頂空 氣相色譜法測(cè)定藥酒中的甲醇量

王 芍，牛宇東，魏 萍（西安市食品藥品檢驗(yàn)所，西安 710054）

頂空 氣相色譜法測(cè)定藥酒中的甲醇量

王 芍，牛宇東＊，魏 萍（西安市食品藥品檢驗(yàn)所，西安 710054）

目的 建立藥酒中甲醇量的測(cè)定方法。方法 采用頂空－氣相色譜法，色譜柱為Agilent Technologies DB－WAX（30m× 0.32mm×0.25μm），F(xiàn)ID檢測(cè)器；進(jìn)樣口溫度：140℃；檢測(cè)器溫度220℃；載氣流速：0.3mL·min－1；梯度升溫：29℃保持1min，以0.5℃·min－1速率升至31℃，保持10min，以5℃·min－1速率升至65℃，保持1min，以50℃·min－1速率升至200℃，保持2min；時(shí)間周期：38min。結(jié)果 甲醇在0.000 1～0.005mL·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝0.999 4，平均回收率為99.6%，RSD 2.5%（n＝6）。結(jié)論 該方法檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于藥酒中甲醇量的控制。

甲醇；藥酒；頂空－氣相色譜法

藥酒是常用的中藥制劑，具有舒經(jīng)活血、溫通發(fā)散、引藥歸經(jīng)等獨(dú)特的功效，在臨床上被廣泛應(yīng)用。但其生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生微量的甲醇［1］，也有不法分子采用工業(yè)乙醇勾兌藥酒，其甲醇含量較高，會(huì)引起頭痛、惡心、失明甚至死亡，嚴(yán)重危害人民群眾的身體健康。因此在《中國藥典》2010年版一部中嚴(yán)格規(guī)定了甲醇量的限度，不得超過萬分之五［2］。

目前檢測(cè)藥酒中甲醇量的方法主要有光度法［3］、氣相色譜法［4］、極譜法［5］，其中應(yīng)用最多的是氣相色譜法。而頂空－氣相色譜法［6］可以免除冗長繁瑣的樣品前處理過程，避免有機(jī)溶劑帶入的雜質(zhì)對(duì)分析造成干擾，減少對(duì)色譜柱及進(jìn)樣口的污染，有利于對(duì)小分子揮發(fā)性有機(jī)成分進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。本文采用頂空－氣相色譜法對(duì)蟲草雙參酒中的甲醇進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)單，專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好，可用于藥酒中甲醇量的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent Technologies 7890A氣相色譜儀（包括Agilent Technologies G1888頂空進(jìn)樣儀；FID檢測(cè)器）；Agilent Chemstation色譜工作站；20 mL頂空進(jìn)樣瓶，聚四氟乙烯薄膜包裹的硅橡膠塞，鋁封套。

1.2 試藥 蟲草雙參酒（批號(hào)20120319，20120320，20120401，西安阿房宮制藥有限公司）。實(shí)驗(yàn)用水為超純水（Millipore公司）；甲醇（Fisher Scientific色譜純）；高純氮?dú)?；高純氫氣；干燥空氣?/p>

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 毛細(xì)管柱：Agilent Technologies DB－WAX（30m×0.32mm×0.25μm）；進(jìn)樣口溫度：140℃；檢測(cè)器溫度220℃；載氣流速：0.3mL·min－1；梯度升溫：29℃保持1min，以0.5℃·min－1速率升至31℃，保持10min，5℃·min－1速率升至65℃，保持1 min，以50℃·min－1速率升至200℃，保持2min；時(shí)間周期：38min。頂空條件：平衡溫度80℃；平衡時(shí)間20min，傳輸管線溫度100℃。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密量取甲醇，加水制成0.01mL·mL－1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取蟲草雙參酒作為供試品溶液。

2.4 空白溶液的制備 取配制甲醇用的去離子水作為空白溶液。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液0.5，1，2，5，12.5和25mL，分別置于50mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，各取3mL按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積的積分值（Y）與對(duì)照品的體積分?jǐn)?shù)（X）進(jìn)行回歸，得回歸方程：Y＝36.997 X－1.772 6，r＝0.999 4，結(jié)果表明，甲醇在0.000 1～0.005mL·mL－1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取體積分?jǐn)?shù)1‰甲醇對(duì)照品溶液，按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得甲醇峰面積的積分值的RSD為0.96%。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一批次的供試品溶液，分別于0，6，12，24，48和72h按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)得甲醇峰面積的積分值的RSD為1.70%。結(jié)果表明在72h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批次的供試品溶液5份，按上述色譜條件測(cè)得甲醇的含量的RSD為0.90%。結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率實(shí)驗(yàn) 精密吸取甲醇7.5，15和30μL，置于200mL量瓶中，加已知含量（0.076‰）的供試品溶液至刻度，每一體積分?jǐn)?shù)平行配制兩份，作為回收率實(shí)驗(yàn)溶液，分別測(cè)定其甲醇含量，結(jié)果回收率為99.6%，RSD為2.5%，見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 The results of recovery test （n＝6）

2.10 樣品測(cè)定 取3批供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果Tab.2 Determination of sample contents

3 討論

3.1 氣相色譜條件的篩選 筆者采用《中國藥典》規(guī)定的方法，在現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)室條件下，對(duì)樣品進(jìn)行了甲醇量的反復(fù)測(cè)定，結(jié)果無法達(dá)到基線分離，理論板數(shù)達(dá)不到藥典要求，不能準(zhǔn)確測(cè)定甲醇含量。故對(duì)氣相條件進(jìn)行了摸索，分別考察了以下條件：0.1，0.3和0.5mL·min－1的載氣流速；25，27，29，31，35，40和65℃初始溫度；0.5，1，3，5和10℃·min－1速率。最后摸索出本實(shí)驗(yàn)方法，結(jié)果分離度大于1.5，理論板數(shù)大于50 000，見圖1。

圖1 甲醇?xì)庀嗌V圖Fig.1 GC chromatogram of methanol

3.2 頂空條件的篩選

3.2.1 平衡時(shí)間 精密量取甲醇溶液5份，分別考察5，10，15，20和30min平衡后甲醇峰面積。結(jié)果顯示，平衡時(shí)間在0～15和20～30min時(shí)變化不大，而在15～20min有明顯的上升趨勢(shì)，且在20min達(dá)到頂點(diǎn)，故選擇20min作為樣品的平衡時(shí)間。

3.2.2 平衡溫度 精密量取甲醇溶液5份，考慮到甲醇的沸點(diǎn)為64.5℃，故選擇70，75，80，85和90℃的平衡溫度進(jìn)行考察。結(jié)果表明隨著溫度的升高，甲醇峰面積的響應(yīng)值逐漸增大，但是考慮到中藥酒劑含有的成分比較復(fù)雜，采用較高平衡溫度，一方面可以使樣品表面形成薄膜，阻擋揮發(fā)性成分的氣化，另一方面蒸發(fā)出的雜質(zhì)也增多，影響結(jié)果，故選用80℃作為樣品的平衡溫度。

3.3 檢出限與定量限 由于儀器的靈敏度較高，很微量的甲醇就可以出現(xiàn)信號(hào)峰，但較小的峰誤差比較大，不能滿足定量的要求，因此需確定檢出限和定量限，使結(jié)果準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)中取標(biāo)準(zhǔn)曲線的最低體積分?jǐn)?shù)0.1‰連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)得信噪比S／N＝3時(shí)的最低體積分?jǐn)?shù)為0.003‰，作為檢出限；S／N＝10時(shí)的最低體積分?jǐn)?shù)為0.01‰，作為定量限。

［1］王麗，徐長根，高海，等.GC法測(cè)定藥酒中甲醇量［J］.西北藥學(xué)雜志，1998，13（6）：283.

［2］國家藥典委員會(huì).中國藥典2010年版［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄60－61

［3］李晶，鄭立慶，張?zhí)鹛?，?賴氨酸－甲醇－1，2－萘醌－4－磺酸鈉體系褪色光度法測(cè)定甲醇［J］.應(yīng)用化學(xué)，2010， 27（4）：484－487.

［4］米爾芳，王彩云.氣相色譜測(cè)定酒中甲醇含量的不確定度分析［J］.實(shí)用醫(yī)技雜志，2008，15（10）：1318－1320.

［5］付華鋒，孫林，過瑋，等.基于甲醇自由基還原波的甲醇極譜測(cè)定［J］.分析實(shí)驗(yàn)室，2002，21（10）：76－79.

［6］吉同琴，趙硯榮，魏佳，等.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定替加環(huán)素中的殘留溶劑［J］.西北藥學(xué)雜志，2012，27（2）：123－124.

Determination of methanol in herb wine by headspace GC with capillary column

WANG Shao，NIU Yudong＊，WEI Ping（Xi′an Institute for Food and Drug Control，Xi′an 710054，China）

Objective To establish a method for determination of methanol in the herb wine.Methods Head space GC with capillary column Agilent Technologies DB－WAX（30m×0.32mm×0.25μm）was used，and the detector was FID.The injector temperature was 140℃，the detector temperature was 220℃，and the velocity of carrier gas was 0.3mL·min－1.The column temperature was changed according to the following program：initial temperature was kept at 29℃for 1min，then raised to 31℃at the rate of 0.5℃·min－1，maintained for 10min，then raised to 65℃at the rate of 5℃·min－1，maintained for 1min，then raised to 200℃at the rate of 50℃·min－1，maintained for 2min.The cycle time was 38min.Results Methanol showed a good linear relationship in the range of 0.000 1－0.005mL·mL－1（r＝0.999 4），and the average recovery was 99.6%with RSD 2.5%（n＝6）.Conclusion This method is simple and accurate，has a strong specificity，high sensitivity and fine reproducibility.It could be used to determine methanol in herb wine.

methanol；herb wine；head－space gas－chromatography

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.012

R927.2

A

1004－2407（2015）04－0367－03

2014－11－19）

王芍，女，中藥師

＊通信作者：牛宇東，女，主任中藥師