紫葉李果實(shí)的化學(xué)成分研究

李曉男，陳燕燕，周江韜，王躍飛，姜苗苗*

1 天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193;2中藥新藥研發(fā)中心天津國(guó)際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院，天津 300457

紫葉李(Pranus cerasifera Ehrh f.)又名紅葉李，櫻桃李，薔薇科(Rosaceae)李屬植物。紫葉李是落葉小喬木，葉常年紫色，著名觀葉樹(shù)種。原種產(chǎn)于亞洲西南部，具有耐濕，耐寒和一定的耐堿能力，因我國(guó)天津市濱海新區(qū)冬季寒冷干燥，夏季酷熱潮濕，土壤鹽分高，易旱，所以紫葉李在濱海新區(qū)得以廣泛種植［1］。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)紫葉李同屬植物的化學(xué)成分進(jìn)行了報(bào)道，從它們的葉子、果實(shí)、種子等部位分離得到黃酮類、花色素類、香豆素類、新木脂素類等成分［2-5］。現(xiàn)在，隨著對(duì)紫葉李的不斷研究，已有文獻(xiàn)報(bào)道紫葉李的葉子具有抗氧化活性［6］，但是對(duì)紫葉李果實(shí)的化學(xué)成分研究甚少。

本文對(duì)紫葉李的新鮮果實(shí)進(jìn)行化學(xué)成分研究，分離得到5 種化合物，分別為3-O-乙?；瓋翰杷?1)、2(R)-羥基丁二酸-1-甲酯(2)、3，3'，4，4'-四羥基聯(lián)苯(3)、β-胡蘿卜苷(4)和槲皮素(5)?；衔?～4 為首次從該植物中分離得到，其中，1 為新天然產(chǎn)物。

1 儀器與材料

Bruker PLUS 400 MHz 核磁共振波譜儀;Bruker AVANCE Ⅲ600 MHz 核磁共振波譜儀;Waters TQ-S質(zhì)譜儀，Waters Xevo G2-S Q-TOF MS 質(zhì)譜儀;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52A(上海亞榮生化儀器廠);薄層層析硅膠GF-254、柱層析硅膠200～300 目(青島海洋化工廠)，ODS-A-HG 5～50 μm(日本YMC 公司)，Sephadex LH-20 凝膠(瑞士GE Healthcare 公司)，DPPH(2，2-二苯基-苦肼基，Sigma 公司)，維生素C(天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠)，96 微孔板(美國(guó)Corning 公司);所用試劑均為分析純(天津康科德試劑公司)。

紫葉李果實(shí)，2013 年9 月采集于天津市濱海新區(qū)，由天津中醫(yī)藥大學(xué)吳紅華博士鑒定為薔薇科李屬植物紫葉李(Pranus cerasifera Ehrh f.)的新鮮果實(shí)。標(biāo)本(B41320090001)存放于天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥新藥研發(fā)中心化學(xué)與分析部。

2 提取與分離

將紫葉李果實(shí)在60 ℃恒溫干燥箱中干燥，稱重得2.0 kg，粉碎。用10 倍量的95%乙醇冷浸兩次，每次7 d，將所得提取液合并過(guò)濾，減壓濃縮至無(wú)醇味，得乙醇提取物800 g。將乙醇提取物用蒸餾水混懸均勻后依次用等體積乙酸乙酯，萃取3 次，合并萃取液，得到乙酸乙酯部位85 g。將乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇(v/v，二氯甲烷，100∶2，100∶3，100∶6，100∶10，100∶25，100∶50，甲醇)梯度洗脫得到8 個(gè)餾份(Fr.1～8)。Fr.2 經(jīng)硅膠柱，得到亞餾分Fr.2.1 和Fr.2.2。Fr.2.1 經(jīng)Sephadex LH-20(二氯甲烷∶甲醇=1∶1，v/v)純化，得到化合物2(5 mg)、3(10 mg)。Fr.2.2 經(jīng)硅膠柱色譜以二氯甲烷-甲醇(100∶3，v/v)洗脫得到Fr.2.2.1，經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇∶水=1∶1，v/v)反復(fù)純化，得到化合物5(3 mg)。Fr.3 經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇(100∶2，v/v)洗脫，得到Fr.3.1，再經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-甲醇(100∶5，v/v)洗脫，再經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇∶水=1∶1，v/v)純化，得到化合物1(25 mg)。Fr.4 經(jīng)硅膠柱色譜和ODS 純化，得到化合物4(20 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 黃色針狀晶體(甲醇);ESI-MS m/z:374［2M-H2O］+，195［M-H］-，ESI-MS2給出離子峰［M-H-60］-，中性失去60，提示結(jié)構(gòu)中存在一分子乙酰 氧 基;HR-ESI-MS m/z:195.0294［M-H］-(C9H7O5，計(jì)算值為195.0293)，確定其分子式為C9H8O5，不飽和度為5;UV(MeOH)λmax(log ε):292(0.29)nm;IR(KBr)νmax3210，2654，1697，1603，1528，1297，1098，943，766，640 cm–1;在1H NMR(CD3OD，400 MHz)中，由δ 7.43(overlapped)，δ 7.41(1H，d，J=2.1Hz，H-2)和δ 6.80(1H，d，J=8.5Hz，H-5)提示化合物1 中存在一個(gè)1，3，4-三取代苯環(huán)，δ 2.56(3H，s，-CH3)提示化合物1 存在-CH3。在13C NMR(CD3OD，100 MHz)中顯示9 個(gè)碳原子信號(hào)，其中δ 176.0，δ 169.1 為羰基碳原子信號(hào)，δ 150.5、δ 144.0、δ 122.7、δ 121.8、δ 116.3、δ 114.7 為芳香區(qū)碳原子信號(hào)，δ 29.8 為-CH3中碳原子信號(hào)。從HMBC 圖譜中可以看到-CH3(δ 2.56)與C-1'(δ 176.0)相關(guān)，提示結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)乙酰基;另外δ 7.43(overlapped)、δ 7.41(H-2)與δ 169.1(C-7)相關(guān)，說(shuō)明苯環(huán)上H-1 位置被羧基取代;通過(guò)對(duì)比化合物1 和原兒茶酸標(biāo)準(zhǔn)品的1H NMR和13C NMR 數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)C-3 化學(xué)位移存在差異，化合物1 的C-3 的比原兒茶酸的C-3 向高場(chǎng)移動(dòng)δ 2.1，提示乙酰基將原兒茶酸中的C-3 位的酚羥基乙?；?，得到的乙?；a(chǎn)物為化合物1，其結(jié)構(gòu)與文獻(xiàn)［7］一致，即化合物1 為3-O-乙?；瓋翰杷?3-O-acetyl-protocatechuic acid)。1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7.43(overlapped)，7.41(1H，d，J=2.1Hz，H-2)，6.80(1H，d，J=8.5Hz，H-5)，2.56(3H，s，-CH3);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:176.0(C-1')，169.1(C-7)，150.5(C-4)，144.0(C-3)，122.7(C-6)，121.8(C-1)，116.3(C-2)，114.7(C-5)，29.8(C-2')。其化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

圖1 化合物1 的化學(xué)結(jié)構(gòu)和HMBC 相關(guān)Fig.1 Chemical structure and key HMBC correlations of compound 1

化合物2 無(wú)色結(jié)晶(甲醇);分子式C5H8O5;ESI-MS m/z:149［M+H］+，147［M-H］-;在1H NMR(CD3OD，600 MHz)中由δ 4.50(1H，dd，J=7.3，4.7 Hz)上偶合常數(shù)判斷為叔碳上的質(zhì)子信號(hào)。δ 3.74(3H，s)為-OCH3上的質(zhì)子信號(hào)，δ 2.67(1H，dd，J=16.2，7.3 Hz)，δ 2.78(1H，dd，J=16.2，4.6 Hz)則為-CH2信號(hào)。13C NMR(CD3OD，100 MHz)顯示6 個(gè)碳原子信號(hào)，其中δ 175.1、δ 174.1為兩個(gè)羰基碳原子信號(hào);δ 68.5、δ 39.8 由化學(xué)位移判斷為相連的叔碳和仲碳原子信號(hào);δ 52.6 則為-OCH3上碳原子信號(hào)。1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ 4.50(1H，dd，J=7.3，4.7 Hz)，3.74(3H，s，-OCH3)，2.78(1H，dd，J=16.2，4.6 Hz)，2.67(1H，dd，J=16.2，7.3 Hz);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:175.1(C-1)，174.1(C-4)，68.5(C-2)，52.6(-OCH3)，39.8(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道基本一致，故化合物2 鑒定為2(R)-羥基丁二酸-1-甲酯(2(R)-hydroxybutanedioic acid-1-methyl ester)。

化合物3 白色粉末(甲醇);分子式C7H6O4;ESI-MS m/z:435［2M-H］-，217［M-H］-;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:6.97(1H，d，J=2.0Hz，H-2)，6.86(1H，dd，J=2.0，8.4Hz，H-6)，6.79(1H，d，J=8.4，H-5);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:146.3(C-4，4')，145.2(C-3，3')，134.8(C-1，1')，118.9(C-6，6')，116.5(C-5，5')，114.6(C-2，2')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道基本一致，故化合物3 鑒定為3，3'，4，4'-四羥基聯(lián)苯(3，3'，4，4'-Tetrahydroxybiphenyl)。

化合物4 白色粉末(甲醇);分子式C35H60O6;10%硫酸乙醇溶液顯紫紅色;其1H NMR 和13C NMR譜與胡蘿卜苷標(biāo)準(zhǔn)譜一致，故化合物4 鑒定為β-胡蘿卜苷(β-daucosterol)。

化合物5 黃色針狀晶體(甲醇);分子式為C15H10O7;ESI-MS m/z:303［M+H］+，301［M-H］-;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:7.72(1H，d，J=2.0 Hz，H-2')，7.61(1H，dd，J=2.0，8.4 Hz，H-6')，6.86(1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，6.37(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.16(1H，d，J=2.0 Hz，H-6);13C NMR(CD3OD，100 MHz)δ:177.4(C-4)，165.7(C-7)，162.6(C-5)，158.2(C-9)，148.8(C-2)，148.0(C-4)，146.3(C-3')，137.3(C-3)，124.2(C-1')，121.7(C-6')，116.3(C-5')，116.0(C-2')，104.5(C-10)，99.3(C-6)，99.4(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道基本一致，故化合物5 鑒定為槲皮素(Quercetin)。

4 抗氧化活性測(cè)定

待測(cè)的5 個(gè)化合物對(duì)DPPH 自由基的清除作用，按文獻(xiàn)［11］方法測(cè)定。待測(cè)化合物清除DPPH 自由基的IC50值如下表1 所示。結(jié)果顯示化合物3、5清除DPPH 自由基的能力與Vc 相當(dāng)，與它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有較多的酚羥基數(shù)目有關(guān)。

表1 待測(cè)化合物清除DPPH 自由基的IC50值Table 1 IC50of DPPH scavenging of the isolated compounds

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