安格斯肉牛胚胎移植試驗(yàn)報(bào)告

王建軍,汪裕龍

(武威市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，甘肅 武威 733000)

安格斯肉牛胚胎移植試驗(yàn)報(bào)告

王建軍,汪裕龍

(武威市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，甘肅 武威 733000)

〔目的〕為探討和研究安格斯肉牛胚胎移植在武威市的應(yīng)用前景，指導(dǎo)我市的高檔肉牛養(yǎng)殖，〔方法〕我們以西雜母牛為受體，進(jìn)行了10頭安格斯雙胚、6頭輸精后7天移植單胚、389頭單胚、10頭移植前注射黃體酮和促黃體素a3共4項(xiàng)試驗(yàn)研究?！步Y(jié)果〕雙胚移植受孕2頭，產(chǎn)犢結(jié)果都為單胎；移植加輸精0頭、單胚移植受孕率為16.8%、注射激素受孕率為10%?！步Y(jié)論〕使用體內(nèi)胚胎，加強(qiáng)妊娠牛的飼養(yǎng)管理，可能會(huì)提高產(chǎn)雙犢幾率，在以后生產(chǎn)中可以推廣和應(yīng)用；輸精后牛各項(xiàng)激素和生殖受孕環(huán)境發(fā)生變化不適合于胚胎移植，在生產(chǎn)中利用不大；胚胎移植同步注射黃體酮和促黃體素a3在提高牛體外胚胎妊娠率的利用中作用不大。

安格斯肉牛;胚胎移植

近年來，安格斯肉牛因其良好的產(chǎn)肉性能，國內(nèi)養(yǎng)殖數(shù)量增長較快，但引進(jìn)活牛市場(chǎng)價(jià)格高昂，采取胚胎移植技術(shù)，可大幅減低活牛成本和快速進(jìn)行良種擴(kuò)繁。為探討和研究安格斯肉牛胚胎移植在我市的應(yīng)用前景，武威市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院和武威美加農(nóng)畜牧科技有限公司合作，與2013年8月～2014年8月，以武威市涼州區(qū)飼養(yǎng)西雜母牛為受體，移植安格斯肉牛胚胎。現(xiàn)將具體試驗(yàn)情況總結(jié)如下：

1 材料

1.1 牛胚胎的選擇及引進(jìn)

2013年3月，武威美加農(nóng)畜牧科技有限公司從美國S.T公司引進(jìn)。

1.2 受體牛的選擇

選自涼州區(qū)雨霖養(yǎng)殖場(chǎng)及涼州區(qū)部分養(yǎng)牛戶飼養(yǎng)的健康、無生殖道疾病、發(fā)情正常，育成母牛16月齡以上，成母牛產(chǎn)犢后2～3個(gè)月以上，且營養(yǎng)中等的西雜牛作為受體牛。

1.3 藥物及器械

1.3.1 藥物 PG2a(蘇州市蘇牧動(dòng)物藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)日期：2012.11.23)、1%的鹽酸利多卡因、胚胎解凍液。

1.3.2 器械 體視顯微鏡等胚胎解凍設(shè)備、胚胎移植槍、套管等移植操作器械。

2 方法

2.1 試驗(yàn)方法

2.1.1 受體牛的選定 選擇的受體牛采取直腸檢查的方法復(fù)選，對(duì)子宮有炎癥、形態(tài)異常、卵巢囊腫、持久黃體和有流產(chǎn)史的予以淘汰，最后選定移植戶和受體牛。根據(jù)基礎(chǔ)母牛各自的不同情況，由分片配種員到農(nóng)戶家中進(jìn)行防疫、驅(qū)蟲，飼養(yǎng)指導(dǎo)，農(nóng)戶觀察到牛有發(fā)情征兆，及時(shí)電話通知配種員，配種員通知胚胎供應(yīng)站。在發(fā)情后第七天最后確定使用冷凍胚胎移植的受體牛，并對(duì)受體牛進(jìn)行耳標(biāo)標(biāo)記，登記備案。

2.1.2 子宮、卵巢的檢查及黃體等級(jí)的判定 用直腸檢查法依次檢查子宮頸、左右兩側(cè)子宮角、卵巢的發(fā)育情況，對(duì)符合條件的受體牛同時(shí)要檢查卵巢的黃體，根據(jù)黃體大小、發(fā)育成度、質(zhì)地軟硬、卵巢基礎(chǔ)和有無排卵點(diǎn)分為A、B、C三級(jí)。A級(jí)為正常，卵巢基礎(chǔ)好黃體直徑在1.5 cm以上，質(zhì)地軟硬適中，觸摸感覺如豬肝，與卵巢銜接好，有排卵點(diǎn)；B級(jí)為黃體直徑在1～1.5 cm之間，質(zhì)地稍軟或稍硬，與卵巢連接痕跡隱性黃體與排卵點(diǎn)不明顯，卵巢基礎(chǔ)薄弱；C級(jí)為黃體過小，與卵巢連接痕跡明顯，有小卵泡或卵巢基礎(chǔ)過差。C級(jí)不能作為黃體移植，視為廢棄，A、B級(jí)分別進(jìn)行胚胎移植。

2.2 胚胎移植

2.2.1 確定移植的準(zhǔn)確時(shí)間 以發(fā)情盛期當(dāng)天為0天，第7天實(shí)施胚胎移植，如受體牛出現(xiàn)流血情況，則流血發(fā)生的當(dāng)天為0天，再加5天實(shí)施移植。移植前先作好受體牛消毒和保定工作，在1～2尾椎間硬膜外注射2%利多卡因5ml/頭，使受體母牛尾根麻痹，失去對(duì)直腸把握造成的不適反應(yīng),以便移植操作。

2.2.2 胚胎解凍 解凍過程按照胚胎使用說明書要求在移植點(diǎn)無菌操作室內(nèi)進(jìn)行。室內(nèi)氣溫恒定26℃進(jìn)行胚胎解凍。從液氮罐中取出顆粒凍胚后直接投入解凍液，時(shí)間在35 s內(nèi)，然后將胚胎取出放入基礎(chǔ)液中5 min，再將胚胎取出放入漂洗液5 min；最后將胚胎放入移植液5 min后裝管，2 h內(nèi)完成移植。

2.2.3 胚胎的檢查 發(fā)育正常的胚胎其透明帶基本呈圓形，卵裂球均勻而緊湊，無滲出細(xì)胞；卵裂球分散或變性后一般不能用于移植。經(jīng)檢查采用A、B級(jí)合格胚胎用于移植。

2.2.4 移植 剪去細(xì)管封口端，裝入移植槍(法國卡蘇式)，移植槍套上無菌軟外套，將進(jìn)口端軟外套撕裂一小口，移植槍有專人拿著或移植人員用口銜注，此時(shí)用0.1%K2MnO4溶液沖洗綁定受體母牛外陰部，再用75%酒精棉消毒外陰部，用衛(wèi)生紙擦凈，雙手裂開外陰唇，將移植槍插入陰道，到達(dá)子宮頸時(shí)，用手撕掉無菌軟外套，通過直腸把握法將胚胎植入有黃體一側(cè)的子宮角的小彎處(上1/3～1/2處)，在5 min內(nèi)完成移植操作。移植時(shí)要做到輕、穩(wěn)、快，防止用力不當(dāng)損傷子宮造成感染，尤其在穿過子宮頸時(shí)必須順著子宮頸螺旋方向前進(jìn)。

2.3 妊娠檢查及妊娠母牛的飼養(yǎng)管理

胚胎移植后14 d內(nèi)，要保持受體牛只的安靜，不能驅(qū)趕和劇烈運(yùn)動(dòng)，以免影響胚胎著床。認(rèn)真做好胚胎移植記錄，在70 d用直檢法進(jìn)行妊檢，經(jīng)直檢確診妊娠的受體母牛，告知養(yǎng)殖戶加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，供給充足的飼料以保證滿足胎兒和母牛的營養(yǎng)需要。防止頂撞、滑到等預(yù)防流產(chǎn)，保持舍內(nèi)和牛體的清潔衛(wèi)生。

3 結(jié)果

3.1 從表1和表2看出安格斯雙胚移植10頭，其中：自然發(fā)情8頭、同期發(fā)情2頭，A級(jí)黃體3頭、B級(jí)黃體7頭；進(jìn)行輸精后7天移植安格斯單胚胎6頭；自然發(fā)情4頭、同期發(fā)情4頭，A級(jí)黃體1頭、B級(jí)黃體5頭。移植后雙胚移植返情6頭、移植加輸精返情5頭，3個(gè)月后對(duì)未返情牛只孕檢，結(jié)果受孕4頭，其中：移植加輸精受孕1頭，4個(gè)月后雙胚移植和移植加輸精受孕各有1頭牛都流產(chǎn)。移植后4個(gè)月受孕結(jié)果雙胚3頭、移植加輸精0頭。受體牛分娩后2頭雙胚牛產(chǎn)犢結(jié)果都為單胎。

3.2 從表3看出安格斯單胚胎移植受孕率為16.8%，激素處理受孕率為10%。受體牛激素處理后受孕率為10%，比整體受孕率低。

4 小結(jié)

4.1 從以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，試驗(yàn)中受孕3月齡時(shí)雙胎移植受孕率為40%，但最后2頭牛產(chǎn)犢為單胎，可能與移植時(shí)技術(shù)操作、使用體外胚胎、懷孕牛只飼養(yǎng)管理有關(guān)，自然狀態(tài)下(不使用激素、胚胎)肉牛多胎率平均為2%[1]，如果使用體內(nèi)胚胎，加強(qiáng)妊娠牛的飼養(yǎng)管理，可能會(huì)提高產(chǎn)雙犢幾率，在以后生產(chǎn)中可以推廣和應(yīng)用[2]。移植加輸精4月齡時(shí)未受孕1頭，說明輸精后牛各項(xiàng)激素和生殖受孕環(huán)境發(fā)生變化不適合于胚胎移植，在生產(chǎn)中利用不大。

4.2 國內(nèi)牛體外胚胎的受孕率平均為30%，本試驗(yàn)受孕率平均為16.8%，比國內(nèi)平均值低13.2個(gè)百分點(diǎn)?？赡芘c本次試驗(yàn)選擇受體黃牛為農(nóng)戶分散飼養(yǎng)，發(fā)情時(shí)間由養(yǎng)殖戶告知，移植人員對(duì)移植時(shí)間的推斷存在誤差有關(guān)。有關(guān)報(bào)道在牛只發(fā)情后7.5～8 d[3]，受孕率最高。還有此次移植人員都為牛人工授精人員，雖然每人都有萬頭以上的人工授精經(jīng)驗(yàn)，也都經(jīng)過專家的培訓(xùn)，但對(duì)黃體發(fā)育的直腸感官準(zhǔn)確判斷，缺乏實(shí)踐積累。

4.3 受體牛在移植前注射黃體酮可加快排卵時(shí)間、治療卵泡囊腫和孕酮水平減低所引起的流產(chǎn)，促黃體素可促進(jìn)黃體形成和并發(fā)孕酮。但試驗(yàn)中胚胎移植同步注射黃體酮和促黃體素a3后，受孕率無明顯提高，這和閆繼生等報(bào)道的注射外源激素對(duì)體外授精冷凍胚胎移植妊娠率沒有顯著影響一致[4]，因此胚胎移植同步注射黃體酮和促黃體素a3在提高牛體外胚胎妊娠率的利用中作用不大。因此提高牛胚胎妊娠率與受體牛選擇、胚胎的質(zhì)量、移植人員操作水平有密切關(guān)系。

[1] 萬吉生,羅光彬,姜午旗等.安格斯胚胎移植試驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2007,36(04):11-12.

[2] 陳宏,袁志發(fā),雷雪芹,等.牛雙胚研究與應(yīng)用[J].中國黃牛雜志．2001,27(06):33-37.

[3] 韓志強(qiáng).張洪濤,李志強(qiáng),等.牛胚胎日齡與胚胎移植時(shí)間對(duì)妊娠率的影響[J].中國奶牛,2009,(11):35-36．

[4] 閆繼生,全明,張鎖鏈,等.牛體外授精冷凍胚胎移植妊娠率影響因素的研究[J].畜牧與飼料科學(xué),2004,(05):29-31.

The Eperiment Report of Angus Beef Cows Embryo Transplantation

WANG Jian-jun1,WANG Yu-long1

(1.WuweiAcademyofLivestockandVeterinaryScience,Wuwei733000,Gansu)

【Objective】To explore the application prospect of Angus beef cows embryo transplantation in Wuwei city, and guide the high-grade beef bovine breeding. 【Methods】We used Simmental hybrid cow as receptor, designed four different experiment group, choose ten beef cows for transplanting double embryo; choose 6 beef cow for transplanting single embryo after six days semen injection; choose 389 beef cow for transplanting single embryo; choose 10 beef cow for injecting progesterone and luteinizing hormone a3 before single embryo transplantation . 【Results】Double embryo transplantation conceived 2 beef cows, but both gave birth to one calf; single embryo transplantation after six days semen injection conceived 0 beef cows; conception rate of only single embryo transplantation is 16.8%, conception rate of hormone injections before single embryo transplantation is 10%.【Conclusions】Using double embryos transplantation may increases the chances of giving birth to two calves if strengthen the breeding and management of pregnant cows, then it can be applied in the future beef cow production; the beef cows pregnant environment and various hormones changed after semen injection, it will not be suitable for embryo transfer and useless in beef cow production; injecting progesterone and luteinizing hormone a3 before embryo transfer is also useless in improving embryo pregnant rate of beef cow.

Angus beef cows; embryo transplantation

2014-12-26 修改日期:2015-01-18

王建軍(1979-)，男，甘肅天水人，獸醫(yī)師，本科，工作單位：武威市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究院，研究方向：畜牧技術(shù)研究與開發(fā)。

S8-1

A

1001-9111(2015)02-0038-03

基金類型：中央現(xiàn)代農(nóng)業(yè)肉牛發(fā)展資金肉牛產(chǎn)業(yè)建設(shè)項(xiàng)目