毛細管GC法測定還原型谷胱甘肽中有機溶劑的殘留量

李 璐，李丹鳳（.廣西－東盟食品藥品安全檢驗檢測中心，南寧53000；.廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所，南寧 5300）

毛細管GC法測定還原型谷胱甘肽中有機溶劑的殘留量

李 璐1，李丹鳳2（1.廣西－東盟食品藥品安全檢驗檢測中心，南寧530001；2.廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所，南寧 530021）

目的 建立毛細管氣相色譜法測定還原型谷胱甘肽中4種有機溶劑的殘留量。方法 采用氣相色譜法，DB－624毛細管柱（60m×0.25mm×0.25μm），F(xiàn)ID檢測器，柱溫為程序升溫，以DMF－水（3∶7）為溶劑，測定了還原型谷胱甘肽原料藥中甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃4種有機溶劑的殘留量。結(jié)果 4種有機溶劑均能完全分離，在所考察的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率均滿意。結(jié)論 該方法靈敏、準確，適用于還原型谷胱甘肽原料中有機溶劑殘留量的檢測。

還原型谷胱甘肽；有機溶劑殘留；毛細管氣相色譜

還原型谷胱甘肽是一種普遍存在于細胞中的重要抗氧化劑，臨床主要用于治療肝臟疾病、腫瘤、氧中毒、衰老和內(nèi)分泌疾病，并作為生物活性添加劑及抗氧化劑用于食品領(lǐng)域。目前，谷胱甘肽化學合成生產(chǎn)工藝使用到無水乙醇、甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃等有機溶劑［1］，分離提純過程使用了乙醇作為提取溶媒［2］，但目前該產(chǎn)品的質(zhì)量標準中尚沒有檢測方法對上述有機溶劑進行控制，為了控制該產(chǎn)品的質(zhì)量，保證用藥安全，筆者參照《中國藥典》（2010年版）二部附錄［3］和相關(guān)文獻［4－8］，采用氣相色譜法檢測甲醇、乙醇、四氫呋喃、乙酸乙酯4種有機溶劑的殘留量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 6890氣相色譜儀，氫火焰離子檢測器（FID）.

1.2 試藥 還原型谷胱甘肽原料藥（浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號121101，121102，121103）。甲醇、乙醇和N，N－二甲基甲酰胺（DMF）均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：DB－624毛細管柱（60m× 0.25mm×0.25μm）；程序升溫：以40℃保持10 min，以30℃·min－1的升溫速率升至200℃，維持時間5min，進樣口溫度：200℃；檢測器溫度：220℃；檢測器：FID；設(shè)置分流比10∶1；載氣為氮氣，載氣流速：3mL·min－1；氫氣流速40mL·min－1，空氣流速400mL·min－1；進樣量：1μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 對照品儲備液：精密稱取甲醇0.108 54g、乙醇0.100 21g、乙酸乙酯0.100 21g、四氫呋喃0.053 36g，分別置于100mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀釋至刻度，得到4種對照品儲備液。

混合對照品使用液：分別精密量取甲醇、乙醇、乙酸乙酯、四氫呋喃4種對照品儲備液15，25，25和10mL，置于同一100mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀釋至刻度，作為混合對照品使用液。

混合對照品溶液：精密量取混合對照品儲備液4mL，置于20mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀釋至刻度。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取谷胱甘肽（批號121101）0.1g，置于10mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀釋至刻度，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3 專屬性實驗 分別取溶劑、混合對照品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1，甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氫呋喃的保留時間分別為5.69，6.93，11.74和12.27min，理論板數(shù)均大于5 000，分離度均大于1.5，專屬性良好。

圖1 氣相色譜圖A.空白溶劑；B.殘留有機溶劑；1.甲醇；2.乙醇；3.乙酸乙酯；4.四氫呋喃Fig.1 GC chromatogramsA.blank solvent；B.residual organic solvents；1.menthanol；2.ethanol；3.dichlormethane；4.tetrahydrofuran

2.4 精密度實驗 取混合對照品溶液1μL，重復(fù)6次注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，取其峰面積，以外標法計算測定結(jié)果，并計算相對標準偏差（RSD）。甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氫呋喃的RSD分別為0.7%，0.1%，0.1%和0.4%，表明儀器精密度良好。

2.5 線性范圍 分別精密移取混合對照品使用液0.2，0.5，1.0，2.0，3.0和4.0mL，置于10mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀釋至刻度，搖勻，即得標準曲線溶液，共6份，分別精密量取1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積A對應(yīng)質(zhì)量濃度C（μg·mL－1）進行線性回歸，結(jié)果見表1。

表1 各有機溶劑線性回歸方程Tab.1 Linearity equations of the solvents （n＝6）

2.6 定量限與檢測限 取混合對照品使用液1mL，置于10mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀釋至刻度，搖勻，精密量取1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氫呋喃的信噪比（S／N）分別為64.7，56.0，89.0和26.2，由此計算檢出限分別為0.754 2，1.340 8，0.842 78和0.610 4μg·mL－1，定量限分別為2.513 9，4.469 2，2.809 3和2.034 6 μg·mL－1。

2.7 加樣回收實驗 取谷胱甘肽（批號121101）0.1 g，分別置于10mL量瓶中，分別加入混合對照品使用液1.6，2.0和2.4mL，加DMF－水（3∶7）稀釋至刻度，得低、中、高3個質(zhì)量濃度的供試品溶液，進樣1μL測定，按外標法計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 谷胱甘肽中4種殘留有機溶劑回收率Tab.2 Recovery rate of residual organic solvents in reduced glutathione

2.8 重復(fù)性實驗 取6份供試品溶液和混合對照品溶液各1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，取其峰面積，以外標法計算測定結(jié)果，其中甲醇RSD為1.5%，乙醇RSD為0.5%，表明該法重復(fù)性良好。

2.9 樣品測定 精密量取混合對照品溶液1μL，重復(fù)進樣6次。另取3批樣品，批號分別為121101，121102，121103，精密稱定0.1g，置于10mL量瓶中，加DMF－水（3∶7）稀釋至刻度，過濾，取續(xù)濾液，作為供試品溶液，取1μL，注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，3批樣品的實驗結(jié)果見表3，均符合《中國藥典》2010年版（二部）的要求。

表3 谷胱甘肽中有機溶劑的測定結(jié)果Tab.3 Results of determination of residual organic solvents in reduced glutathione

3 討論

谷胱甘肽又名還原型谷胱甘肽，易溶于水、稀醇、液氨和N，N－二甲基甲酰胺（DMF），而微溶于或不溶于醇、醚和酮。考察谷胱甘肽在水、DMF－水（3∶7）、DMF－水（7∶3）和DMF中的溶解性，進行了比較，供試品稱量約為0.1g，分別加上述溶劑10mL，結(jié)果在水、DMF－水（3∶7）中能完全溶解，在DMF－水（7∶3）溶液中超聲處理5min溶解完全，在DMF中超聲處理15min溶解完全。取上述4種溶劑進樣分析，發(fā)現(xiàn)前2種溶劑峰較小，后2種溶劑峰很大。為了兼顧樣品的溶解性、緩解進樣針進樣阻力及減小溶劑峰的影響，最終選擇用DMF－水（3∶7）作為溶解供試品的溶劑。

在建立的有機溶劑殘留量的GC檢查方法過程中，曾嘗試過HP－5、DB－624和HP－INNOWAX 3種不同極性的彈性石英毛細管柱進行分析實驗，考察各目標物的分離度，結(jié)果用DB－624的分離度和拖尾因子均優(yōu)于其他2種，故選其為分析用色譜柱進行后續(xù)實驗。

藥品中溶劑殘留不僅有可能增加藥品不良反應(yīng)，而且影響藥物的穩(wěn)定性。被檢測的4種溶劑中甲醇和四氫呋喃為二類溶劑，乙醇和乙酸乙酯為三類溶劑，在《中國藥典》2010年版二部附錄［3］中都有很嚴格的限量控制范圍。在3批樣品的檢測結(jié)果中雖然均未檢出四氫呋喃和乙酸乙酯，但為了確保樣品質(zhì)量，減少不良反應(yīng)，建議檢測谷胱甘肽中這4種殘留溶劑。

實驗表明該檢驗方法準確可靠，可用于谷胱甘肽中甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氫呋喃殘留量的檢查。此法能滿足藥品分析的要求，可作為生產(chǎn)過程中的質(zhì)量監(jiān)控，也可用于上市產(chǎn)品的質(zhì)量檢測。

［1］徐秋霞.谷胱甘肽的化學合成研究［D］.上海：東華大學，2010：14－19.

［2］馬建，朱義福，周新榮，等.有機溶劑沉淀法初步提純谷胱甘肽抽提液的研究［J］.現(xiàn)代化工，2013，33（9）：53－55.

［3］國家藥典委員會.中國藥典2010年版［S］.二部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄61－65.

［4］肖健.氣相色譜法測定普瑞巴林原料藥中有機溶劑殘留量［J］.中國藥業(yè)，2014，23（17）：44－45.

［5］焦豪妍，沈小鐘，張現(xiàn)濤，等.氧化型谷胱甘肽中有機溶劑殘留的毛細管GC測定［J］.今日藥學，2011，21（6）：335－336.

［6］賴成敏，肖健，黃仁杰.氣相色譜法測定伏立諾他原料藥中的有機溶劑殘留量［J］.西北藥學雜志，2012，27（6）：536－538.

［7］張長軍，劉軍，沈慶欽，等.毛細管氣相色譜法測定霉酚酸酯原料藥中有機溶劑殘留量［J］.化學分析計量，2014，23（4）：60－62.

［8］張秉華，馬雯霞，王發(fā).氣相色譜法測定硝酸咪康唑原料的殘留溶劑［J］.西北藥學雜志，2014，29（4）：368－370.

Determination of residual organic solvents in reduced glutathione by capillary GC

LI Lu1，LI Danfeng2（1.Guangxi－ASEAN Test Center for Food and Drug Safety，Nanning 530001，China；2.Guangxi Institute for Food and Drug Control，Nanning 530021，China）

Objective To establish a gas chromatography（GC）method for the determination of residual organic solvents in reduced glutathione.Method Capillary gas chromatography（GC）was applied.The residues of menthanol，ethanol，dichlormethane and tetrahydrofuran were determined by GC with DB－624capillary column（60m×0.25mm×0.25μm），and hydrogen flame ionization detector（FID）.The column temperature was programmed.The solvent was DMF－water（3∶7）.Results The four solvents were separated completely and showed a linear relationship in the investigated range.Satisfactory recovery rate were obtained.Conclusion The established method is sensitive，accurate and suitable for the determination of residual organic solvents in reduced glutathione.

reduced glutathione；solvent residue；capillary GC

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.013

R927.2

A

1004－2407（2015）04－0369－03

2014－12－17）