPV基因型。本檢測(cè)包括15種高危亞型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68)和6種低危亞型HPV[6、11、42、43、44、81(CP8304)]，計(jì)21種亞型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，差異比較采用χ2檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性為P<0.05。

2 結(jié)果

2.1 人乳頭瘤病毒總體感染狀況

在22 306例受檢標(biāo)本中，6 433例HPV檢測(cè)陽(yáng)性，總陽(yáng)性率為28.84%；其中高危HPV亞型感染率為26.26%(5 857/22 306)，低危HPV亞型感染率為4.81%(1 072/22 306)，高危/低?；旌细腥韭蕿?.22%(496/22 306)，見(jiàn)表1。

表1 21種HPV亞型檢測(cè)總體結(jié)果分布狀況[n(%)]

Table 1 Overall distribution of 21 HPV genotypes in samples[n(%)]

有21種基因亞型均被檢出。常見(jiàn)的HPV亞型依次為16、52、58、18、6、31、39、33、11、68、53、51、81，其余亞型感染率均在1.00%以下，由高到低依次為56、66、59、45、35、42、44、43。感染率最高的亞型為HPV16(9.31%)，見(jiàn)表2；感染率最低的亞型為HPV43(0.02%)，見(jiàn)表3。

2.2 高危亞型人乳頭瘤病毒檢測(cè)結(jié)果及分布

在22 306例受檢標(biāo)本中，有5 857例高危型HPV亞型陽(yáng)性，陽(yáng)性率為26.26%，占全部HPV陽(yáng)性標(biāo)本的91.05%。各高危型HPV感染頻數(shù)及構(gòu)成比見(jiàn)表2。其中感染率最高的基因亞型為HPV16(9.31%)，占全部HPV感染的32.27%和高危HPV感染的35.44%；其他常見(jiàn)6型高危亞型依次為HPV52(5.08%)、58(4.99%)、18(2.09%)、31(1.95%)、39(1.86%)、33(1.74%)，占全部HPV感染的61.43%和高危HPV感染的67.46%；較少見(jiàn)的3型高危亞型為HPV68(1.44%)、53(1.32%)、51(1.28%)；少見(jiàn)的5型高危亞型為HPV56(0.96%)、66(0.64%)、59(0.63%)、45(0.33%)、35(0.32%)。

表2 15種高危亞型HPV檢測(cè)結(jié)果及分布狀況

Table 2 Fifteen genotypes of high-risk HPV and their distribution in samples

2.3 低危亞型人乳頭瘤病毒檢測(cè)結(jié)果及分布

低危型亞型陽(yáng)性者共1 072例，陽(yáng)性率為4.81%，占全部HPV陽(yáng)性標(biāo)本的16.66%。各低危型頻數(shù)分布及其構(gòu)成比見(jiàn)表3。常見(jiàn)的低危亞型前3位為HPV6(2.02%)、11(1.56%)、81(即HPVCP8304，1.02%)，占全部HPV感染的15.95%和低危HPV感染的95.71%；HPV42(0.23%)、44(0.16%)感染少見(jiàn)；罕見(jiàn)亞型為HPV43(0.02%)。

2.4 高危/低危亞型人乳頭瘤病毒檢測(cè)結(jié)果及分布

高危/低危HPV混合陽(yáng)性者496例，感染率為2.22%，分別占HPV陽(yáng)性標(biāo)本、高危型HPV標(biāo)本和低危型HPV標(biāo)本的7.71%(496/6 433)，8.47%(496/5 857)和46.27%(496/1 072)，見(jiàn)表1。

另外，在6 433例HPV陽(yáng)性標(biāo)本中，單一亞型感染4 755例(73.92%)，多重感染1 678例(26.08%)，其中4例樣本感染有最多7種HPV基因亞型。

表3 6種低危亞型HPV分布狀況

Table 3 Distribution of 6 low-risk HPV genotypes in samples

2.5 人乳頭瘤病毒感染的年齡分布

將22 306例女性按不同年齡段分為6組(≤20歲、21～30歲、31～40歲、41～50歲、51～60歲、≥61歲)，各年齡段HPV檢出情況見(jiàn)表4。受檢人群高峰年齡為31～40歲組，HPV感染率為27.41%(檢測(cè)占比34.78%、陽(yáng)性占比33.05%)；其次為41～50歲組，HPV感染率為29.05%(檢測(cè)占比29.38%、陽(yáng)性占比29.60%)。極端年齡組即≤20歲年齡段和≥61歲段檢測(cè)占比極低(1.02%和1.87%)，但HPV感染率較高(40.97%和38.99%)。剔除極端年齡，HPV感染率在21～60歲之間隨年齡增長(zhǎng)逐漸增高，各年齡組HPV檢出率比較有顯著性差異(χ2=4.743～23.482，均P<0.05)。

高危亞型HPV在各年齡段均處于較高的感染水平(23.88%～35.89%)；21歲以后，隨著年齡的增高，高危亞型HPV感染的比例逐步增加，而低危亞型和混合性HPV感染的比例逐步下降。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，不同年齡段高危亞型、低危亞型以及混合性感染的分布在各年齡段間比較有顯著性差異(χ2=9.537～85.971，均P<0.05)。不同HPV感染類(lèi)型在各年齡段的分布狀況見(jiàn)表5及圖1。

表5 不同HPV感染類(lèi)型在各年齡段的分布狀況[n(%)]

Table 5 Distribution of HPV genotypes among different age groups[n(%)]

圖1 各年齡組不同HPV類(lèi)型感染率分布狀況

Fig.1 Infection rate distribution of different HPV genotypes among differnt age groups

3 討論

3.1 陜西省及周邊地區(qū)人乳頭瘤病毒感染率及基因型分布規(guī)律和特點(diǎn)

西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院是西北地區(qū)區(qū)域性醫(yī)學(xué)中心，本研究基于近6年間全部門(mén)診大樣本的檢測(cè)結(jié)果，具有陜西省相應(yīng)群體即潛在宮頸病變高危人群為主的區(qū)域性代表性。在受檢的22 306例女性中，HPV總體感染率28.84%，明顯高于早先報(bào)道的山西省的14.2%[4]、北京地區(qū)的6.6%[5]、甘肅的19.9%[6]和新疆的13%[7]，略低于新近報(bào)道山東的32.2%[8]和黑龍江的36.45%[9]，接近于湖南的22.6%[10]。本院與陜西省腫瘤醫(yī)院居同一地區(qū)，該院報(bào)道的7 640例研究對(duì)象HPV總感染率為18.86%[11]，原因可能在于該報(bào)道的來(lái)源以健康篩查人數(shù)居多，而本院研究以門(mén)診就診可疑高危群體為主有關(guān)。這些結(jié)果反映了不同地區(qū)和人群HPV流行的地域差別、人群背景和年代變化。本研究的結(jié)果也反映了陜西地區(qū)和國(guó)外相關(guān)報(bào)道相比具有較低的HPV總感染率，比如美國(guó)成年女性同時(shí)期生殖道HPV總感染率為42.5%～42.7%[12]。

世界范圍最常見(jiàn)的HPV基因亞型是HPV16，其他常見(jiàn)基因亞型存在地區(qū)差別。國(guó)際癌癥研究所研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌患者中，除HPV16外，HPV18、45、31、33較常見(jiàn)[3,12]，多數(shù)亞洲國(guó)家的研究提示HPV52、58的感染率高于上述4種HPV亞型[13]。本研究中，HPV的21種基因亞型均被檢出，HPV16居感染率首位，與世界范圍的研究結(jié)果一致[4-13]。HPV52、58僅次于HPV16，符合亞洲人群研究結(jié)果，與我國(guó)境內(nèi)其他地區(qū)比較，HPV感染常見(jiàn)基因亞型相似，也存在一定地區(qū)差異[4-13]。本研究中常見(jiàn)的HPV亞型為16、52、58、18、6、31、39、33、11、68、53、51、81，其余基因亞型感染率均在1.00%以下。高危亞型前6位為HPV16、52、58、18、31、39，低危亞型前3位為HPV6、11、81。感染率最高的基因亞型HPV16的人群感染率為9.31%，陽(yáng)性構(gòu)成比32.27%；感染率最低的基因亞型HPV43的人群感染率為0.02%。這些結(jié)果與甘肅地區(qū)[6]及陜西省腫瘤醫(yī)院[11]報(bào)道的女性宮頸HPV感染基因亞型分布狀況非常相似。北京地區(qū)常見(jiàn)的HPV亞型為HPV16、58、52、53、33、6[5]。山東、湖南和黑龍江地區(qū)常見(jiàn)的高危亞型為HPV16、58、52、18、33、31，常見(jiàn)的低危亞型為HPV6、11、44[8-10]。這些結(jié)果均反映了HPV感染譜在中國(guó)的基本相似性和一定的地域差別。本研究結(jié)果的亞型地域性差異主要體現(xiàn)在HPV52、18、39常見(jiàn)(高危)亞型中感染占比的前移。另外，基本人群和宮頸癌人群HPV感染譜的差異，反映了各HPV亞型致癌力的差異，進(jìn)一步大數(shù)據(jù)的綜合對(duì)比分析和臨床跟蹤對(duì)于HPV致癌機(jī)理研究和區(qū)域防治策略意義重大[12,14]。

3.2 陜西省及周邊地區(qū)人乳頭瘤病毒感染的年齡分布特點(diǎn)

年齡是HPV感染和宮頸疾病的密切相關(guān)因素[1-4]。Steinau等[12]總結(jié)報(bào)道了21～24歲年齡段女性HPV感染率最高(58.5%)，感染率隨年齡增長(zhǎng)逐漸降低，50～59歲年齡段女性HPV感染率降至34.9%。我國(guó)北京地區(qū)[5]篩查的人群感染高峰年齡在30～34歲之間(檢出率為11.25%)，40～44歲以后明顯下降，各年齡段HPV感染檢出率差異顯著。

本研究的結(jié)果提示，剔除≤20歲和≥61歲的極端年齡段，HPV篩查及感染的主體為21～50歲女性，其檢測(cè)的人群占比總計(jì)89.08%，陽(yáng)性例數(shù)占比總計(jì)86.28%，總體HPV感染率為27.93%，高危HPV感染率為25.37%，參見(jiàn)表4、表5。HPV感染率(和高危HPV感染率)隨年齡增長(zhǎng)逐漸增高，各年齡組HPV檢出率比較有顯著性差異。該篩查群體的研究結(jié)果應(yīng)該能反映本地區(qū)臨床潛在宮頸病變高危人群的總體HPV感染分布特征，具有相對(duì)重要的參考價(jià)值。上述HPV感染率應(yīng)該接近但略高于本地區(qū)該年齡段正常女性的基礎(chǔ)HPV感染狀況。該結(jié)果與Steinau等[12-13]的報(bào)道差異明顯，與北京地區(qū)報(bào)道的結(jié)果[5]較為接近，反映了不同國(guó)家HPV人群感染的生物和社會(huì)背景。

HPV多為一過(guò)性感染，隨著年齡增大和機(jī)體免疫力的變化，感染的累積數(shù)和持續(xù)感染增加。本研究不同HPV感染類(lèi)型在各年齡段的構(gòu)成比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。高危型HPV處于較高的感染水平，提示高危型HPV比低危型HPV更不易被機(jī)體自然清除，而容易表現(xiàn)為持續(xù)感染。本研究中21歲以后的患者隨著年齡的增長(zhǎng)，高危型HPV感染的比例逐步增加，而低危型和混合性HPV感染的比例逐步下降，40歲以后，三者均趨于平緩，且緩慢上升，提示在年輕人群中低危型HPV感染較常見(jiàn)且多為一過(guò)性，高危型HPV的感染隨年齡的增加而增加，使機(jī)體患宮頸病變的幾率增加，也提示年輕女性應(yīng)盡早開(kāi)展HPV預(yù)防接種，對(duì)年長(zhǎng)女性則應(yīng)積極進(jìn)行HPV檢測(cè)，對(duì)預(yù)防宮頸癌相關(guān)病變的發(fā)生至關(guān)重要。另外，本研究中≤20歲和≥61歲的極端年齡段人群具有相對(duì)較高的各型HPV感染率，合理的解釋?xiě)?yīng)該是它反映了這些受檢者部分具有臨床已知的HPV相關(guān)疾病，因?yàn)檫@些年齡段并非臨床熟知的普通人群篩查對(duì)象，其總計(jì)2.89%的檢測(cè)人群占比支持了這一估計(jì)的合理性，同時(shí)也說(shuō)明這些極端病例相對(duì)于本研究的大樣本而言引起總體結(jié)果偏倚的影響有限。

本文揭示的作為西北大區(qū)域診療中心的西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科門(mén)診女性的大樣本宮頸HPV感染基因亞型分布及年齡特點(diǎn)，為宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的區(qū)域性防治提供了必要的病毒流行病學(xué)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和臨床病例分流依據(jù)，對(duì)宮頸癌疫苗的研制策略具有切實(shí)參考意義。

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[專(zhuān)業(yè)責(zé)任編輯：楊文方]

噴鼻劑催產(chǎn)素可治療自閉兒童

發(fā)表在《分子精神病學(xué)》(Molecular Psychiatry)的一項(xiàng)來(lái)自悉尼大學(xué)的研究表明，合成激素-催產(chǎn)素經(jīng)5周的治療可顯著改善自閉癥兒童的社會(huì)、情感和行為問(wèn)題。該研究被認(rèn)為是藥物治療自閉癥兒童社會(huì)障礙的第一個(gè)證據(jù)。它也是調(diào)查鼻內(nèi)施用催產(chǎn)素治療年幼孤獨(dú)癥患兒的療效、耐受性和安全性的第一個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)。在該研究中，31名3～8歲的兒童進(jìn)行每日2次催產(chǎn)素鼻噴霧劑治療。Adam Guastella說(shuō)：“我們發(fā)現(xiàn)催產(chǎn)素治療后，父母報(bào)告他們的孩子在家里更活躍互動(dòng)，我們的雙盲醫(yī)師獨(dú)立評(píng)價(jià)也支持治療確實(shí)提高了社會(huì)反應(yīng)”?？傮w而言，噴鼻劑的耐受性良好，最常見(jiàn)的不良事件是口渴、尿頻、便秘。

Distribution characteristics of human papillomavirus infection genotypes in cervix of women in Shaanxi Province

FAN Jing, LI Na, ZHANG Zhong-ming, AN Rui-fang, LI Jiao, ZHAO Jing-ni, ZOU Yu-liang, GOU Wen-li, YANG Xiao-feng

(DepartmentofGynecologyandObstetrics,FirstAffiliatedHospitalofXi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China)

Objective To analyze HPV genotype distribution and age characteristics among women in Shaanxi Province and areas nearby. Methods A total of 22 306 cervical scraping samples were collected from the outpatients for cervical cancer screening in the First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University during November 2009 to April 2015. Twenty-one HPV genotypes were examined by PCR-based hybridization gene chip assay. Results The overall HPV infection rate was 28.84%. The infection rate of high-risk HPV (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68) was 26.26%, which occupied 91.05% of HPV positive samples. There were 4.81% cases being confirmed to have low-risk HPV (6, 11, 42, 43, 44, 81), and the combined infection rate of both high-risk and low-risk HPV was 2.22%. The most prevalent high-risk HPV was HPV16 (9.31%), followed by high-risk HPV 52 (5.08%), HPV 58 (4.99%), HPV 18 (2.09%), HPV 31 (1.95%), HPV 39 (1.86%), and HPV 33 (1.74%), respectively. The most prevalent low-risk HPV were HPV6 (2.02%), HPV 11 (1.56%), and HPV 81 (1.02%). The overall infection rate of HPV and infection rate of high-risk HPV reached peak among the women aged 30-34 years, and they declined with age increasing. The difference in HPV detection rate was significant among different age groups (χ2ranged 4.743-85.971,P<0.05).Conclusion HPV infection rate is high in Shaanxi Province and surrounding areas. The infection genotype of HPV in Shaanxi area has similar spectrum to that in Asian regions but with slight difference. The infection rate of high-risk HPV increases gradually with age increasing. These data are helpful for the cervical cancer prevention and the vaccination program in this area.

human papillomavirus genotype；cervix；distribution characteristics；Shaanxi Province

2015-06-24

國(guó)家自然科學(xué)基金面上資助項(xiàng)目(30872741)；陜西省自然基金資助項(xiàng)目(SJ08-ZT09)

張忠明，副教授。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.05.016

R737

A

1673-5293(2015)05-0958-04

[第一共同作者簡(jiǎn)介]樊 靜(1986-)，女，在讀碩士研究生，主要從事宮頸病變相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究；李 娜(1985-)，女，檢驗(yàn)師，主要從事女性生殖道感染性疾病實(shí)驗(yàn)工作。