瓜蔞薤白白酒湯對硬膜下血腫模型大鼠抗凝血實驗

卞 海， 楊 帆， 張 靜， 宋 燕， 陳皖晴， 王雅娟*

（1.安徽中醫(yī)藥大學，安徽合肥230038；2.安徽省中醫(yī)院，安徽合肥230031）

瓜蔞薤白白酒湯對硬膜下血腫模型大鼠抗凝血實驗

卞 海1， 楊 帆2， 張 靜2， 宋 燕2， 陳皖晴1， 王雅娟1*

（1.安徽中醫(yī)藥大學，安徽合肥230038；2.安徽省中醫(yī)院，安徽合肥230031）

目的探討瓜蔞薤白白酒湯在大、中、小劑量下對硬膜下血腫模型大鼠的治療作用以及對血清中炎癥因子的影響。方法將SD大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型對照組、陽性組 （天丹通絡(luò)膠囊）、瓜蔞薤白白酒湯大、中、小劑量組，每組10只，同時建立硬膜下血腫模型。各組連續(xù)灌胃14 d后麻醉大鼠，進行腹主動脈取血，比較血腫面積，測定血液流變性中的凝血酶原水平、凝血酶含量和纖維蛋白原水平，觀察各項指標的差異性及瓜蔞薤白白酒湯大、中、小劑量組對硬膜下血腫的治療作用，并比較其治療效果。結(jié)果瓜蔞薤白白酒湯大、中、小劑量組能夠減小硬膜下血腫模型大鼠血腫面積，降低血漿中凝血酶水平，升高纖維蛋白原和凝血酶原水平，其中中劑量和大劑量組效果更顯著。與模型組比較，以上3組差異均具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01，P＜0.05）。結(jié)論瓜蔞薤白白酒湯能減小血腫面積，從而起到腦保護作用，并且能降低血液中凝血酶水平，升高纖維蛋白原和凝血酶原水平，發(fā)揮抑制凝血系統(tǒng)的功能，從而對硬膜下血腫具有治療作用。

瓜蔞薤白白酒湯；硬膜下血腫；凝血酶；纖維蛋白原

硬膜下血腫（subdural hematoma，SDH）是指顱內(nèi)出血血液積聚在硬腦膜下腔，在顱內(nèi)血腫中發(fā)生率最高。根據(jù)傷后血腫發(fā)生的時間，分為急性硬膜下血腫 （傷后3天以內(nèi)）、亞急性硬膜下血腫 （傷后3天至3周內(nèi)發(fā)生）和慢性硬膜下血腫。在神經(jīng)外科的顱內(nèi)血腫疾病中，最為常見［1］。由于易患人群比較特殊，硬膜下血腫一旦發(fā)生，不易自愈，通常需采用手術(shù)治療，但治療效果并不是十分理想，死亡率達 1.5% ～8%，術(shù)后復(fù)發(fā)率達9.2% ～26.5%［2］。癥狀較輕的硬膜下血腫患者，可采用中醫(yī)中藥活血化瘀法促進腦部積液的吸收，治療硬膜下血腫［3-4］。中醫(yī)學認為，本病的病理機制為痰瘀互結(jié)，清竅被蒙，故治療必須化瘀、滌痰兼而顧之，達到瘀血祛而新血生，促進血腫吸收的目的［5-6］?；鰷焯捣郊匆曰?、滌痰為大法，可加快血腫吸收，改善血腫引起的眩暈、肢體麻木等癥狀，作為一種非手術(shù)療法，不失簡便有效。瓜蔞薤白白酒湯出自東漢張仲景 《金匱要略》，由瓜蔞、薤白、白酒組成，功用通陽散結(jié)、行氣祛痰。本實驗旨在觀察瓜蔞薤白白酒湯對硬膜下血腫動物模型凝血功能的影響，對其治療硬膜下血腫作用及其機制進行初步探討，為臨床用藥提供實驗依據(jù)。

1 實驗的材料與方法

1.1 實驗動物與藥物 取60只雄性SD大鼠，體質(zhì)量均為（200±15）g，由安徽長臨河醫(yī)藥科技有限公司動物中心提供，許可證號：SCXK（蘇）2007-0004；瓜蔞薤白白酒湯由瓜蔞24 g、薤白12 g、白酒適量，三味同煮，濃縮，使每1 m L濃縮液含生藥1.0 g；陽性藥為天丹通絡(luò)膠囊 （山東鳳凰制藥股份有限公司，批號1301233）。

1.2 實驗試劑與器材 水合氯醛 （青島宇龍海藻有限公司，批號20110305）；大鼠凝血酶檢測試劑盒 （賽奧生物科技 （青島）有限公司，批號CK-E75129C）；大鼠凝血酶原檢測試劑盒 （上海源葉生物技術(shù)有限公司，批號CKE75063C）；大鼠纖維蛋白原檢測試劑盒 （上海邦奕生物科技有限公司，批號10335R）；牙骨粉 （登騰 ［北京］醫(yī)療器械商貿(mào)有限公司，批號3633612）；EDTA-Na2抗凝管（北京美科生物技術(shù)開發(fā)公司，批號2014038）；電子秤（華鷹衡器有限公司）；GTR16-2低溫離心機 （安徽時代離心機有限公司）；SM-12D電熱恒溫水槽 （南京舜瑪儀器設(shè)備有限公司）；DNM-9602A酶標分析儀 （上海邦奕生物科技有限公司）。

1.3 模型制備 取60只成年雄性SD大鼠，7 d的適應(yīng)性飼養(yǎng)后，手術(shù)開胸，注射3.5%水合氯醛 （1 mL/100 g），麻醉大鼠，將SD大鼠頭部鼠毛剃去4 cm×4 cm，消毒，在正中處，打開3 cm的切口，將大鼠右側(cè)的頭皮、肌層部位分別剝離；然后進行眼眥取血約5 mL，用牙科鉆在頭頂鉆出骨孔，定位于前囟右下側(cè)2.5 mm處，半徑約0.5 mm，向硬膜下腔隙注射自體血液，自體血液經(jīng)眼眥取出，5 min后拔出，封閉骨孔，縫合，滴加頭孢以抗感染。假手術(shù)組大鼠造模方法與模型組相同，但不注射自體血液。

1.4 分組及給藥 造模后，將大鼠隨機分為假手術(shù)組、陽性對照組 （天丹通絡(luò)膠囊）、模型組、瓜蔞薤白白酒湯 （大，中，小）劑量組，每組10只。按劑量灌胃給藥，劑量如下：瓜蔞薤白白酒湯大劑量組為55.53 g/kg；瓜蔞薤白白酒湯中劑量組為28.27 g/kg；瓜蔞薤白白酒湯小劑量組為13.13 g/kg；陽性藥組 （天丹通絡(luò)膠囊）為0.53 g/kg；假手術(shù)組和模型對照組灌胃給予同等容量蒸餾水；連續(xù)給藥15 d。

1.5 處理動物 15 d后，末次給藥1 h后，注射3.5%水合氯醛 （1.0mL/100 g）麻醉，打開腹腔，腹主動脈采血，將取出的血液放入EDTA-Na2抗凝管，低溫離心15 min，后取出血漿放入EP管中，并以3 000 r/min離心15 min將EP管中的血離心取得血清。取鼠腦 （去除小腦），用冰生理鹽水沖洗腦組織并稱定質(zhì)量，比較硬膜下血腫區(qū)域的面積，并置-20℃冰箱中保存待測。

1.6 數(shù)據(jù)處理 采用均數(shù)±方差 （x±s）表示，采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析軟件，單因素方差分析，以統(tǒng)計數(shù)據(jù)P＜0.05為標準，并認為有統(tǒng)計學意義。

2 實驗結(jié)果

2.1 比較硬膜下血腫模型大鼠血腫面積 對比假手術(shù)組大鼠右側(cè)腦，模型組大鼠右側(cè)血腫面積較大，提示血腫塊消散不好；大、中、小劑量組對比模型組均有改善，其中大劑量組效果最明顯，作用與陽性藥相當，中劑量組次之，小劑量組有效，但效果欠佳。見圖1。

圖1 硬膜下血腫模型大鼠血腫面積

2.2 比較硬膜下血腫模型大鼠凝血酶水平 與假手術(shù)組比較，模型組凝血酶水平升高較多，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。與模型對照組比較，瓜蔞薤白白酒湯的中劑量組、大劑量組凝血酶水平下降，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖2。

圖2 硬膜下血腫模型大鼠凝血酶水平

2.3 比較硬膜下血腫模型大鼠凝血酶原、纖維蛋白原水平

同假手術(shù)組比較，模型對照組凝血酶原水平下降較多，兩者差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01），與模型對照組比較，瓜蔞薤白白酒湯大劑量組、中劑量組、小劑量組的凝血酶原水平上升，此差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01）；與假手術(shù)組比較，模型組纖維蛋白原水平下降，差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01），與模型組比較，瓜蔞薤白白酒湯大劑量組、中劑量組、小劑量組纖維蛋白原水平上升，差異也具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01，P＜0.05）。見表1。

表1 硬膜下血腫模型大鼠凝血酶原、纖維蛋白原水平（x±s，n=10）

3 討論

凝血過程是一系列的酶促反應(yīng)過程，最后使血漿中的可溶性纖維蛋白原變成不可溶的纖維蛋白［7］。凝血酶原在凝血機制中起著中心主導(dǎo)的作用，在激活的因子Ⅴ，和由血小板或其他細胞提供的磷脂表面存在的情況下，凝血酶原激活形成了凝血酶。凝血酶是一種重要的蛋白水解酶，對多種凝血因子起到水解作用，能直接作用于血液中的纖維蛋白原，促使其AB肽鏈斷裂轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂心钚缘睦w維蛋白，從而引發(fā)凝血和血栓生成［8-10］。正常情況下，凝血酶原、凝血酶及纖維蛋白原處于動態(tài)平衡中。制備大鼠硬模下血腫模型時，注入的自體血液中凝血酶原被激活，促使大量凝血酶的生成，生成的凝血酶可通過受體途徑激活神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞使之產(chǎn)生并釋放大量細胞因子和毒性物質(zhì)而損傷血腦屏障導(dǎo)致其通透性改變［6］。從而使凝血因子進入血液循環(huán)引起血液中凝血酶急劇上升，而凝血酶原水平同時下降。在凝血酶的這種催化作用下，導(dǎo)致纖維蛋白原水平下降［11-13］。

造模成功后凝血酶原被激活，水平迅速降低，血液中凝血酶迅速升高，使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，從而纖維蛋白原水平降低纖維蛋白水平升高；給藥后，各指標趨于正常值，并好于正常值，其中凝血酶水平降低，凝血酶原和纖維蛋白原水平升高，提示大鼠硬膜下血腫正在逐漸減少，甚至消失。

瓜蔞薤白白酒湯通過降低了血液中凝血酶的水平，從而降低纖維蛋白的水平來發(fā)揮抗凝血作用，凝血酶水平的降低也使對血腦屏障的通透性降低從而一定程度上保護了血腦屏障起到腦保護作用。瓜蔞薤白白酒湯通過阻斷凝血酶原向凝血酶的轉(zhuǎn)化作用，進一步降低凝血酶的水平，同時通過阻斷凝血酶對纖維蛋白原的激活作用而進一步降低纖維蛋白的水平。

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2015-01-16

2013年度安徽省高等學校省級自然科學研究項目 （KJ2013A173）；2014年度安徽省自然科學基金項目 （1408085QH181）

卞 海（1981—），男，碩士，研究方向為藥理學。Tel：13956062588，E-mail：bianhai410@126.com

*通信作者：王雅娟（1980—），女，博士，副教授，研究方向為藥理學。E-mail：wangyajuan8003@126.com