兒童哮喘支氣管肺泡灌洗液成分分析＊

陳禮娟 范如艷 范楚平 潘俊秀 肖志兵 劉 嬋

南華大學(xué)附屬郴州市醫(yī)院 郴州市兒童哮喘防治技術(shù)研發(fā)中心，湖南省郴州市 423000

兒童哮喘支氣管肺泡灌洗液成分分析＊

陳禮娟 范如艷 范楚平 潘俊秀 肖志兵 劉 嬋

南華大學(xué)附屬郴州市醫(yī)院 郴州市兒童哮喘防治技術(shù)研發(fā)中心，湖南省郴州市 423000

目的：通過對兒童哮喘支氣管肺泡灌洗液成分分析探討其發(fā)病機(jī)制。方法：應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）方法，對哮喘（29例）、支氣管肺炎（26例）和對照組（20例）共75例患兒的支氣管肺泡灌洗液進(jìn)行細(xì)胞成分分析及上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度測定。結(jié)果：哮喘組支氣管肺泡灌洗液嗜酸性粒細(xì)胞為3.3%（1.0%～9.0%），上皮細(xì)胞2.9%（0.5%～9.8%），IgE為（98.76±15.65）ngL，IL－4為（17.89±3.65）ngL，IL－13為（6.75±0.87）ngL，與支氣管肺炎組和對照組相比明顯增高，差異有非常顯著意義（P＜0.01）；哮喘組IL－12為（2.12±0.76）ngL，與支氣管肺炎組和對照組相比明顯降低，差異有非常顯著意義（P＜0.01）；支氣管肺炎組中性粒細(xì)胞明顯增多。結(jié)論：哮喘患兒支氣管肺泡灌洗液以嗜酸性粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞增多及IgE增高為其特征；哮喘患兒支氣管肺泡灌洗液IL－4、IL－13濃度增高，IL－12濃度降低，提示Th1Th2失衡是哮喘重要發(fā)病機(jī)制；支氣管肺泡灌洗液檢查可為哮喘患兒診斷提供有益線索。

兒童 哮喘 支氣管肺泡灌洗液 粒細(xì)胞 IgE 白介素

支氣管肺泡灌洗液（BALF）細(xì)胞成分及細(xì)胞因子分析能對氣道炎癥反應(yīng)進(jìn)行直觀反映，揭示哮喘發(fā)病機(jī)制，豐富人們對哮喘的認(rèn)識。本研究應(yīng)用BALF檢查技術(shù)，對臨床上常見的兒童哮喘及支氣管肺炎患兒進(jìn)行了相關(guān)炎性細(xì)胞及炎癥介質(zhì)的分析，探討B(tài)ALF檢查技術(shù)在兒童哮喘診療中的應(yīng)用及意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2012－2014年本院住院患兒，共75例，將其分成3組：（1）哮喘組：共29例，均為哮喘緩解期患兒，除外其他系統(tǒng)合并癥及并發(fā)癥患兒，除外長期或規(guī)律應(yīng)用激素史者。其中男16例，女13例；年齡5～10歲，平均年齡（5.83±2.75）歲；病程5～28d，中位病程7d。診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會兒科分會呼吸學(xué)組頒布的標(biāo)準(zhǔn)[1，2]。（2）支氣管肺炎組（肺炎組）：共26例，均為普通支氣管肺炎患兒，除外重癥肺炎和其他系統(tǒng)合并癥及并發(fā)癥患兒。其中男15例，女11例；年齡3～10歲，平均年齡（5.50 ±3.25）歲；病程4～24d，平均病程7d。診斷依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會兒科分會呼吸學(xué)組頒布的標(biāo)準(zhǔn)[3]。（3）對照組：共20例，均為支氣管異物取出術(shù)后1周復(fù)查纖維支氣管鏡術(shù)患兒，均選取健側(cè)行支氣管肺泡灌洗，除外臨床或纖維支氣管鏡下有炎癥表現(xiàn)患兒。其中男11例，女9例；年齡2～6歲，平均年齡（3.33 ±2.25）歲；病程2～26d，中位病程5d。所有患兒均獲家長知情同意并簽訂纖支鏡術(shù)及支氣管肺泡灌洗術(shù)同意書后行纖維支氣管鏡術(shù)及支氣管肺泡灌洗術(shù)。三組在年齡構(gòu)成、性別以及病程之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集[4～7]：所有患兒均術(shù)前檢查心電圖、凝血功能、術(shù)前抗體、肝炎全套、心電圖、凝血功能正常方能進(jìn)行纖支鏡下肺泡灌洗，術(shù)前30min霧化吸入可比特1.25ml（異丙托溴銨0.25mg，沙丁胺醇1.5mg）和2%利多卡因2ml，以減少氣道分泌、痙攣和達(dá)到氣道局部麻醉，術(shù)前10min靜脈推注咪達(dá)唑侖0.15～0.30mgkg鎮(zhèn)靜，手術(shù)均在持續(xù)低流量吸氧和心電監(jiān)護(hù)下進(jìn)行，選用合適鏡條，采用經(jīng)鼻腔插入法，進(jìn)入聲門、氣管時予2%利多卡因2～5ml經(jīng)活檢孔注入以達(dá)到氣道局部麻醉和減少氣道痙攣，在右中葉或左舌葉開口處以37℃生理鹽水進(jìn)行支氣管肺泡灌洗（體重小于20kg者，每次灌洗量1mlkg，共3次；體重大于20kg者，每次灌洗量20ml，使灌洗總量達(dá)3mlkg），并立即以13.3～20kPa（100～150mmHg）負(fù)壓進(jìn)行抽吸。第一次灌洗所得BALF送檢病原學(xué)培養(yǎng)，其余混勻，4℃保存，30min內(nèi)送檢?；厥章蚀笥?0%、無大氣道分泌物混入、紅細(xì)胞小于20%的標(biāo)本視為合格標(biāo)本。每份標(biāo)本均以4℃1 500rmin離心10min，其沉渣用于細(xì)胞分析，上清液置于－70℃保存，待檢。

1.2.2 細(xì)胞計數(shù)[8，9]：細(xì)胞活力以臺藍(lán)染色排除法評判；計細(xì)胞總數(shù)尿沉渣分析儀，結(jié)果以×106ml表示；分類計數(shù)細(xì)胞涂片的制備采用離心涂片法，以瑞氏－姬姆薩染色法染色，每張涂片計數(shù)200個細(xì)胞，取2張涂片的平均值。

1.2.3 BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度測定：用ELISA法檢測BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度，試劑盒為R&D公司生產(chǎn)，檢測結(jié)果單位為ngL。

2 結(jié)果

2.1 BALF細(xì)胞總數(shù)及分類計數(shù) 哮喘組和肺炎組細(xì)胞總數(shù)高于對照組（P＜0.01），提示氣道具炎癥反應(yīng)。三組間巨細(xì)胞淋巴細(xì)胞差異無顯著意義。中性粒細(xì)胞肺炎組高于對照組和哮喘組（P＜0.01），提示其氣道存在感染。哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞及上皮細(xì)胞高于對照組及肺炎組（P＜0.01）。提示哮喘組氣道存在致敏狀態(tài)，氣道黏膜上皮細(xì)胞脫落。見表1。

表1 各組BALF細(xì)胞總數(shù)及分類計數(shù)（中位數(shù)及范圍）

2.2 BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度比較 哮喘組IgE高于肺炎組和對照組（P＜0.01），提示哮喘為IgE介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。哮喘組IL－4、IL－13高于肺炎組和對照組（P＜0.01），哮喘組IL－12低于肺炎組和對照組（P＜0.01），提示哮喘兒童Th1Th2細(xì)胞失衡。見表2。

表2 各組BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度比較（±s，ngL）

表2 各組BALF上清液IgE、IL－12、IL－4、IL－13濃度比較（±s，ngL）

注：a與對照組比較，P＜0.01；b與肺炎組比較，P＜0.01。

IL－13對照組20 27.23±8.47 4.27±0.84 4.25±1.38 3.09±0.69組別n IgE IL－12IL－4肺炎組26 32.53±9.52 5.31±0.53 5.35±1.21 3.52±0.83哮喘組29 98.76±15.65ab2.12±0.76ab17.89±3.65ab6.75±0.87abF 321.156 221.468 321.042 334.283 P＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

3 討論

本研究應(yīng)用兒童BALF檢查技術(shù)，對臨床上常見的兒童哮喘及支氣管肺炎患兒進(jìn)行了相關(guān)炎性細(xì)胞及炎癥介質(zhì)的分析，探討B(tài)ALF檢查技術(shù)在兒童哮喘診療中的應(yīng)用及意義。

氣道慢性炎癥是各型各期兒童哮喘共同的病理學(xué)特征，表現(xiàn)為嗜酸性粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤和上皮損傷，嗜酸性粒細(xì)胞是強(qiáng)效的炎前細(xì)胞，活化IL－5可使之增殖和活化，并釋放更多的細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，從而導(dǎo)致氣道黏膜上皮受損和氣道高反應(yīng)性。近年國內(nèi)有作者報道哮喘患兒BALF的研究結(jié)果[10，11]，本研究支持這一觀點，提示哮喘患兒BALF中嗜酸性粒細(xì)胞及上皮細(xì)胞明顯增多為其氣道炎癥的特征性改變。

哮喘患兒血清特異性IgE的水平與疾病程度、臨床表現(xiàn)密切相關(guān)，是哮喘發(fā)病的關(guān)鍵因子，IgE介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)導(dǎo)致了哮喘急性發(fā)作[12]。本研究哮喘患兒BALF中IgE升高，提示哮喘患兒氣道內(nèi)分泌物IgE增高。哮喘的病因和發(fā)病機(jī)理相當(dāng)復(fù)雜，目前認(rèn)為是一種由多種炎癥細(xì)胞、炎性介質(zhì)和細(xì)胞因子參與的氣道慢性炎癥性疾病，其中Th1Th2型細(xì)胞因子在支氣管哮喘病理生理過程中起重要的作用[11]。哮喘患兒Th1細(xì)胞減少，而Th2升高。IL－4、IL－13主要由活化的Th2細(xì)胞分泌，影響T淋巴細(xì)胞的分化及B淋巴細(xì)胞抗體分泌，參與哮喘呼吸道炎癥形成，是哮喘發(fā)病的重要因素[13～15]。IL－12主要由活化的Th1細(xì)胞分泌，對哮喘具有保護(hù)作用，抑制呼吸道抑制反應(yīng)[16]。本研究哮喘患兒BALF中IL－4、IL－13升高，IL－12降低，提示Th1Th2型細(xì)胞因子存在不平衡是兒童哮喘慢性氣道炎癥形成的主要原因。

綜上所述，哮喘患兒BALF中嗜酸性粒細(xì)胞及上皮細(xì)胞明顯增多，IgE增高，為其氣道炎癥的特征性改變；Th1Th2失衡導(dǎo)致IL－4、IL－13升高IL－12降低是哮喘重要發(fā)病機(jī)制；BALF檢查可為哮喘患兒診斷提供有益線索。

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The Components Analysis of Bronchoalveolar Lavage Fluid of Pediatric Asthma Patients

CHEN Lijuan，F(xiàn)AN Ruyan，F(xiàn)AN Chuping，et al.Chenzhou Affiliated Hospital of the University of South China，Development and Investigation Center of Prevention and Control Technology of Pediatric Asthma of Chenzhou City，Hu’nan Province 423000

Objective：To explore the pathogenesis of pediatric asthma，we analyzed the pediatric asthma bronchoalveolar lavage fluid including cell composition and cytokine level.Methods：Using ELISA，we measured IgE，IL－12，IL－4and IL－13and counting the cell number in bronchoalveolar lavage fluid of 75patients including asthma（n＝29），bronchopneumonia（n＝26），control（n＝20）.Results：In the group of asthma，eosnophils was 3.3%（1.0%～9.0%），epithelial cell 2.9%（0.5%～9.8%），IgE was（98.76±15.65）ngL，IL－4was（17.89±3.65）ngL，IL－13was（6.75±0.87）ngL.That was significantly higher than the group of bronchopneumonia and control（P＜0.01）.IL－12（2.12±0.76）ngL in the group of asthma was significantly lower than the group of bronchopneumonia and control（P＜0.01）.However，neutrophil was obviously increased in the bronchopneumonia.Conclusion：Pediatric asthma bronchoalveolar lavage fluid was characterized with the increase of eosnophils，epithelial cell and IgE.The concentration of IL－4and IL－13increased，but the concentration of IL－12decreased in the bronchoalveolar lavage fluid of pediatric asthma.It is suggested that the unbalance of Th1Th2is of importance in the pathogenesis of pediatric asthma.

Children，Asthma，Bronchoalveolar lavage fluid，Granulocyte，IgE，Interleukin

R725.6

A

1001－7585（2015）12－1554－03

2015－02－06

（編輯羽飛）

郴州市科技局資助重點項目（2012cj084.CZ2013065）。通訊作者：范楚平