大黃蟅蟲丸對大鼠慢性脂肪肝的治療作用

魏 瑩，徐守竹，劉俊田（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥理系，西安 710061）

大黃蟅蟲丸對大鼠慢性脂肪肝的治療作用

魏 瑩，徐守竹，劉俊田＊（西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部藥理系，西安 710061）

目的 觀察大黃蟅蟲丸對大鼠慢性脂肪肝的影響。方法 SD大鼠40只，隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、大黃蟅蟲丸高劑量組和低劑量組。采用乙醇加高脂飼料喂養(yǎng)建立脂肪肝模型，灌胃給予大黃蟅蟲丸治療30d，觀察大黃蟅蟲丸對慢性實(shí)驗(yàn)性脂肪肝的治療作用。結(jié)果 大黃蟅蟲丸可改善脂肪肝模型大鼠一般狀況；降低肝臟質(zhì)量，減小肝臟指數(shù)；降低血清TC、TG、LDL，升高HDL水平，降低血清ALT和AST活性；減少大鼠肝組織總脂肪、TC、TG含量，抑制大鼠肝組織MDA產(chǎn)生，升高TSOD活性；減輕肝臟脂肪性病理變化。結(jié)論 大黃蟅蟲丸對大鼠慢性脂肪肝有治療作用，作用機(jī)制與降低血脂、抗脂質(zhì)過氧化作用及活血化瘀功能有關(guān)。

大黃蟅蟲丸；動(dòng)物模型；脂肪肝

脂肪肝［1－2］（fatty liver）是由一種或者多種原因引發(fā)的以肝臟脂類物質(zhì)（一般是三酰甘油）蓄積為病理改變的肝臟疾病，不同種族、年齡及性別均可發(fā)病，以40～49歲的發(fā)病率最高，我國成人患病率為15%～25%。近年來，隨著人們生活水平的提高以及飲食結(jié)構(gòu)的改變，脂肪肝的發(fā)病率呈上升趨勢，并且患病年齡日趨提前。目前脂肪肝的治療尚缺乏有效的藥物。因此，脂肪肝的預(yù)防、早期診斷、及時(shí)治療非常重要。

大黃蟅蟲丸是漢代醫(yī)學(xué)家張仲景《金匱要略》中的經(jīng)典名方，由熟大黃﹑土鱉蟲﹑水蛭﹑虻蟲﹑蠐螬﹑干漆﹑桃仁﹑苦杏仁﹑黃芩﹑地黃﹑白芍﹑甘草等12味中藥組成。大黃、桃仁、干漆配蟅蟲、水蛭、虻蟲等起到攻逐破血、活血通絡(luò)之功效；黃芩清熱解毒，地黃、芍藥、甘草滋養(yǎng)補(bǔ)虛。該方融補(bǔ)虛扶正、軟堅(jiān)散結(jié)、活血逐瘀為一體，主要用于瘀血內(nèi)停、腹部腫塊、肌膚甲錯(cuò)、目眶黯黑、潮熱羸瘦、經(jīng)閉不行。祖國醫(yī)學(xué)認(rèn)為，脂肪肝屬于“積證”、“積聚”、“痰濁”、“肥氣”等范疇，治療以疏肝養(yǎng)血、化濁消瘀為主，提示大黃蟅蟲丸對脂肪肝可能有治療作用。本研究通過建立大鼠脂肪肝模型，比較治療前后血清學(xué)指標(biāo)及肝組織學(xué)的變化，觀察大黃蟅蟲丸對慢性實(shí)驗(yàn)性脂肪肝的治療作用，以期為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 AU640全自動(dòng)生化分析儀（日本Olympus公司）；DRHW2恒溫水浴箱（北京西城區(qū)醫(yī)療器械廠）；TDL－80－2B臺式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；722光柵分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠）。

1.2 試藥 大黃蟅蟲丸，廣東恒誠制藥有限公司生產(chǎn)（批號1407701）；丙二醛（MDA）測試盒（批號20141011），超氧化物歧化酶（SOD）測試盒（批號20141025），蛋白定量測試盒（批號20141016），均由南京建成生物工程研究所提供；膽固醇為Sigma公司產(chǎn)品（批號MKBD9436V）。

1.3 動(dòng)物 SD大鼠，SPF級，雌雄各半，體質(zhì)量200～250g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2 方法

2.1 大鼠脂肪肝模型的建立 將大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)分為正常對照組10只、模型組30只，按文獻(xiàn)方法［3－8］聯(lián)合應(yīng)用乙醇和高脂飼料建立慢性脂肪肝模型。正常對照組大鼠喂以標(biāo)準(zhǔn)飼料，同時(shí)灌胃給予生理鹽水；模型組大鼠喂以高脂飼料（由質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%豬油、質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%膽固醇、質(zhì)量分?jǐn)?shù)79.5%常規(guī)飼料組成），同時(shí)灌胃給予體積分?jǐn)?shù)30%乙醇，10mL·kg－1，每天1次，連續(xù)30d。

2.2 給藥方法 從實(shí)驗(yàn)第31天起所有大鼠改為標(biāo)準(zhǔn)飼料飼養(yǎng)，并停止給予乙醇。將模型組大鼠隨機(jī)分為模型對照組10只、大黃蟅蟲丸高劑量組10只和大黃蟅蟲丸低劑量組10只。正常對照組及模型對照組大鼠灌胃等容積的生理鹽水，大黃蟅蟲丸高、低劑量組分別灌胃給予大黃蟅蟲丸1.6和3.2g·kg－1，連續(xù)30d。

2.3 檢測指標(biāo) 末次給藥后禁食16h，稱大鼠體質(zhì)量，靜脈注射烏拉坦麻醉大鼠，打開腹腔，腹主動(dòng)脈采血，分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀測定血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyceride，TG）、高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate amin－otransferase，AST）。摘取肝臟并稱質(zhì)量，計(jì)算肝臟指數(shù)（肝臟指數(shù)＝肝濕質(zhì)量／體質(zhì)量×100）。肉眼觀察肝臟外觀后，取部分肝臟勻漿，用香草醛比色法［9］測定肝臟總脂肪含量及TC、TG、丙二醛（malondialdehyde，MDA）和總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T－SOD）。另取部分肝臟用質(zhì)量分?jǐn)?shù)15%的甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色，光鏡下觀察組織病理學(xué)變化。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPASS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，進(jìn)行單因素方差分析法分析，計(jì)量資料均用±s表示，兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠一般狀況的影響 實(shí)驗(yàn)期間，正常對照組大鼠活動(dòng)靈活，飲食正常，皮毛光澤，體質(zhì)量持續(xù)增加；模型對照組大鼠精神萎靡，活動(dòng)減少，飲食減少，體質(zhì)量增加緩慢；給藥組大鼠較模型對照組大鼠有不同程度的改善。

3.2 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量、肝臟指數(shù)的影響 結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大黃蟅蟲丸各劑量組大鼠初始體質(zhì)量與模型對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)模型對照組與大黃蟅蟲丸各劑量組大鼠體質(zhì)量差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與正常對照組比較，模型對照組大鼠肝臟質(zhì)量增加，肝臟指數(shù)增大（P＜0.01）；與模型對照組比較，大黃蟅蟲丸高、低劑量組大鼠肝臟質(zhì)量減輕，肝臟指數(shù)減?。≒＜0.05），提示大黃蟅蟲丸可減輕脂肪肝大鼠的肝腫大。

表1 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量、肝臟指數(shù)的影響Tab.1 The effects of body weight，liver weight and liver index of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

表1 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠體質(zhì)量、肝質(zhì)量、肝臟指數(shù)的影響Tab.1 The effects of body weight，liver weight and liver index of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

注：與模型對照組比較＊P＜0.05；＊＊P＜0.01。

組別 劑量／g·kg－1體質(zhì)量／g肝質(zhì)量／g肝臟指數(shù)／mg·g－1正常對照組 0.0 397.7±90.5 9.48±2.31 23.9±2.5＊＊模型對照組 0.0 361.1±101.1 10.05±3.21 27.7±2.5大黃蟅蟲丸 1.6 356.6±92.6 9.20±2.88 25.5±1.6＊大黃蟅蟲丸 3.2 363.0±95.1 8.72±1.61 24.6±3.2＊

3.3 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠血脂的影響 結(jié)果見表2。模型對照組大鼠血清TC、TG、LDL增加，HDL降低，與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與模型對照組比較，大黃蟅蟲丸高劑量組大鼠血清TC、TG、LDL降低，HDL升高（P＜0.05或P＜0.01），提示大黃蟅蟲丸可改善脂肪肝大鼠血脂的異常變化。

表2 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠血脂的影響Tab.2 The effects of blood lipid in serum of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

表2 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠血脂的影響Tab.2 The effects of blood lipid in serum of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

注：與模型對照組比較＊P＜0.05；＊＊P＜0.01。

組別 劑量／g·kg－1TC／mmol·L－1TG／mmol·L－1HDL／mmol·L－1LDL／mmol·L－1正常對照組 0.0 1.50±0.27＊0.35±0.07＊＊1.83±0.54＊0.33±0.10＊模型對照組 0.0 1.81±0.27 0.50±0.14 1.40±0.29 0.42±0.06大黃蟅蟲丸 1.6 1.56±0.30 0.49±0.16 1.53±0.38 0.37±0.11大黃蟅蟲丸 3.2 1.53±0.30＊0.36±0.05＊＊1.81±0.33＊＊0.33±0.10＊

3.4 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠肝功能的影響 結(jié)果見圖1。模型對照組大鼠血清ALT和AST升高，與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）；與模型對照組比較，高劑量大黃蟅蟲丸可降低血清ALT和AST活性（P＜0.05或P＜0.01），提示大黃蟅蟲丸可減輕脂肪肝大鼠的肝損傷，具有保肝作用。

圖1 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠血清中ALT和AST含量的影響Fig.1 The effects of ALT and AST in serum of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills±s，n＝10）

3.5 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠肝組織總脂肪、TC、TG含量的影響 結(jié)果見表3。模型對照組大鼠肝組織總脂肪、TC、TG增加，與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型對照組比較，大黃蟅蟲丸減少大鼠肝組織總脂肪、TC、TG含量（P＜0.05或P＜0.01），提示大黃蟅蟲丸可減少脂質(zhì)在肝組織的蓄積。

表3 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠肝組織總脂肪、TC和TG含量的影響Tab.3 The effects of the TC and TG in fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

表3 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠肝組織總脂肪、TC和TG含量的影響Tab.3 The effects of the TC and TG in fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

注：與模型對照組相比＊P＜0.05；＊＊P＜0.01。

組別 劑量／g·kg－1總脂肪含量／mg·g－1prot TC／μmol·L－1TG／μmol·L－1正常對照組 0.0 189.1±40.1＊18.56±2.73＊48.10±13.04＊模型對照組 0.0 233.4±42.6 21.69±3.57 66.21±22.86大黃蟅蟲丸 1.6 191.0±17.0＊＊18.57±1.93＊52.51±13.54大黃蟅蟲丸 3.2 192.6±27.9＊15.69±4.31＊＊48.04±14.95＊

3.6 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠肝組織脂質(zhì)過氧化的影響 結(jié)果見表4。模型對照組大鼠肝組織MDA增多，T－SOD減少，與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型對照組比較，大黃蟅蟲丸減少大鼠肝組織MDA產(chǎn)生，升高T－SOD活性（P＜0.05或P＜0.01），提示大黃蟅蟲丸具有抗脂質(zhì)過氧化作用。

表4 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠肝組織脂質(zhì)過氧化的影響Tab.4 The effects of liver lipid peroxidation of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

表4 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠肝組織脂質(zhì)過氧化的影響Tab.4 The effects of liver lipid peroxidation of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong Pills ±s，n＝10）

注：與模型對照組比較＊P＜0.05；＊＊P＜0.01。

組別 劑量／g·kg－1MDA／nmol·mg－1prot T－SOD／U·mg－1prot正常對照組 0.0 1.17±0.19＊＊ 2.22±0.26＊＊模型對照組 0.0 1.65±0.41 1.90±0.21大黃蟅蟲丸 1.6 1.41±0.48 2.18±0.25＊大黃蟅蟲丸 3.2 1.21±0.51＊ 2.34±0.37＊＊

3.7 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠肝臟形態(tài)學(xué)的影響結(jié)果見圖2。大鼠處死后，肉眼可見正常對照組大鼠肝臟呈鮮紅色，邊緣銳利，表面光滑，指壓有彈性。模型對照組大鼠肝臟呈淺黃色，肝臟體積增大，形狀飽滿，肝包膜完整，表面光滑，邊緣變鈍，質(zhì)軟，與周圍組織有輕度粘連，切面呈油膩狀。大黃蟅蟲丸給藥組大鼠肝臟有不同程度的改善，表面呈淺紅色，無油膩狀，指壓有彈性，體積縮小。

圖2 大黃蟅蟲丸對脂肪肝大鼠肝臟組織病理學(xué)的影響（×200）A.對照組；B.模型組；C.低劑量組；D.高劑量組Fig.2 The effects of liver tissue pathology of the fatty liver rats by Dahuang Zhechong PillsA.normal control；B.model control；C.low－dose group；D.high－dose group

光鏡下可見正常對照組大鼠肝小葉大小形態(tài)一致，肝細(xì)胞排列規(guī)則，肝細(xì)胞核、漿著色正常，未發(fā)現(xiàn)變性、壞死、炎癥等病理表現(xiàn)。模型對照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)存在，肝細(xì)胞彌漫性腫大，肝細(xì)胞漿內(nèi)可見一些大小不一的空泡，細(xì)胞核被擠向一側(cè)，胞漿內(nèi)充滿大小不等的脂滴；肝組織可見點(diǎn)狀壞死，門管區(qū)可見單核細(xì)胞，淋巴細(xì)胞浸潤。大黃蟅蟲丸低劑量組大鼠肝臟脂肪性病理變化程度較模型對照組有一定程度減輕，肝細(xì)胞排列規(guī)則，部分肝細(xì)胞漿內(nèi)有大小不一脂肪空泡，肝細(xì)胞可見少量點(diǎn)狀壞死散在，門管區(qū)亦可見單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤；大黃蟅蟲丸高劑量組大鼠肝臟脂肪性病理變化明顯減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞排列規(guī)則，細(xì)胞胞漿內(nèi)脂滴明顯減少。

4 討論

脂肪肝是由多種疾病和病因引起的肝細(xì)胞脂肪變性，當(dāng)肝臟對脂肪合成能力增加和（或）轉(zhuǎn)運(yùn)入血的能力下降時(shí)，脂質(zhì)在肝內(nèi)蓄積過多，超過肝濕質(zhì)量的5%或組織學(xué)上50%以上的肝實(shí)質(zhì)脂肪化時(shí)，即為脂肪肝。資料顯示，長期大量進(jìn)食高脂類的食物，在小腸生成和吸收的游離脂肪酸和甘油增加，進(jìn)入血液的脂肪乳糜微粒也增加，最終使肝臟攝取大量的脂肪酸合成脂肪。當(dāng)脂肪在肝臟合成的量超過肝臟的轉(zhuǎn)運(yùn)能力時(shí)，就造成脂肪的蓄積，形成脂肪肝。過量飲酒時(shí)攝入的酒精也會導(dǎo)致脂肪肝，酒精在肝臟代謝過程中消耗大量輔酶與細(xì)胞色素，造成肝臟代謝紊亂，導(dǎo)致脂肪在肝臟的代謝障礙而形成脂肪肝［10－11］。本研究結(jié)合目前國人的飲食結(jié)構(gòu)，給予高脂飲食聯(lián)合口服乙醇建立大鼠脂肪肝模型，該模型與人類脂肪肝模型相似，這為深入研究脂肪肝的發(fā)病機(jī)制、尋找脂肪肝治療的有效藥物提供了理想的動(dòng)物模型。

本研究表明，模型大鼠精神萎靡，活動(dòng)減少，飲食減少，體質(zhì)量增加緩慢；肝臟質(zhì)量增加，肝臟指數(shù)增大。同時(shí)，模型大鼠血清TC、TG、LDL增加，HDL降低，說明有高脂血癥存在；血清ALT和AST升高，提示大鼠肝功能輕度異常；肝組織總脂肪、TC、TG增加，肝細(xì)胞呈現(xiàn)出典型的脂肪變性，這些均與人類脂肪肝的表現(xiàn)相似。灌胃給大黃蟅蟲丸30d后，上述的異常變化均有不同程度減輕，特別是大鼠肝組織總脂肪、TC、TG含量減少，肝臟脂肪性病理變化減輕，說明肝臟脂質(zhì)蓄積減少，而且血清肝功能指標(biāo)基本恢復(fù)正常。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，高劑量大黃蟅蟲丸的作用強(qiáng)于低劑量。已知脂肪肝的發(fā)生與肝組織脂質(zhì)過氧化物過多有關(guān)［12－13］，氧應(yīng)激脂質(zhì)過氧化作用在脂肪肝的形成機(jī)制中發(fā)揮著重要作用［14］。本實(shí)驗(yàn)測定了肝組織MDA的含量和T－SOD活性，MDA代表肝組織脂質(zhì)過氧化的程度，T－SOD代表肝組織清除脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的能力。結(jié)果表明，脂肪肝模型大鼠肝組織MDA增多，T－SOD減少；大黃蟅蟲丸可增強(qiáng)T－SOD活性，減少脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的含量。結(jié)果證明，大黃蟅蟲丸對大鼠慢性脂肪肝有治療作用，作用機(jī)制與降低血脂、抗脂質(zhì)過氧化作用及活血化瘀功能有關(guān)。本研究結(jié)果為大黃蟅蟲丸臨床用于治療脂肪肝提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Therapeutic effect of Dahuang Zhechong Pills on chronic fatty liver in rats

WEI Ying，XU Shouzhu，LIU Juntian＊（Department of Pharmacology，Health Center，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China）

Objective To observe the effect of Dahuang Zhechong Pills on chronic fatty liver in rats.Methods Forty SD rats were randomly divided into 4groups：normal control，model control，two doses of Dahuang Zhechong Pills.The model of fatty liver was established with alcohol plus high－fat diet.Dahuang Zhechong Pills were administered intragastrally for 30days.Results Dahuang Zhechong Pills improved the general state of rats，decreased liver weight and liver－body weight index，reduced TC，TG，LDL level as well as ALT and AST activities，and increased HDL concentration in serum.In addition，Dahuang Zhechong Pills decreased total lipids，TC，TG，MDA and elevated T－SOD activity in hepatic tissue.Dahuang Zhechong Pills relieved histopathological changes in liver as well.Conclusion Dahuang Zhechong Pills produce a therapeutic effect on chronic fatty liver in rats，and the action mechanisms are related to lowering blood lipids，anti－oxidative effect and removing blood stasis.

Dahuang Zhechong Pills；animal model；fattyliver

R965

A

1004－2407（2015）04－0382－05

2014－12－20）

魏瑩，女，碩士研究生

＊通信作者：劉俊田，男，教授，博士生導(dǎo)師