中國(guó)人群凝血因子Ⅶ基因多態(tài)性與冠心病遺傳關(guān)聯(lián)性的Meta分析

張黎緣，錢(qián)盾，李寧

? 循證理論與實(shí)踐 ? 論著 ?

中國(guó)人群凝血因子Ⅶ基因多態(tài)性與冠心病遺傳關(guān)聯(lián)性的Meta分析

張黎緣，錢(qián)盾，李寧

目的評(píng)價(jià)中國(guó)人群凝血因子Ⅶ基因多態(tài)性與冠心病的遺傳關(guān)聯(lián)性。方法計(jì)算機(jī)檢索中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)、中文期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、PubMed、EMbase、ISI Web of Knowledge、Cochrane Library（從建庫(kù)至2015年7月）并輔以手工檢索。納入關(guān)于中國(guó)人群凝血因子Ⅶ基因多態(tài)性與冠心病的遺傳關(guān)聯(lián)性的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，由兩名研究員獨(dú)立篩選并提取資料，采用NHI-NHGRI研究工作組推薦的遺傳關(guān)聯(lián)性研究報(bào)告規(guī)范為基礎(chǔ)，評(píng)價(jià)所納入的研究的質(zhì)量。采用Stata11.0軟件進(jìn)行Meta分析。結(jié)果共納入11個(gè)研究，累積冠心病2789例，對(duì)照組2580例。Meta分析結(jié)果顯示，中國(guó)人群凝血因子Ⅶ基因型RR較QQ患冠心病風(fēng)險(xiǎn)增加（RR vs. QQ，OR=1.710, 95%CI：1.109～2.637，P=0.015）；同時(shí)基因型RQ較QQ患冠心病風(fēng)險(xiǎn)增加（RQ vs. QQ，OR=1.692，95%CI：1.074～2.655，P=0.023）；基因型RR與RQ人群發(fā)生冠心病的風(fēng)險(xiǎn)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=1.008，95%CI：0.886～1.146，P=0.908）。結(jié)論現(xiàn)有研究證據(jù)顯示，中國(guó)人群凝血因子Ⅶ基因多態(tài)性具有明顯的遺傳關(guān)聯(lián)性，且等位基因R為冠心病的遺傳易感基因。

凝血因子Ⅶ；冠心病；基因多態(tài)性；Meta分析

當(dāng)前研究認(rèn)為冠心病是由遺傳易感性和環(huán)境因素共同作用而發(fā)生發(fā)展的一種復(fù)雜的疾病，找到與該疾病遺傳關(guān)聯(lián)性基因，對(duì)高危人群進(jìn)行篩查、預(yù)防具有重要的理論意義。凝血因子Ⅶ（FⅦ）是維生素K依賴性血漿糖蛋白，由肝臟細(xì)胞分泌，在凝血因子Ⅹa、凝血酶作用下成為活化的FⅦ。后者可與體內(nèi)多種凝血因子作用形成外源性凝血活酶，促進(jìn)凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟?。?guó)內(nèi)外報(bào)道FⅦ基因R353Q多態(tài)性與冠心病具有顯著地遺傳關(guān)聯(lián)性，但受入選人群遺傳背景、樣本量大小、年齡、性別及是否有冠心病家族史等差異有關(guān)結(jié)果不大一致，但國(guó)內(nèi)研究[1,2]傾向于等位基因Q可能是冠心病的遺傳保護(hù)因子。為此，本研究擬采用Meta方法對(duì)已發(fā)表的有關(guān)中國(guó)人FⅦ基因多態(tài)性與冠心病遺傳關(guān)聯(lián)性的研究對(duì)雜合型基因與冠心病遺傳關(guān)聯(lián)性進(jìn)行綜合評(píng)估，以期為FⅦ基因R353Q多態(tài)性與冠心病的遺傳關(guān)聯(lián)性研究提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)：①FⅦ基因

R353Q多態(tài)性與人冠心病遺傳關(guān)聯(lián)性的病例對(duì)照研究，文種不限；②納入研究的研究方法、診斷標(biāo)準(zhǔn)相似；③研究對(duì)象均為中國(guó)人，民族不限，冠心病的診斷依據(jù)冠狀動(dòng)脈造影；④納入研究人群基因型分布符合Hardy-Weinberg(H-W)遺傳平衡定律。排除標(biāo)準(zhǔn)：①納入研究人群基因型分布未經(jīng)（和）或不符合(H-W)遺傳平衡檢驗(yàn)；②納入研究存在遺傳連鎖不平衡現(xiàn)象；③統(tǒng)計(jì)方法不恰當(dāng)，數(shù)據(jù)不全。

1.2 檢索策略以“內(nèi)皮型一氧化氮合酶”、“凝血酶FⅦ”、“冠心病”、“冠狀動(dòng)脈硬化性心臟病”檢索中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)（1994～2015.7）、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù) (1978～2015.7)、中文期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù)（1989～2015.7）、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)（1990～2015.7）；以“coagulation factors FⅦ”，“gene polymorphism”，“coronary heart disease”檢索Pubmed（1990～2015.7）、Cochrane Library（2015第7期）、EMBASE（1990～2015.7）、ISI Web of knowledge（1990～2015.7）。檢索詞根據(jù)具體數(shù)據(jù)庫(kù)調(diào)整，所有檢索采用主題詞[MEDLIN E(MeSH),EMBASE(EMTREE)]與自由詞相結(jié)合的方式，所有檢索策略通過(guò)多次預(yù)檢索后確定。追查已經(jīng)納入文獻(xiàn)的參考文獻(xiàn)，與本領(lǐng)域的專家、通訊作者等聯(lián)系以獲取以上檢索未發(fā)現(xiàn)的相關(guān)信息。同時(shí)使用百度、Google Scholar、Medical Matrix等搜索引擎查找相關(guān)文獻(xiàn)，如試驗(yàn)報(bào)告不詳或缺乏，通過(guò)信件與作者聯(lián)系。

1.3 文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)價(jià)本研究參考NHI-NHGRI研究工作組制定的遺傳關(guān)聯(lián)性研究報(bào)告規(guī)范[3]的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，并依據(jù)文獻(xiàn)[4]的14條標(biāo)準(zhǔn)：①計(jì)算把握度：對(duì)于前瞻性及回顧性研究行把握度的計(jì)算，可以減少Ⅱ類錯(cuò)誤的概率；②對(duì)照組特征：對(duì)照組和病例組是否來(lái)自同一人群，并且充分描述了具備可重復(fù)性的特征；③病例組特征：人口學(xué)及臨床信息是否以文字或表格的形式描述，僅提供表型的定義標(biāo)準(zhǔn)是不充分的；④連鎖不平衡檢測(cè)：用于多態(tài)性的選擇和（或）結(jié)果的解釋；⑤多態(tài)性的鑒別：根據(jù)NCBI提供的序列準(zhǔn)確鑒定多態(tài)性，僅提供擴(kuò)增引物序列和（或）僅以之前的文獻(xiàn)為參考依據(jù)是不充分的；⑥計(jì)算錯(cuò)誤率：是否以相同或其他方法重復(fù)了基因型檢測(cè)，以計(jì)算錯(cuò)誤率；⑦Hardy-Weinberg（H-W）平衡檢驗(yàn)：對(duì)照組是否進(jìn)行了HWE檢驗(yàn)或提供的數(shù)據(jù)可進(jìn)行HWE檢驗(yàn)；⑧盲法：對(duì)實(shí)驗(yàn)者和結(jié)果評(píng)價(jià)人員是否實(shí)施盲法；⑨多重檢驗(yàn)校正：研究位點(diǎn)較多時(shí)，存在Ⅰ類錯(cuò)誤的概率被擴(kuò)大，是否調(diào)整水平來(lái)控制；⑩協(xié)變量調(diào)整：在協(xié)方差分析中是否進(jìn)行協(xié)變量調(diào)整；?危險(xiǎn)因素分析：是否采用回歸模型對(duì)于其他相關(guān)危險(xiǎn)因素進(jìn)行回歸分析，得到不同危險(xiǎn)因素的OR值及其95%CI；?人群分層分析：根據(jù)獨(dú)立的多態(tài)性是否進(jìn)行人群分層的評(píng)估和校正；?重復(fù)性：是否在另外的獨(dú)立樣本中進(jìn)行驗(yàn)證；?功能性實(shí)驗(yàn)：僅提供功能實(shí)驗(yàn)的參考文獻(xiàn)的不充分的。每條標(biāo)準(zhǔn)以“是”（滿足此條標(biāo)準(zhǔn)）、“否”（不滿足）和“不清楚”（文獻(xiàn)未描述）評(píng)價(jià)，對(duì)進(jìn)入分析的每篇文獻(xiàn)逐條進(jìn)行評(píng)價(jià)，由一名評(píng)價(jià)員獨(dú)立評(píng)價(jià)文獻(xiàn)偏倚，如遇不確定的研究與評(píng)價(jià)員討論決定。

1.4 文獻(xiàn)篩選和資料提取兩名研究者獨(dú)立閱讀所獲得文獻(xiàn)題目和摘要，在排除明顯不符合納入標(biāo)準(zhǔn)的研究后，閱讀可能符合納入標(biāo)準(zhǔn)的研究全文，以確定是否符合納入標(biāo)準(zhǔn)。交叉核對(duì)納入試驗(yàn)的結(jié)果，對(duì)有分歧而難以確定其是否納入的研究通過(guò)討論或由第三位研究者決定是否納入。缺乏的資料通過(guò)電話或信件與作者聯(lián)系予以補(bǔ)充。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析①對(duì)所選擇的研究各組基因型進(jìn)行H-W遺傳平衡檢驗(yàn)；②采用Stata11.0軟件進(jìn)行Meta分析，采用Q檢驗(yàn)描述試驗(yàn)間的異質(zhì)性。P＞0.1為研究間有同質(zhì)性，采用固定效應(yīng)模型分析；P＜0.1 為研究間有異質(zhì)性，采用隨機(jī)效應(yīng)模型；③應(yīng)用漏斗圖和Egger’s檢驗(yàn)分析，判斷納入文獻(xiàn)是否存在發(fā)表偏倚。

2 結(jié)果

2.1 檢索結(jié)果初檢相關(guān)文280篇，去重83篇。在閱讀題目和摘要的基礎(chǔ)上，排除無(wú)具體實(shí)質(zhì)性內(nèi)容64篇；在閱讀全文基礎(chǔ)上，排除同一研究重復(fù)發(fā)表9篇，最終10篇符合納入標(biāo)準(zhǔn)（圖1）。所納入的10項(xiàng)研究累積冠心病2789例（診斷依據(jù)均為冠狀動(dòng)脈造影），對(duì)照組2580例（經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影排除或健康人群心電圖及臨床癥狀，實(shí)驗(yàn)室檢查無(wú)冠心病證據(jù)），納入研究基本特征見(jiàn)表1。

2.2 Meta 分析結(jié)果

2.2.1 基因型RR vs. QQ異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示各研究間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（P=0.757）采用固定效應(yīng)模型。Meta分析結(jié)果顯示：RR基因型較QQ型冠心病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加（OR=1.710，95%CI：1.109～2.637，P=0.015）（圖2）。

2.2.2 基因型RQ vs. QQ異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示各研究間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（P=0.899）采用固定效應(yīng)模型。Meta分析結(jié)果顯示：RQ基因型較QQ型冠心病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加（OR=1.692，95%CI：1.074～2.655，P=0.023）（圖3）。

2.2.3 基因型RR vs. RQ異質(zhì)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示各研究間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（P=0.643）故采用固定效應(yīng)模型。Meta分析結(jié)果顯示：RR基因型人群

冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)RQ基因型相當(dāng)（OR=1.008，95%CI：0.886～1.146，P=0.908）。

2.3 發(fā)表偏倚檢驗(yàn)和敏感性分析從漏斗圖分析可知，納入各組分析的漏斗圖對(duì)稱性均較好，表明Meta 分析結(jié)果發(fā)表偏倚較小。用Stata11.0進(jìn)行Egger's檢驗(yàn)分析（表2），結(jié)果顯示，各組比較對(duì)象間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，進(jìn)一步證實(shí)各研究結(jié)果之間沒(méi)有明顯的發(fā)表偏倚。對(duì)合并的結(jié)果采用不同的合并方式（隨機(jī)效應(yīng)和固定效應(yīng)模式），合并OR值未見(jiàn)明顯改變，說(shuō)明本次Meta分析結(jié)果穩(wěn)定可靠。

3 討論

本次研究采用Meta分析的方法，對(duì)FⅦ基因多態(tài)性與冠心病遺傳關(guān)聯(lián)性的病例對(duì)照研究進(jìn)行定量合并分析結(jié)果顯示：中國(guó)人群FⅦ基因多態(tài)性與冠心病具有遺傳關(guān)聯(lián)性，基因型RR、RQ較QQ型患冠心病風(fēng)險(xiǎn)顯著增加，基因型RR與RQ相比患冠心病風(fēng)險(xiǎn)沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

FⅦ在外源性凝血途徑中起關(guān)鍵作用，兼有活化凝血因子Ⅸ而影響內(nèi)源性凝血途徑。FⅦ活化程度與機(jī)體促凝血功能有直接關(guān)系。研究[2,15]顯示血漿FⅦ水平升高，尤其是FⅦa與FⅦc升高可能會(huì)促進(jìn)冠狀動(dòng)脈血栓形成，從而導(dǎo)致冠心病的發(fā)生。FⅦ基因位于13號(hào)染色體長(zhǎng)臂q34區(qū)，全長(zhǎng)12.8Kb，含有8個(gè)內(nèi)含子和8個(gè)外顯子。FⅦ基因存在多種基因多態(tài)性，其中FⅦ基因R353Q多態(tài)性是8號(hào)外顯子中353核苷酸發(fā)生G-A置換，造成堿性氨基酸-精氨酸（Arg，R）被酰胺類-谷氨酰胺所置換。本研究結(jié)果顯示與基因型RR、RQ相比較QQ基因型患冠心病風(fēng)險(xiǎn)顯著降低，但RQ基因型并未降低冠心病發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。FⅦ基因

R353Q多態(tài)性影響冠心病發(fā)病的可能機(jī)制是，基因多態(tài)性的存在，是具有功能的外顯子核苷酸發(fā)生置換，進(jìn)而造成不同氨基酸之間的置換，使由基因控制的蛋白質(zhì)表達(dá)受到影響，血漿FⅦ水平升高，機(jī)體處于高凝狀態(tài)，增加了患冠心病的風(fēng)險(xiǎn)。限于本研究為二次研究且納入各研究時(shí)未發(fā)現(xiàn)明顯的可分層分析的因素，所以未行進(jìn)一步的亞組分析。同時(shí)也未曾有報(bào)道對(duì)該基因多態(tài)性進(jìn)行多因素回歸分析，以探索是否為冠心病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子。

本研究不足之處：①納入的研究均為已發(fā)表文獻(xiàn)，雖然進(jìn)行了廣泛的檢索，但不能排除潛在的發(fā)表偏倚。②未對(duì)納入的各個(gè)研究的性別和年齡進(jìn)行匹配。③納入的研究對(duì)象多為漢族人群，具有不同遺傳背景的其他少數(shù)民族較少，其結(jié)論對(duì)中國(guó)人群的其他民族有局限性。

當(dāng)前研究證據(jù)顯示：中國(guó)人群FⅦ基因R353Q多態(tài)性與冠心病具有遺傳關(guān)聯(lián)性，具有等位基因R的人群是冠心病的高危人群。由于納入研究和研究對(duì)象的限制，上述結(jié)果尚需在中國(guó)人群中進(jìn)行嚴(yán)格設(shè)計(jì)符合國(guó)際關(guān)于遺傳關(guān)聯(lián)性研究報(bào)告的推薦標(biāo)準(zhǔn)[3]的病例對(duì)照或前瞻性研究加以驗(yàn)證，以便更好的在分子水平闡明冠心病的發(fā)病機(jī)制。

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Genetic correlation between polymorphism of coagulation factor Ⅶ and coronary heart disease in Chinese population: a Meta-analysis

ZHANG Li-yuan*, QIAN Dun, LI Ning.*417 Hospital, Ministry of Nuclear Industry, Lintong 710600, China.

ObjectiveTo review the genetic correlation between polymorphism of coagulation factor Ⅶ and coronary heart disease (CHD) in Chinese population.MethodsThe databases of CNKI, CBM, CSJD, WanFang Database, PubMed, EMbase, ISI Web of Knowledge and Cochrane Library (from establishment time Jul. 2015) were retrieved with computer assisted by manual retrieving. The randomized controlled trials (RCT) about the genetic correlation between polymorphism of coagulation factor Ⅶ and CHD in Chinese population were included and the data were screened and extracted by 2 researchers independently. The quality of included RCT was reviewed taking the study report standard recommended by NHI-NHGRI working group as base, and given a Meta-analysis by using Stata11.0 software.ResultsThere were totally 11 RCT included (2789 in CHD group and 2580 in control group). The results of Meta-analysis showed that CHD risk increased in Chinese population with genotype RR compared with that in those with genotype QQ (OR=1.710, 95%CI: 1.109～2.637, P=0.015), and CHD risk increased in Chinese population with genotype RQ compared with that in those with genotype QQ (OR=1.692, 95%CI: 1.074～2.655, P=0.023). The difference in CHD risk had no statistical significance between Chinese population with genotype RR and those with genotype RQ (OR=1.008, 95%CI: 0.886～1.146, P=0.908).ConclusionThe existing research evidences indicate that polymorphism of coagulation factor Ⅶ has definite genetic correlation with CHD in Chinese population, and allele R is an inherit susceptibility gene of CHD.

Coagulation factor Ⅶ; Coronary heart disease; Polymorphism; Meta-analysis

R541.4

A

1674-4055(2015)05-0597-04

2015-05-12）

（責(zé)任編輯：田國(guó)祥）

710600 臨潼,陜西臨潼核工業(yè)417醫(yī)院

錢(qián)盾,E-mail:qiandun602@163.com

10.3969/j.issn.1674-4055.2015.05.05