青果葛根配伍液對(duì)醉酒大鼠肝臟損傷的保護(hù)作用研究＊

何鴻雁李 華楊 艷汪春梅陳 潤(rùn)

1 瀘州醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生系，四川省瀘州市 646000； 2 瀘州醫(yī)學(xué)院藥理教研室

青果葛根配伍液對(duì)醉酒大鼠肝臟損傷的保護(hù)作用研究＊

何鴻雁1李 華2楊 艷1汪春梅1陳 潤(rùn)1

1 瀘州醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生系，四川省瀘州市 646000； 2 瀘州醫(yī)學(xué)院藥理教研室

目的：利用大鼠醉酒模型觀察青果葛根配伍使用對(duì)醉酒大鼠肝勻漿中谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ－GT）活力的影響，探討青果葛根配伍使用對(duì)醉酒大鼠肝損傷的保護(hù)作用。方法：將60只SD大鼠隨機(jī)分為5組：空白對(duì)照組、模型組、青果葛根配伍使用低劑量組、青果葛根配伍使用中劑量組、青果葛根配伍使用高劑量組。采用白酒灌胃造模，連續(xù)灌胃4d后稱(chēng)量大鼠重量，處死，取出肝臟后將大鼠肝臟制成肝勻漿并檢測(cè)AST、ALT和γ－GT活力水平。結(jié)果：模型組大鼠肝臟三項(xiàng)生化指標(biāo)與其他各組相比差異都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；空白組及青果葛根配伍使用高、中、低劑量組肝勻漿中AST、ALT和γ－GT水平低于模型組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：醉酒大鼠肝臟組織AST、ALT和γ－GT均有不同程度升高，青果葛根配伍使用對(duì)上述指標(biāo)有調(diào)控作用，對(duì)肝臟具有保護(hù)作用，擁有良好的解酒功效，且其解酒功效隨著劑量的增加而增加。

青果葛根配伍使用 解酒 AST ALT γ－GT

在我國(guó)，酒是一種非常悠久的傳統(tǒng)飲品，是我國(guó)最大的消費(fèi)品之一，受到廣大消費(fèi)者的青睞，適量飲酒可怡情而有益健康，但過(guò)度飲酒會(huì)給人們帶來(lái)諸多傷害如引起頭痛、眩暈、嘔吐、神經(jīng)模糊等癥狀，嚴(yán)重的會(huì)對(duì)肝、胃、脾等內(nèi)臟器官造成傷害，引起機(jī)體生理紊亂。本地特色農(nóng)產(chǎn)品青果具有清熱解毒、利咽生津等功效[1～3]，葛根具有清涼下火、開(kāi)胃消食、利尿解酒的特效[4～6]，兩者自古以來(lái)都是解酒良藥[7，8]，但尚無(wú)將其配伍使用制成解酒產(chǎn)品的先例，故利用大鼠建立醉酒模型研究青果葛根配伍使用的解酒作用，以明確青果葛根配伍使用的解酒效果，為新解酒產(chǎn)品的研制提供相應(yīng)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 造模物：北京紅星二鍋頭白酒（56度），北京紅星股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)20110201。

1.1.2 受試物：青果葛根配伍液（原使用由瀘州市科技局青果葛根配伍液課題組提供），分為3種劑量：高劑量為原使用（液體）；中劑量為原使用1∶1兌蒸餾水使用；低劑量為1∶2兌蒸餾水使用。

1.1.3 對(duì)照物：蒸餾水（由本實(shí)驗(yàn)室自制）

1.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：同一批健康SD大鼠60只（購(gòu)自瀘州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物科），雌雄各半，體重（200± 60）g。隨機(jī)分成5組：空白對(duì)照組、模型組、青果葛根配伍液低劑量組、青果葛根配伍液中劑量組和青果葛根配伍液高劑量組，每組12只?？瞻捉M不給酒和使用，模型組只給酒不給使用，低劑量組給酒并給予低劑量青果葛根配伍液，中劑量組給酒并給予中劑量青果葛根配伍液，高劑量組給酒并給予高劑量青果葛根配伍液。

1.1.5 試劑與儀器：（1）試劑：由南京建成生物工程研究所提供的AST（C010－1）試劑盒、ALT（C009－1）試劑盒、γ－GT（C107）試劑盒；冰醋酸（分析純，乙酸濃度≥99.5%市售）；生理鹽水（由本實(shí)驗(yàn)室自制）。（2）儀器：S648型電熱恒溫水浴箱（上海醫(yī)療器械廠）；ZX6006臺(tái)式高速離心機(jī)（法國(guó)Jouan公司使用）；722型可見(jiàn)光分光光度計(jì)（上海奧析科學(xué)儀器有限公司）；WKYIII－1000型微量移液器（上海佳安分析儀器廠）；HM－200分析天平（上海天平儀器廠）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 造模及給藥劑量：采用灌胃法進(jìn)行造模，先灌青果葛根配伍液，半小時(shí)之后給56度北京紅星二鍋頭白酒，均按7.5gkg給予；2次d，上下午各1次，每次間隔4h以上，連續(xù)4d?？瞻捉M給予等量蒸餾水，模型組以等量蒸餾水代替使用。每次灌胃前2h禁食、禁飲，實(shí)驗(yàn)期間其余時(shí)間各組大鼠均予飲用水及全價(jià)營(yíng)養(yǎng)顆粒飼料喂養(yǎng)。

1.2.2 標(biāo)本采集、制備及指標(biāo)檢測(cè)：飼養(yǎng)過(guò)程中觀察大鼠一般情況，于第4日末次灌胃2h后，先稱(chēng)體重，處死，暴露腹腔，摘取肝臟。每只大鼠稱(chēng)取200mg左右的肝組織塊按重量體積比加用生理鹽水制備成10%肝勻漿，1 000～3 000轉(zhuǎn)min，離心10min，然后取組織勻漿上清再用生理鹽水按1∶9稀釋成1%的肝勻漿，待測(cè)。按照ALT、AST、γ－GT試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)各組大鼠肝勻漿谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ－GT）水平，并記錄。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，結(jié)果用單因素方差分析，組間比較用SNK法檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肝勻漿AST結(jié)果比較 由表1可見(jiàn)，模型組肝勻漿中AST均值較空白對(duì)照組明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)單因素方差分析：各組大鼠肝勻漿AST含量差異總體上有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），進(jìn)而進(jìn)行各組兩兩比較，其中模型組與低劑量組肝勻漿AST含量差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其余各組之間兩兩比較均有差異（P＜0.05）。AST均值從低、中、高劑量組逐漸下降。

2.2 各組大鼠肝勻漿ALT結(jié)果比較 由表2可見(jiàn)，模型組肝勻漿中ALT均值較空白組明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)單因素方差分析：各組大鼠肝勻漿ALT含量差異總體上有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），進(jìn)而進(jìn)行各組兩兩比較，其中中劑量組與高劑量組肝勻漿ALT含量差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其余各組之間兩兩比較均有差異（P＜0.05）。ALT均值從低、中、高劑量組逐漸下降。

表1 各組大鼠肝勻漿AST結(jié)果比較（±s）

表1 各組大鼠肝勻漿AST結(jié)果比較（±s）

組別n AST（Ugprot）空白對(duì)照組12155.127±42.733模型組12 311.906±59.333低劑量組12 283.689±53.069中劑量組12 233.609±47.348高劑量組12199.165±66.987

表2 各組大鼠肝勻漿ALT結(jié)果比較（±s）

表2 各組大鼠肝勻漿ALT結(jié)果比較（±s）

組別n ALT（Ugprot）空白對(duì)照組12161.082±22.208模型組12 357.664±44.916低劑量組12 267.579±38.620中劑量組12 228.560±44.151高劑量組12202.896±38.433

2.3 各組大鼠肝勻漿γ－GT結(jié)果比較 由表3可見(jiàn)，模型組肝勻漿γ－GT均值較空白對(duì)照組明顯升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)單因素方差分析：各組大鼠肝勻漿γ－GT含量差異總體上有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），進(jìn)而進(jìn)行各組兩兩比較，其中低劑量組與中劑量組肝勻漿γ－GT含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），中劑量組與高劑量組肝勻漿γ－GT含量其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其余各組之間兩兩比較均有差異（P＜0.05）。γ－GT均值從低、中、高劑量組逐漸下降。

表3 各組大鼠肝勻漿γ－GT結(jié)果比較（±s）

表3 各組大鼠肝勻漿γ－GT結(jié)果比較（±s）

組別nγ－GT（Ugprot）空白對(duì)照組124.841±0.844模型組12 8.771±1.423低劑量組12 7.716±1.104中劑量組12 7.300±1.038高劑量組126.459±1.341

3 討論

近年來(lái)，隨著我國(guó)國(guó)民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，飲酒者和飲酒量明顯增加。醉酒是指一次飲酒過(guò)量而導(dǎo)致的消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、心腦血管系統(tǒng)等的損傷過(guò)程[8]。過(guò)量飲酒不僅可以誘發(fā)或?qū)е略S多疾病，如心腦血管疾病、消化系統(tǒng)疾病、精神障礙、乙醇依賴(lài)等，同時(shí)還可能會(huì)降低自我行為的控制能力，引起行為異常，還可能引發(fā)許多意外事故甚至犯罪[9]。目前，在我國(guó)，酒精性肝損傷已經(jīng)成為僅次于病毒性肝炎的主要肝損傷原因，酒精性肝?。ˋlcoholic liver disease，ALD）的發(fā)病率也呈逐年增加趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅人民健康[10]。

酒對(duì)人體的影響可用諸多指標(biāo)反映，本實(shí)驗(yàn)采用大鼠肝勻漿中AST、ALT和γ－GT為檢驗(yàn)指標(biāo)，反映青果葛根配伍使用的解酒效果。AST主要存在于肝細(xì)胞漿和線粒體中，ALT主要存在于肝細(xì)胞原漿的可溶部分。醉酒時(shí)機(jī)體內(nèi)可產(chǎn)生大量的活性氧，活性氧可將細(xì)胞卵磷脂中多價(jià)不飽和脂肪酸過(guò)氧化而生成自由基，致細(xì)胞膜脆弱化，透過(guò)性亢進(jìn)；活性氧又有對(duì)脂質(zhì)高親和性的特點(diǎn)，既損害細(xì)胞膜，又損害線粒體膜，細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶被大量釋放，故轉(zhuǎn)氨酶是肝細(xì)胞損害的敏感標(biāo)志，也是乙醇所致肝損傷最敏感的指標(biāo)，是肝細(xì)胞損傷的“金標(biāo)準(zhǔn)”[11，12]。葛根可以顯著降低酒精性肝損傷模型中大鼠血清的AST、ALT水平[11，13，14]。本實(shí)驗(yàn)中模型組肝勻漿中AST、ALT含量均較其他組高，低劑量組肝勻漿中AST、ALT含量高于中、高劑量組，表明青果葛根配伍使用能減輕酒精對(duì)肝細(xì)胞的損傷，減少AST、ALT的釋放，從而降低AST、ALT水平，對(duì)肝細(xì)胞有保護(hù)作用，且其效果隨著青果葛根配伍使用劑量的增加而加強(qiáng)。γ－GT在肝內(nèi)主要存在于肝細(xì)胞漿和肝內(nèi)膽管上皮[15]，是γ－谷氨酰循環(huán)的關(guān)鍵酶，分解谷胱甘肽（γ－谷氨酰半胱氨酰甘氨酸，GSH）及其S－結(jié)合物，并促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)GSH的重新合成，酒精中毒者γ－GT明顯升高[16]。實(shí)驗(yàn)中模型組肝勻漿中γ－GT含量較其他組高，且低劑量組γ－GT高于高劑量組，表明青果葛根配伍使用能有效降低醉酒模型肝臟內(nèi)γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的水平，對(duì)肝臟具有保護(hù)功效，且其效果隨著青果葛根配伍使用劑量的增加而增強(qiáng)。

通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)研究可見(jiàn)在地方特色農(nóng)產(chǎn)品青果提取液中加入葛根，兩者配伍使用可通過(guò)對(duì)AST、ALT和γ－GT的顯著調(diào)節(jié)作用減輕酒精對(duì)肝細(xì)胞損害，改善肝功能，對(duì)肝臟有保護(hù)作用；且其解酒功效在一定范圍內(nèi)隨著劑量的增加而增加，故擁有良好的解酒功效。

[1] 陳瑞生，陳相銀，張?jiān)?青果與西青果的鑒別〔J〕.傳統(tǒng)中醫(yī)藥，2011，（8）：51.

[2] 楊桂林，胡祥宇，袁葉飛，等.青果總黃酮體外抗氧化作用研究〔J〕.瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，35（4）：397－398.

[3] 廖婉，游宇，張臻，等.中藥青果在現(xiàn)代美容領(lǐng)域的研究〔J〕.進(jìn)展中藥與臨床，2012，3（2）：60－62.

[4] 古今，馬堯遙.解酒藥物的研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)藥物應(yīng)用與檢測(cè)，2010，7（6）：371－373.

[5] 王恒禹，劉玥，沈孝坤，等.葛根的解酒作用及應(yīng)用〔J〕.中國(guó)醫(yī)療前沿，2012，7（20）：7－9.

[6] 宋卉，李銀花，鄭暉.葛根素的藥理作用與臨床研究進(jìn)展〔J〕.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)，2011，27（19）：2396.

[7] 高明月.葛根和橄欖解酒研究概述〔J〕.中國(guó)藥師，2009，12（12）：1824.

[8] 劉建書(shū)，藺小平，朱笛霓.葛花使用解酒作用的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)〔J〕.陜西中醫(yī)，2007，28（10）：1426.

[9] 廖林川.乙醇和相關(guān)物質(zhì)分析方法以及乙醇代謝動(dòng)力學(xué)影響因素的研究－乙醇相關(guān)問(wèn)題的綜合探討〔D〕.成都：四川大學(xué)，2005.

[10] 莊輝.酒精性肝病的流行病學(xué)〔J〕.中華肝臟病雜志，2003，11（11）：689.

[11] 鄭婭瓊，張介眉，時(shí)昭紅，等.鮮葛花汁預(yù)防大鼠醉酒及護(hù)肝作用的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.湖北中醫(yī)雜志，2009，31（4）：10－12.

[12] 俞利平，陳小因，方志明.丹參注射液對(duì)大鼠酒精性肝損傷血清ALT、AST的影響〔J〕.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2004，10（7）：64.

[13] 劉森琴，葛林.葛根散對(duì)酒精性脂肪肝大鼠肝功能損傷的影響〔J〕.河北中醫(yī)，2013，35（11）：1703－1704.

[14] 徐燕琴，時(shí)昭紅，馮云霞，等.單位鮮葛花汁對(duì)急性酒精中毒大鼠乙醇代謝的影響〔J〕.中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2012，22（1）：38－40.

[15] 徐根云，虞朝輝，樂(lè)敏，等.急性酒精攝入致酶譜變化的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2003，26（7）：419.

[16] 孟佩佩，劉冬英，蔣敏麗，等.γ－谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的性質(zhì)及其應(yīng)用進(jìn)展〔J〕.食品與發(fā)酵工業(yè)，2009，35（9）：105.

The Protective Effects of Fructus Canarii and Puerariae Combination Treatment on Alcohol－induced Rat Liver Injury

HE Hongyan＃，LI Hua，YANG Yan，et al.＃Department of Public Health of Luzhou Medical College，Luzhou City，Sichuan Province 646000

Objective：To investigate the protective effects of fructus canarii and puerariae combination treatment on alcohol－induced rat liver injury through testing the activities of AST，ALT andγ－GT in liver homogenates of drunk rat.Methods：Sixty Sprague－Dawley（SD）rat were divided into five groups，including blank group，model group，low－dose fructus canarii and puerariae treatment group，middle－dose fructus canarii and puerariae treatment group and high－dose fructus canarii and puerariae treatment group.After 4days of liquor gavage，rats were sacrificed.The levels of AST，ALT andγ－GT of rat liver were measured.Results：Compared with other groups，the difference of the levels of AST，ALT andγ－GT of model group is significant（P＜0.05）.The levels of AST，ALT andγ－GT of blank group and fructus canarii and puerariae treatment group are lower than that of model group，and the difference is significant（P＜0.05）.Conclusion：The levels of AST，ALT andγ－GT are increased in the liver of drunk rat.Fructus canarii and puerariae combination treatment can reduce the levels of AST，ALT andγ－GT in drunk rat，and significantly inhibit liquor－induced rat liver injury.Moreover，fructus canarii and puerariae combination treatment exerts the anti－alcohol effects in an dose－dependent manner.

Fructus canarii and puerariae combination treatment，Anti－alcohol effects，AST，ALT，γ－GT

R－332

A

1001－7585（2015）12－1541－03

2015－01－27

（編輯落落）

四川省衛(wèi)生廳項(xiàng)目（100217）；瀘州市科技局項(xiàng)目[瀘市科函（2008）23]。通訊作者：陳潤(rùn)