痔炎沖洗靈散劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

黃 芊，陳茹茹，袁倩倩，岳寶森，竇建衛(wèi)＊（.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 7006；.陜西中醫(yī)學(xué)院，咸陽 7046；.西安市中醫(yī)醫(yī)院，西安 7000）

痔炎沖洗靈散劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

黃 芊1，陳茹茹2，袁倩倩1，岳寶森3，竇建衛(wèi)1＊（1.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 710061；2.陜西中醫(yī)學(xué)院，咸陽 712046；3.西安市中醫(yī)醫(yī)院，西安 710001）

目的 建立痔炎沖洗靈散劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用TLC法對(duì)痔炎沖洗靈中青黛、大黃進(jìn)行定性鑒別，用HPLC法測(cè)定野菊花中蒙花苷的含量。結(jié)果 定性鑒別專屬性好，陰性對(duì)照無干擾；蒙花苷含量在0.092 8～1.113 6μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.999 9）；平均回收率為99.6%RSD＝1.5%（n＝6）。結(jié)論 建立的分析方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，可作為痔炎沖洗靈的質(zhì)量控制方法。

痔炎沖洗靈散劑；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；HPLC

痔炎沖洗靈散劑是西安市中醫(yī)院院內(nèi)制劑，由冰片、明礬、野菊花、青黛、生大黃等十味中藥組成，具清熱消腫、祛腐生肌、收濕殺蟲、止血止癢的功效，用于肛門直腸的急慢性炎癥，如：肛痛及血栓外痔初期，炎性外痔，肛裂肛瘺感染，內(nèi)痔嵌頓，肛竇炎，濕疹，結(jié)、直腸炎（保留灌腸）等。該制劑為西安市中醫(yī)醫(yī)院肛腸科保守治療的主要藥物之一，臨床使用療效顯著、可靠，深受廣大醫(yī)生、患者好評(píng)。為有效控制藥品的質(zhì)量，保證臨床用藥安全，本實(shí)驗(yàn)采用薄層色譜法對(duì)青黛、大黃進(jìn)行薄層鑒別；采用HPLC法對(duì)野菊花中的有效成分蒙花苷進(jìn)行含量測(cè)定。本法操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為本制劑的質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（日本島津LC－20A高效液相色譜儀）；N2010色譜工作站（浙江大學(xué)色譜信息研究所）；C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm，江蘇漢邦公司生產(chǎn)）；YP1201N型分析天平（上海天平儀器廠）；超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）；FA1104型0.1mg微量分析天平（上海天平儀器廠）。

1.2 試藥 蒙花苷對(duì)照品（批號(hào)111528－200504，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；大黃對(duì)照藥材（批號(hào)121249－200402，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；青黛對(duì)照藥材（批號(hào)121170－200001，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；痔炎沖洗靈由西安市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供；甲醇為色譜純；其余均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 大黃 取本品5g，放入30mL甲醇中浸泡1 h，濾過，濾液蒸干，剩余殘?jiān)芙庥?0mL水中，加鹽酸1mL，加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)芙庥? mL三氯甲烷中，作為供試品溶液。取大黃對(duì)照藥材1g，放入30mL甲醇中浸泡1h，濾過，濾液蒸干，剩余殘?jiān)芙庥?0mL水中，加鹽酸1mL，加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)芙庥?mL三氯甲烷中，制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）實(shí)驗(yàn)，將上述溶液各吸取6μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，制備石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，將點(diǎn)有供試品溶液及對(duì)照藥材溶液的薄層板放入展開缸中，展開，取出，晾干，置于紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性無干擾［1］。

2.2 青黛 取本品5g，加三氯甲烷30mL，超聲處理（功率240W，頻率50Hz）20min，濾過，濾液作為供試品溶液。取青黛對(duì)照藥材1g，加三氯甲烷30 mL，超聲處理（功率240W，頻率50Hz）20min，濾過的濾液制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅥB）實(shí)驗(yàn)，將上述溶液各吸取10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，制備苯－三氯甲烷－丙酮（5∶4∶1）為展開劑，將點(diǎn)有供試品溶液及對(duì)照藥材溶液的薄層板放入展開缸中，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾。

3 含量測(cè)定

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇－5mL·L－1醋酸溶液（50∶50）［2］為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)326nm。理論板數(shù)按蒙花苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。

3.2 對(duì)照品溶液的制備 取蒙花苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備 取本品約10g，精密稱定，置于100mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50mL，稱定質(zhì)量，加熱回流3h，放冷至室溫，稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 專屬性實(shí)驗(yàn) 精密吸取蒙花苷對(duì)照品溶液5 μL、痔炎沖洗靈供試品溶液5μL、缺野菊花藥材的陰性對(duì)照溶液5μL，注入高效液相色譜儀，按3.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，在供試品溶液中，蒙花苷峰與其他色譜峰達(dá)到分離，陰性對(duì)照溶液在與蒙花苷對(duì)照品相同的位置上并未出現(xiàn)色譜峰，表明本品中其他成分對(duì)蒙花苷測(cè)定無干擾。

圖1 HPLC圖A.對(duì)照品；B.供試品；C.陰性對(duì)照品；1.蒙花苷Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.sample；C.negative sample；1.buddleoside

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 取蒙花苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含蒙花苷0.371 2mg的溶液作為蒙花苷儲(chǔ)備溶液，精密量取儲(chǔ)備溶液適量，加甲醇稀釋制成蒙花苷質(zhì)量濃度分別為0.018 56，0.037 12，0.074 24，0.111 36，0.148 48，0.185 60和0.222 72mg·mL－1的溶液，將以上溶液分別進(jìn)樣5μL，采集數(shù)據(jù)。以蒙花苷各進(jìn)樣量值作為橫坐標(biāo)（X），以峰面積積分值作為縱坐標(biāo)（Y），得回歸方程：Y＝2 124 989.08 X－12 725.29，r＝0.999 9。表明蒙花苷在0.092 8～1.113 6μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.6 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取蒙花苷對(duì)照品溶液和供試品溶液各5μL，分別重復(fù)進(jìn)樣5次，計(jì)算出RSD值分別為1.12%和1.32%，表明儀器精密度良好。

3.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5μL，每隔一定時(shí)間測(cè)定1次（0，2，4，6，12和24h），結(jié)果對(duì)照品溶液和供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好，RSD值分別為0.84%和1.54%。

3.8 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取6份批號(hào)為20131101的樣品，按照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取對(duì)照品和供試品溶液各5μL進(jìn)樣，測(cè)定，計(jì)算樣品中蒙花苷的含量，測(cè)得蒙花苷的平均含量為15.52 mg·袋－1，RSD為0.98%，表明本品重復(fù)性良好。

3.9 加樣回收實(shí)驗(yàn) 取批號(hào)為20131101的樣品6份，每份約5g，依次加入對(duì)照品2.65mg，按照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 The results of recovery test （n＝6）

3.10 樣品測(cè)定 按上述方法對(duì)3批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果分別為15.95，15.57和15.67mg·袋－1，結(jié)合《中國(guó)藥典》（2010年版一部）野菊花藥材項(xiàng)下蒙花苷的含量限度規(guī)定（含蒙花苷不得少于0.8%）及其他因素，暫定本品每袋含蒙花苷不得少于10mg。

4 討論

痔炎沖洗靈散劑是復(fù)方制劑，含藥物多，成分復(fù)雜，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制指標(biāo)成為質(zhì)控中的難點(diǎn)，因此我們對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。對(duì)痔炎沖洗靈中十味藥物進(jìn)行篩選，結(jié)果：青黛、大黃的薄層鑒別，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上有相同的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾，方法具有專一性。采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中蒙花苷的含量［3－5］，分離度好，精密度高，重復(fù)性好，陰性無干擾。通過對(duì)痔炎沖洗靈中物質(zhì)定性鑒別、含量測(cè)定及方法學(xué)考察的研究表明，此方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制的依據(jù)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典2010年版［S］.一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：283－284.

［2］黃杰芳.復(fù)方感冒靈片中蒙花苷的含量測(cè)定研究［J］.海峽藥學(xué)，2012，24（11）：71－72.

［3］賀建春，冼少華，張遠(yuǎn)強(qiáng)，等.HPLC法測(cè)定鼻炎康片中間產(chǎn)品干浸膏粉中蒙花苷的含量［J］.西北藥學(xué)雜志，2010，25（4）：258－259.

［4］高超.HPLC法測(cè)定夏桑菊顆粒中蒙花苷的含量［J］.中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2013，20（3）：64－65.

［5］唐維宏，韋建華，馬云婷.HPLC測(cè)定密蒙花配方顆粒中蒙花苷含量［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（20）：50－51.

Study on the quality standard of Zhiyanchongxiling Powder

HUANG Qian1，CHEN Ruru2，YUAN Qianqian1，YUE Baosen3，DOU Jianwei1＊（1.School of Pharmacy，Xi′an Jiaotong University，Xi′an 710061，China；2.Shaanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046，China；3.Xi′an Traditional Chinese Medi－cine Hospital，Xi′an 710001，China）

Objective To establish the quality standard for Zhiyanchongxiling Powder.Method Indigo Naturalis and Rhubarb in the prescription were identified by TLC.Quantative analysis of buddleoside which is an effective component of the formula was adopted by HPLC.Results The TLC of Indigo Naturals and Rhubarb showed good specificity and no negative interference was observed.The calibration curve of buddleoside was in good linearity over the range of 0.092 8－1.113 6μg（r＝0.999 9）and the average recovery was 99.6%（RSD＝1.5%，n＝6）.Conclusion The method is simple，sensitive and accurate，and could be used for the quality control of Zhiyanchongxiling Powder.

Zhiyanchongxiling Powder；quality standard；TLC；HPLC

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.04.010

R282

A

1004－2407（2015）04－0361－03

2014－09－10）

黃芊，女，中藥師，在讀碩士研究生

＊通信作者：竇建衛(wèi)，男，博士，副教授