麥角甾醇在小鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)及生物利用度

孫嘉辰， 陳玉皎， 吳玥婷， 張曉倩， 杜思邈， 張耀洲，3*

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193；2.天津國際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院，天津300457；3.天津大學(xué)，天津300072）

［制 劑］

麥角甾醇在小鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)及生物利用度

孫嘉辰1，2， 陳玉皎1，2， 吳玥婷1，2， 張曉倩2，3， 杜思邈2， 張耀洲1，2，3*

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津300193；2.天津國際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院，天津300457；3.天津大學(xué)，天津300072）

目的研究蛹蟲草的麥角甾醇在小鼠體內(nèi)的藥動學(xué)和口服生物利用度。方法100只健康的昆明種小鼠，隨機(jī)分為2組，定時采血，用反相高效液相色譜法測定小鼠分別經(jīng)灌胃和尾靜脈注射給予10 mg/kg麥角甾醇后的血藥濃度。Kinetica軟件進(jìn)行房室模型擬合并計算藥代動力學(xué)參數(shù)和絕對生物利用度。結(jié)果麥角甾醇在0.06～60μg/mL質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=0.999 7）；低（0.23μg/mL）、中 （3.75μg/mL）、高（60μg/ML）3個質(zhì)量濃度的絕對回收率分別為 （102.0±10.2）%、 （94.4±13.2）%和 （101.3±8.7）%；日內(nèi)RSD分別為10.8%、9.6%和8.0%，日間RSD分別為12.0%、8.8%和12.8%。小鼠口服及靜注麥角甾醇后的藥-時曲線均符合二室模型，兩種給藥方式的 T1/2α分別為 （1.546 3±0.004 9）h和 （0.349 3±0.003 5）h，T1/2β分別為 （2.99±0.16）h和（3.31±0.02）h，K10分別為 （0.349 0±0.009 1）/h和（0.388 7±0.001 2）/h，K12分別為 （0.153 8±0.005 4）/h和（0.736 5±0.005 3）/h，K21分別為 （0.038 4±0.003 1）/h和（1.068 5±0.015 1）/h，Vc分別為 （81.61±0.75）mL和（71.27±0.08）mL。采用非房室模型法計算，灌胃組小鼠的T1/2為 （6.34±0.07）h，AUC0-t為 （300.68±0.96）μg·h/mL，尾靜脈注射組小鼠的T1/2為 （5.58±0.06）h，AUC0-t為 （396.64±0.11）μg·h/mL。按劑量折算，麥角甾醇經(jīng)灌胃給藥的絕對生物利用度為74.72%。結(jié)論麥角甾醇經(jīng)口服途徑給藥的生物利用度與靜脈給藥存在明顯差異可能與其水溶性較差有關(guān)。

蛹蟲草；麥角甾醇；小鼠；灌胃；尾靜脈給藥；藥動學(xué)；絕對生物利用度

蛹蟲草又被稱為北冬蟲夏草，是世界廣布種，是目前研究最多的蟲草之一。由于較易栽培，樣品容易得到，它實際上是目前分離出化合物最多的蟲草［1］。大量報道表明蛹蟲草菌絲體、生藥、醇提物、水提物等提取物具有廣泛藥理活性，包括免疫調(diào)節(jié)、抗疲勞、抗驚厥、鎮(zhèn)靜、抗癌、抗菌、抗肝纖維化、抗糖尿病、抗炎和雄性激素樣作用等［2］。麥角甾醇（ergosterol）是蛹蟲草中主要的甾醇類化合物［3］，活性指導(dǎo)下分離蛹蟲草得到的麥角甾醇，具有抗腫瘤活性［4-5］。生物活性的化合物能否在生物體內(nèi)發(fā)揮效應(yīng)，很大程度上取決于血漿中藥物濃度和生物利用度，但其口服生物利用度研究尚未見文獻(xiàn)報道。本研究采用HPLC分析方法測定小鼠灌胃和靜脈給予麥角甾醇后不同時間點的血藥濃度，進(jìn)而研究麥角甾醇在小鼠體內(nèi)的藥動學(xué)特征及口服生物利用度，為麥角甾醇不同劑型的制備以及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物與試劑 麥角甾醇對照品（SIGMAALDRICH公司，批號45480-50G-F，純度≥95%）。蛹蟲草購于正源堂 （天津）生物科技有限公司。色譜純無水乙醇購于天津康科德試劑有限公司，超純水為Mili-Q級，實驗室自制（κ=18.2 MΩ· cm）。

1.2 儀器 日本HITACHI高效液相色譜儀（L-2400檢測器，L-2200自動進(jìn)樣器，L-2130泵，溫控箱，HITACHI色譜工作站）；Kromasil C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm，100?）。電子分析天平（AB204-A，梅特勒-托利多上海儀器公司）；注射器 （上海治宇醫(yī)療器械有限公司）；秒表；臺式冷凍離心機(jī)（德國HITTICH公司）；微量移液槍（美國RAININ公司）；漩渦混合器 （寧波新芝生物科技股份有限公司）；針頭式濾膜 （纖維素型0.22μm）；Mili-Q超純水系統(tǒng)（Milipore，USA）；氮吹儀 （杭州藍(lán)焰科技有限公司）。

1.3 動物 100只健康的昆明種小鼠，體質(zhì)量18～22 g，購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，動物許可證號SCXK（京）2012-0001，合格證號11400700020779。在溫度20～22℃，相對濕度45%～65%，光照黑暗12 h/12 h條件下飼養(yǎng)自由飲食飲水，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實驗。實驗前禁食不禁水12 h，隨機(jī)分成2組，每組50只雌雄各半，分別為10 mg/kg灌胃給藥組和10 mg/kg靜脈注射給藥組。

2 方法

2.1 蛹蟲草中麥角甾醇的制備 取蛹蟲草5 000 g，-20℃超微粉碎，加5倍量丙酮提取3次，每次4 h，合并濾液，回收丙酮，得濃浸膏，將濃浸膏揮去丙酮后，用50%正己烷-50%乙醇溶解，流動相為正己烷和乙醇，通過動態(tài)軸向壓縮工業(yè)制備色譜分離純化，得到麥角甾醇供試品。用8%的乙醇-水溶液溶解對照品和供試品，分別吸取麥角甾醇對照品溶液和供試品溶液10μL，通過高效液相色譜 （HPLC）法檢測，按相同的色譜條件測定，以面積歸一化法計算供試品溶液麥角甾醇純度98.2%，保留時間17.2 min。麥角甾醇樣品經(jīng)EIMS分析，m/z396.4［M］+，計算得相對分子質(zhì)量396，確定為麥角甾醇［6］，見圖1、2。

2.2 藥液的配制 灌胃給藥溶液：用0.2%吐溫80-水溶液溶解，混合均勻，配制成0.25mg/mL溶液 （臨用前配制）。靜脈給藥溶液：用5%無水乙醇-生理鹽水溶解，混合均勻，配制成1 mg/mL溶液 （臨用前配制）。

圖1 麥角甾醇的HPLC檢測圖Fig.1 HPLC chromategraMs of ergosterol

圖2 麥角甾醇供試品的EI-MS圖Fig.2 EI-MS chromatograms of ergosterol samples

2.3 給藥與樣品采集 將100只小鼠隨機(jī)分為2組，每組50只，雌雄各半，在給藥前每組均禁食不禁水12 h，分別為口服灌胃組 （10 mg/kg）和尾靜脈給藥組（10 mg/kg），每組又隨機(jī)分為15 min、30 min、45 min、1 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、24 h取血組。采血0.2 ML注入肝素化抗凝管中，4℃、6 000 r/min離心10 min取血漿，-80℃冰凍保存，備用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精確稱取麥角甾醇25 mg于25 ML量瓶中，用無水乙醇溶解并定容至25 mL，得1 mg/mL的麥角甾醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液，于4℃保存，以此來配制系列質(zhì)量濃度的麥角甾醇標(biāo)準(zhǔn)工作液 （臨用前稀釋）。

2.5 血漿樣品處理 準(zhǔn)確吸取待測的肝素抗凝小鼠血漿樣品100μL，加入1 mL無水乙醇溶液，漩渦混勻，4℃、16 000 r/min離心10 min，取上清液，氮吹儀中吹干，干燥后的樣品加入100μL無水乙醇復(fù)溶樣品，漩渦混勻，4℃、16 000 r/min離心10 min，取上清液，備用。

2.6 色譜條件 Kromasil C18色譜柱（4.6 mm× 250 mm，5μm，100?）；柱溫35℃；流動相為乙醇-水（85∶15，V/V）；體積流量0.8 ML/min；檢測波長292 nm；進(jìn)樣量20μL（進(jìn)樣前使用0.22 μm纖維素型微孔濾膜過濾）。

2.7 數(shù)據(jù)分析 將實驗所得的血藥濃度數(shù)據(jù)采用Kinetica 4.4軟件進(jìn)行模型擬合，以曲線擬合優(yōu)度、AIC值等為標(biāo)準(zhǔn)確定最佳房室模型，并計算麥角甾醇的藥代動力學(xué)參數(shù)。灌胃實驗所得的血藥濃度數(shù)據(jù)采用非房室模型法計算藥代動力學(xué)參數(shù)，將靜注實驗所得的血藥濃度數(shù)據(jù)采用同法處理，對兩種給藥途徑的參數(shù)進(jìn)行比較。麥角甾醇灌胃后藥物的絕對生物利用度按照公式 （1）計算，AUCig為灌胃時的AUC；AUCiv為靜注時的AUC；Dig為灌胃藥物劑量；Div為靜注藥物劑量。

3 結(jié)果

3.1 方法專屬性 空白血漿、空白血漿加20 mg/L麥角甾醇對照品、口服麥角甾醇后0.5 h的血漿樣品和口服麥角甾醇后2 h的血漿樣品各5份，按 “血漿樣品處理方法”處理，分別進(jìn)樣、測定，經(jīng)HPLC分析測定得到的色譜圖見圖3。由圖3可見在本實驗條件下，血漿中麥角甾醇的出峰位置與空白血漿加入對照品的出峰位置基本相同，保留時間為12.8 min，并且在空白血漿樣品色譜圖中未出現(xiàn)內(nèi)源性雜質(zhì)的干擾峰，表明血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)不會干擾麥角甾醇的測定，方法的專屬性良好。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍 精密吸取小鼠血漿置于1 mL離心管中，每份90μL，分別加入麥角甾醇標(biāo)準(zhǔn)溶液10μL，使血漿中藥物質(zhì)量濃度分別為0.06、0.23、0.94、3.75、15、60μg/mL，搖勻，再按“血漿樣品處理方法”處理，測定麥角甾醇峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo) （Y），以所對應(yīng)各點質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo) （X）進(jìn)行直線回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得麥角甾醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=5 674.1X-1 137.3，r=0.999 7。結(jié)果表明，血漿中麥角甾醇在0.06～60 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖3 小鼠血漿中麥角甾醇的HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatograMs of ergosterol in Mice plasma

3.3 絕對回收率試驗 取麥角甾醇標(biāo)準(zhǔn)貯備液及小鼠空白血漿，分別配制低、中、高3個質(zhì)量濃度（0.23、3.75、60.00μg/mL）的麥角甾醇血漿標(biāo)準(zhǔn)品溶液，每個質(zhì)量濃度5份，再按 “血漿樣品處理方法”處理后檢測，記錄麥角甾醇的峰面積，為血漿標(biāo)準(zhǔn)的峰面積。另取錐形試管3支，一個一組；每組加入與配制血漿對照品溶液相同的麥角甾醇對照品溶液，直接吹干后用流動相100μL復(fù)溶，20 μL進(jìn)樣檢測；記錄不同質(zhì)量濃度麥角甾醇的峰面積，為該質(zhì)量濃度的純對照品的峰面積。計算血漿標(biāo)準(zhǔn)的峰面積與純標(biāo)的峰面積的比值，即為絕對回收率，絕對回收率分別為 （102.0±10.2）%、（94.4 ±13.2）%、（101.3±8.7）%，RSD均分別＜15%，符合生物樣品定量分析方法指導(dǎo)原則的要求。

3.4 精密度試驗 取麥角甾醇對照品貯備液及小鼠空白血漿，分別配制低、中、高3個質(zhì)量濃度（0.23、3.75、60μg/mL）的麥角甾醇血漿對照品溶液，每個質(zhì)量濃度5份，再按 “血漿樣品處理方法”處理后取上清液供HPLC分析，于同一日內(nèi)測定血漿中麥角甾醇，依據(jù)當(dāng)日標(biāo)準(zhǔn)曲線計算檢測量，計算日內(nèi)精密度；連續(xù)3 d同樣操作，計算日間精密度。結(jié)果顯示低、中、高3個質(zhì)量濃度的麥角甾醇的日內(nèi)精密度分別為10.8%、9.6%、8.0%（n=5），日間精密度分別為12.0%、8.8%、12.8%（n=5）。上述方法測得的日內(nèi)和日間RSD均小于15%，符合生物分析方法指導(dǎo)原則的要求。3.5 樣品穩(wěn)定性 分別配制低、中、高3個質(zhì)量濃度（0.23、3.75、60.00μg/mL）的麥角甾醇血漿對照品溶液，每個濃度5份。取低、中、高3個質(zhì)量濃度的血漿樣品按 “血漿樣品處理方法”處理，取上清液于0、4、8、24 h注入HPLC儀分析，測定血漿中麥角甾醇量，考察室溫放置24 h樣品的穩(wěn)定性，結(jié)果顯示低、中、高3個質(zhì)量濃度的RSD分別為4.2%、4.7%和13.8%；取低、中、高3種質(zhì)量濃度的血漿樣品反復(fù)凍融3個循環(huán)測定血漿樣品從-80℃至室溫凍融的穩(wěn)定性，低、中、高3個質(zhì)量濃度麥角甾醇的 RSD分別為9.6%、12.3%和8.5%；取低、中、高3個質(zhì)量濃度的血漿樣品，考察樣品在-80℃下保存1個月內(nèi)的穩(wěn)定性，低、中、高3個質(zhì)量濃度麥角甾醇的RSD分別為9.9%、7.9%和7.4%；結(jié)果其穩(wěn)定性RSD均＜15%，說明血漿樣品在以上3種情況下基本穩(wěn)定。

3.6 麥角甾醇的血藥濃度對數(shù)-時間曲線 灌胃和靜注給藥后小鼠血漿中麥角甾醇的血藥濃度對數(shù)-時間曲線見圖4。

圖4 小鼠血漿中麥角甾醇的血藥濃度對數(shù)-時間曲線Fig.4 Log time curves of ergosterol in Mice plasma（b lood drug concentration）

3.7 藥動學(xué)參數(shù)和絕對生物利用度 將測得的血藥濃度數(shù)據(jù)，利用Kinetica 4.4軟件對其進(jìn)行房室模型擬合，結(jié)果表明麥角甾醇灌胃及靜注給藥后的藥代動力學(xué)過程均符合雙室模型。灌胃給予麥角甾醇后，K a為0.534 4 h-1，T1/2α為1.5463 h，T1/2β為2.99 h，說明麥角甾醇具有在胃腸道中較快吸收和分布，在體內(nèi)消除較快的特點；與靜注組相比，灌胃組的中央室分布容積 （V c）顯著較大 （P＜0.01），提示麥角甾醇在在中央室停留的時間較長，以高濃度分布在肝臟等中央室，因此在整體清除上較快。將麥角甾醇的藥代動力學(xué)研究結(jié)果相比較，靜脈注射的K10較灌胃給藥大，說明靜注麥角甾醇從中央室消除的較快，而口服較慢；灌胃給藥的K12小于靜脈注射，說明靜脈注射后，麥角甾醇從中央室往周邊室的轉(zhuǎn)運速度較快，因而麥角甾醇靜注后中心室藥物濃度較低，消除也較少 （見表1）。

表1 小鼠灌胃及靜脈注射給予10 mg/kg麥角甾醇的藥動學(xué)參數(shù)（x±s，n=5）Tab.1 Pharmacokinetic parameters in Mice adMinistered w ith ergosterol intragastrically or intravenously at 10 mg/kg body weight，respectively（x±s，n=5）

灌胃給藥后的AUC和Cmax值較低，表明麥角甾醇口服吸收程度較差；口服麥角甾醇達(dá)峰時間2 h，平均滯留時間 （MRT）7.03 h，半衰期 T1/26.34 h，說明藥物在體內(nèi)以較短的時間達(dá)到峰值，并維持相當(dāng)長時間，且藥物濃度波動不大，保持相對平穩(wěn) （見表2）。

同樣采用非房室模型法計算小鼠靜脈注射麥角甾醇給后的藥動學(xué)參數(shù)，并與灌胃實驗結(jié)果相比較，應(yīng)用公式 （1）計算麥角甾醇的口服生物利用度為74.72%，說明麥角甾醇在小鼠體內(nèi)口服吸收尚可。

4 討論

麥角甾醇在臨床上多為口服給藥蛹蟲草的主要活性成分，具有生物活性的化合物能否在生物體內(nèi)有效地發(fā)揮作用很大程度上取決于它的生物利用度及其在靶器官的濃度。因此研究麥角甾醇灌胃給藥后在小鼠體內(nèi)藥代動力學(xué)過程及絕對生物利用度對蛹蟲草的藥物開發(fā)具有重要意義，并為其制劑研制以及臨床應(yīng)用提供依據(jù)［7］。國內(nèi)對麥角甾醇生物利用度的相關(guān)研究尚未見報道，本實驗采用高效液相色譜法測定血漿中麥角甾醇，以反相C18硅膠作為色譜柱，以極性溶劑作為流動相，取得滿意效果。該方法操作簡便，標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)性較好，靈敏度高，重復(fù)性好，能夠符合藥物動力學(xué)研究的需要。本實驗中，觀察到小鼠血壓僅有輕微的下降，而且所有小鼠在術(shù)后都存活良好。實驗取血量0.2 ML占小鼠總血量的15%左右，符合藥理學(xué)中動物實驗的取血總量不得超過15%～20%的原則，因此可以認(rèn)為取血過程的小鼠處于近似生理狀態(tài)。

表2 小鼠麥角甾醇10 mg/kg灌胃和10 mg/kg靜注的藥動學(xué)參數(shù) （非房室模型法，x±s，n=5）Tab.2 Pharmacokinetic parameters after intragastric or intravenous adMinistration of ergosterol at 10 mg/kg body weight，respectively（non-coMpartmentmodel，x±s，n=5）

4.1 液相色譜檢測波長的選擇 關(guān)于血漿藥物的檢測，一般采用HPLC-UV的方法［8］。麥角甾醇在整個紫外區(qū)均有良好的吸收，二極管陣列檢測器（DAD）三維立體圖顯示，麥角甾醇的最大吸收波長為282 nm，此波長處其他雜質(zhì)也有一定的吸收，若采用282 nm為檢測波長測定，雜質(zhì)干擾將導(dǎo)致測定結(jié)果偏高［9］。除282 nm外，麥角甾醇在272 nm和292 nm附近還有兩個峰，而雜質(zhì)在292 nm處的紫外吸收曲線基本呈直線，其ΔA值為零。本研究使用292 nm波長檢測麥角甾醇，內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾麥角甾醇的測定，獲得了良好的色譜峰。

4.2 藥代動力學(xué) 小鼠分別經(jīng)灌胃（10 mg/kg）、尾靜脈注射（10 mg/kg）給予麥角甾醇后，比較2種給藥途徑的藥代動力學(xué)參數(shù)可以看到，除了AUC和CL無顯著差異，其他參數(shù)有顯著差異 （表3及表4），這都說明：藥動學(xué)參數(shù)差異較大，說明它們的體內(nèi)代謝過程不同；在同樣劑量條件下，2種給藥途徑的麥角甾醇在體內(nèi)均可以較長時間保持較高濃度，并可在一定程度上長時間體內(nèi)循環(huán)。同時從藥時曲線分布相可知，靜注后血藥濃度幾小時內(nèi)就迅速下降了幾倍，這可能是麥角甾醇經(jīng)靜脈注射后迅速向各臟器分布。以上這些數(shù)據(jù)可以為麥角甾醇的藥效學(xué)研究提供給藥劑量的參考。

4.3 絕對生物利用度 口服麥角甾醇的絕對生物利用度為74.72%，說明口服麥角甾醇在小鼠體內(nèi)吸收尚可。許多中藥有效成分都存在著口服生物利用度不高的缺陷［10-13］。影響藥物生物利用度主要歸因于以下幾個因素：藥物在胃腸道中被破壞或代謝；藥物分子不具備合適的理化性質(zhì)，導(dǎo)致藥物吸收差；藥物是胃腸道代謝酶和外排泵的底物；藥物的溶解性差等［14］。此次試驗中，初步推測可能與其水溶性較差有關(guān)，從而影響其在胃部的吸收。導(dǎo)致麥角甾醇生物利用度不高的原因及增強(qiáng)其口服吸收的方法有待進(jìn)一步研究，后期可考慮從劑型方面提高其生物利用度。

［1］胡豐林，李增智.蟲草及相關(guān)真菌的次生代謝產(chǎn)物及其活性［J］.菌物學(xué)報，2007，26（4）：607-632.

［2］馮孝章.冬蟲夏草及人工蟲草化學(xué)成分［J］.中草藥現(xiàn)代化研究，1995（1）：99-103.

［3］Li Y H，Li X L.Determination of ergosterol in Cordyceps sinensis and Cordyceps Black-bone Chicken Capsules by HPLC［J］. Acta PharMSin，1991，26（10）：768-771.

［4］Matsuda H，Akaki J，Nakamura S，et al.Apoptosis-inducing effects of sterols froMthe dried powder of cultured myceliuMof Cordyceps sinensis［J］.CheMPharMBull，2009，57（4）：411-414.

［5］Wu JY，Zhang Q X，Leung PH.Inhibitory effects ofethyl acetate extract of Cordyceps sinensis myceliuMon various cancer cells in culture and B16 melanoma in C57BL/6 mice［J］.Phytomedicine，2007，14（1）：43-49.

［6］McEwen C，Gutteridge S.Analysis of the inhibition of the ergosterol pathway in fungi using the atmospheric solids analysis probe（ASAP）method［J］.J AMSoc Mass Spectr，2007，18（7）：1274-1278.

［7］鐘 杰，王海南，馬越鳴.中藥藥物代謝動力學(xué)在中藥新藥研究中的作用［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2010（3）：241-246.

［8］王 萍，陳 堅.阿維菌素緩釋注射液在家兔體內(nèi)藥物動力學(xué)的研究［J］.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2005，28（6）：530-532.

［9］高 虹，谷文英.三波長光度法測定姬松茸中麥角甾醇含量［J］.分析化學(xué)，2007，35（4）：586-588.

［10］陳淑娟，龐雪冰.蝙蝠葛堿大鼠體內(nèi)藥物代謝動力學(xué)研究［J］.中國藥理學(xué)通報，2001，17（2）：225-229.

［11］張海防，郭健新，黃羅生，等.羥基紅花黃色素A在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報，2006，37（5）：456-460.

［12］顧 軼，王廣基，孫建國，等.LC-MS法測定Beagle犬血漿中人參皂苷20（R）-Rh2及其藥代動力學(xué)研究［J］.中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué)，2006，11（3）：256-260.

［13］Yang K Y，Lin L C，Tseng T Y，et al.Oral bioavailability of curcumin in ratand the herbal analysis froMCurcuma longa by LC-MS/MS［J］.J.Chromatogr.B，2007，853（1）：183-189.

［14］李 靜，王廣基.藥物胃腸道吸收屏障及新型促吸收方法［J］.藥學(xué)學(xué)報，2005，40（7）：600-605.

The pharmacokinetics and bioavailability of ergosterol in Mice

SUN Jia-chen1，2， CHEN Yu-jiao1，2， WU Yue-ting1，2， ZHANG Xiao-qian2，3， DU Si-miao2，ZHANG Yao-zhou1，2，3*
（1.Tianjin University of Traditional ChineseMedicine，Tianjin 300193，China；2.Tianjin International Joint Academy of Biomedicine，Tianjin 300457，China；3.Tianjin University，Tianjin 300072，China）

AIMTo study the pharmacokinetics and bioavailability of ergosterol（froMCordycepsmilitaris）in mice.METHODSOne hundred healthy KMmice were randoMly assigned into two groups for gastric lavage or tail vein injection of ergosterol，（10 mg/kg）respectively.The plasma ergosterol levels were determined by reversed phase high-performance liquid chromatography，and then the pharmacokinetic parameters and absolute bioavailability of ergosterolwere obtained through kinetica software analysis.RESULTSThe linear relationship was good within the range of 0.06-60μg/mL（r=0.999 7）.The absolute recoveries were（102.0±10.2）%，（94.4±13.2）%，and（101.3±8.7）%at ergosterol concentration levels（0.23μg/mL，3.75μg/mL，60 μg/mL），respectively.The intraday RSDswere10.8%，9.6%，and 8.0%，respectively，while the interday RSDs being 12.0%，8.8%，and 12.8%，respectively.The plasma ergosterol level-time curves，after gastric lavage and introvenous use of ergosterol，fitted with a two compartmentmodel，their T1/2αwere（1.546 3±0.004 9）hand（0.349 3±0.003 5）h，T1/2βwere（2.99±0.16）h and（3.31±0.02）h，K10were（0.349 0± 0.009 1）/h and（0.388 7±0.001 2）/h，K12were（0.153 8±0.005 4）/h and（0.736 5±0.005 3）/h，K21were（0.038 4±0.003 1）/h and（1.068 5±0.015 1）/h，Vcwere（81.61±0.75）mL and（71.27±0.08）ML，respectively.The parameters of AUC0-tand T1/2were obtained by calculation with non-compartment model，T1/2（6.34±0.07）h and AUC0-t（300.68±0.96）μg·h/mL for gastric lavage，T1/2（5.58±0.06）h and AUC0-t（396.64±0.11）μg·h/mL for intravenous use，respectively.The absolute bioavailability for oral administration was determined to be 74.72%.CONCLUSIONThe difference in ergosterol bioavailability，dosing between gastric lavage and tail vein injection may be in line with its poor water-solubility in mouse gut.

Cordycepsmilitaris；ergosterol；mouse；gastric lavage；tail vein injection；pharmacokinetics；absolute bioavailability

R969.1

：A

：1001-1528（2015）05-0965-06

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.05.009

2014-09-29

國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃 （863計劃）（2011AA100603）

孫嘉辰（1989—），男，碩士生，從事中藥學(xué)研究。Tel：15022357925，E-mail：sjcsunjiachen@foxmail.com

*通信作者：張耀洲（1964—），男，教授，從事中藥學(xué)、生物化學(xué)研究。Tel：（022）83714098，E-mail：yaozhou.zhang@foxmail.com