西南遠志中一個新的三萜皂苷

耿圓圓，黃艷杰，王軍民，周 俊，華 燕*

1 西南林業(yè)大學，昆明 650224;2中國科學院昆明植物研究所，昆明 650201

西南遠志(Polygala crotalarioides Buch.Ham.)為遠志科遠志屬植物，別名地花生、翻轉紅、豬大腸(四川)，娘母良(云南佤族語)［1］。該植物是云南佤族民間流傳的一種珍奇中藥，長期服用能使眉須秀長，有顏容光澤和痣斑消退等功效［2］。作為一種民間中藥，西南遠志主要用于活血止痛、安神補心、順氣化痰［3-5］;此外，藥理學實驗表明，西南遠志還具有抗缺氧、抗疲勞、抗低溫、提高機體對不良環(huán)境的適應能力等功效［6］。在前期工作中已報道了6 個新的口山酮［7-9］和兩個新的三萜皂苷類化合物［10］的分離和結構鑒定，為從該植物中尋找更多的活性單體成分，本實驗對采自云南云縣的西南遠志進行了進一步的化學成分研究，分離得到3 個齊墩果酸型皂苷類化合物，分別為3-O-β-D-葡萄糖基presenegenin 28-O-α-L-阿拉伯糖基-(1→3)-β-D-木糖基-(1→4)-［β-D-芹糖基-(1→3)］-α-L-鼠李糖基-(1→2)-［β-D-葡萄糖基-(1→3)］-［4-O-(E/Z)-3″，4″，5″-三甲氧基肉桂?；?β-D-巖藻糖基酯(1)、3-O-β-D-葡萄糖基presenegenin 28-O-β-D-木糖基-(1 →4)-α-L-鼠李糖基-(1→2)-［α-L-鼠李糖基-(1→3)］-［4-O-(E/Z)-對甲氧基肉桂?；?β-D-巖藻糖基酯(2)和3-O-β-D-葡萄糖基presenegenin 28-O-α-L-阿拉伯糖基-(1→4)-β-D-木糖基-(1→4)-［β-D-芹糖基-(1→3)］-α-L-鼠李糖基-(1→2)-［4-O-(E/Z)-對甲氧基肉桂酰基］-［α-L-鼠李糖基-(1→3)］-β-D-巖藻糖基酯(3)，命名為(E/Z)-crotalarioside G(1)，(E/Z)-Onjisaponin Y(2)和(E/Z)-polygalasaponin XXXII(3)?；衔锝Y構式見圖1。

圖1 化合物1～3 的化學結構及主要HMBC 相關Fig.1 Chemical structures and key HMBC correlations of compounds 1-3

1 儀器與材料

HPD100 大孔樹脂;薄層層析硅膠;柱層析硅膠(80～100 目、200～300 目和300～400 目);Sephadex LH-20;反相填充材料Rp-18(40～60 μm);HPLC 分析柱(Agilent，ZORBAX SB-C18，4.6 ×150 mm，5 μm);HPLC 半制備柱(Agilent，ZORBAX SBC18，9.4 ×250 mm，5 μm);Bruker DRX-500 核磁共振儀，TMS 作內標，化學位移δ 用ppm 表示，偶合常數J 用Hz 表示;Bio-Rad FTS-135 型紅外光譜測定儀(KBr 壓片);UV2401 PC 紫外可見分光光度計;Finnigan MAT90 質譜儀;Bruker HTC/Esquire 液相-離子阱色譜質譜聯(lián)用儀;Waters AutoSpec Premier P776 質譜儀;顯色劑:5%H2SO4乙醇溶液。

西南遠志1 kg，采自云南省云縣，由昆明植物所陳書坤研究員鑒定，標本現(xiàn)保存在昆明植物所植物化學與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室。

2 提取與分離

西南遠志根1 kg，粉碎后用75%乙醇提取4次，第一次4 h，之后三次各2 h，合并提取液，減壓濃縮回收乙醇。水溶液通過HPD100 樹脂，用水、75%乙醇、95%乙醇依次洗脫。75%洗脫部分減壓濃縮得浸膏96 g，以200 g 硅膠(80～100 目)拌樣，1.5 kg 硅膠(200～300 目)干柱柱層析，用氯仿-甲醇-水(7∶4∶1)洗脫，得到10 個組分(1～10)。

組分1～4(75.8 g)，經硅膠(氯仿-甲醇-水7∶3∶0.5 和7∶5∶1)和Sephadex LH-20(甲醇)柱層析，得到總皂苷(15 g)。經RP-18 反相柱(甲醇-水5∶5→7∶3)柱層析，把總皂苷分為4 個組分(A～D)。每個組分所含皂苷結構類似，結合的糖基又較多，常規(guī)反相柱分離難度很大，故采用制備、半制備HPLC 分離。

組分B 用HPLC 半制備，乙腈-0.1%醋酸水溶液(39∶61)為流動相，得到化合物2(36 mg)和3(35 mg)。組分C 用HPLC 半制備，乙腈-0.1%醋酸水溶液(34∶66)為流動相，得到化合物1(61 mg)。

3 結構鑒定

化合物1 白色粉末;高分辨質譜HR-TOF-MS給出分子離子峰1749.7378［M-H］-(計算值1749.7383)，分子式C81H122O41，質譜ESI-MS m/z:1749.2［M-H］-。IR (KBr):3430、2931、1721、1635、1260、1076 cm-1，表明有羥基、羰基和烯基官能團。在13C NMR 譜上可看到苷元部分有30 個碳信號，其中有二個羰基碳信號［δC181.4 (s)，176.8 (s)］，二個雙鍵碳信號［δC139.3 (s)，127.9 (d)］，五個甲基信號［δC33.1 (s)，24.1 (s)，18.8 (s)，17.5 (s)，14.3(s)］，一個氧亞甲基信號［δC64.5 (t)］。另外，在1H 和13C NMR 譜上還可觀察到七個糖基端基碳及相應氫質子的信號［δC111.3 (d)，105.6 (d)，105.2 (d)，105.2 (d)，104.6 (d)，101.8 (d)，94.9(d);δH6.01 (1H，d，J=4.0 Hz)，5.01 (1H，d，J=7.5 Hz)/5.02＊，5.04 (1H，d，J=7.8 Hz)，5.15(1H，d，J=6.5 Hz)，6.30/6.41 (1H，br s)，6.14/6.16 (1H，d，J=8.0 Hz)］和一對對3″，4″，5″-三甲氧基肉桂?；樂串悩嬻w信號(見表1 和2)，提示可能為三萜皂苷。其苷元部分的1H 和13C NMR 數據與已知苷元presenegenin［11］比較發(fā)現(xiàn)，兩者基本相同，說明化合物1 的苷元為presenegenin。繼續(xù)分析發(fā)現(xiàn)，由于這對3″，4″，5″-三甲氧基肉桂?；樂串悩嬋〈拇嬖?，使糖基部分出雙峰或細微裂分現(xiàn)象，苷元部分由于距離較遠，影響不大，但也有一些氫譜信號出現(xiàn)裂分。

糖基部分的化學位移由HMQC、HMBC、HMQCTOCSY 譜得到歸屬。其碳、氫信號及端基氫的偶合常數與所報道文獻［11］中化合物polygalasaponin XXXI 糖基部分幾乎一致，故推斷化合物1 的糖基種類及構型與polygalasaponin XXXI 中的相同，為β-D-葡萄糖，β-D-木糖，α-L-鼠李糖，β-D-巖藻糖，β-D-芹糖和α-L-阿拉伯糖。不同的是巖藻糖基3 位上增加了一個葡萄糖基，可由巖藻糖基3 位的碳化學位移向低場移至δC82.5/82.7，且增加的葡萄糖基的H-1″″＇與其HMBC 相關所證實。其它糖基連接次序與polygalasaponin XXXI 中的相同，可通過HMBC 譜來進一步確定。在HMBC 譜上可看出以下遠程相關:葡萄糖基的H-1＇與苷元C-3 相關，巖藻糖基的H-1″與苷元C-28 相關，鼠李糖基的H-1″與巖藻糖基的C-2″相關，木糖基的H-1″″與鼠李糖基的C-4＇″相關，另外一個葡萄糖基的H-1″″＇與巖藻糖基的C-3″″相關，芹糖基的H-1″″＇＇與鼠李糖基的C-3″＇相關，阿拉伯糖基的H-1″″＇＇與木糖基的C-3″″，并且?guī)r藻糖基H-4″與(E/Z)-3″，4″，5″-三甲氧基肉桂?；驶枷嚓P。在HPLC 上分析時，化合物1 表現(xiàn)為兩個峰，以乙腈-0.1%醋酸水溶液(34∶66)為流動相，用RP-18柱HPLC 制備分離，結果發(fā)現(xiàn)兩個化合物之間互變，無法使其分離，最后只能以立體異構混合體形式得到。綜上所述，其結構可鑒定為3-O-β-D-葡萄糖基presenegenin 28-O-α-L-阿拉伯糖基-(1→3)-β-D-木糖基-(1→4)-［β-D-芹糖基-(1→3)］-α-L-鼠李糖基-(1→2)-［β-D-葡萄糖基-(1 →3)］-［4-O-(E/Z)-3″，4″，5″-三甲氧基肉桂?；?β-D-巖藻糖基酯，命名為(E/Z)-crotalarioside G。

化合物2 白色粉末，質譜FAB-MS m/z:1410［M］-。結合13C 核磁共振數據確定該化合物分子式為C69H102O30。IR (KBr):3455、2931、1719、1615、1258、1069 cm-1。仔細比較化合物2 和1 的1H 和13C NMR 數據發(fā)現(xiàn)，兩者結構非常相似，只是苷元C-28上糖基的種類和數量不一樣。化合物2 中無芹糖和阿拉伯糖，原連接在巖藻糖基上的葡萄糖基和(E/Z)-3″，4″，5″-三甲氧基肉桂?；?，取而代之的是另一鼠李糖基和一個(E/Z)-對甲氧基肉桂?；?，由于對甲氧基肉桂?；樂串悩嬻w的存在，與化合物1 情況相同，用RP-18 柱HPLC 制備分離，發(fā)現(xiàn)兩個化合物之間也存在互變，無法使其分離。所以，化合物2 最終也只能以立體異構混合物形式得到，結構鑒定為3-O-β-D-葡萄糖基presenegenin 28-O-β-D-木糖基-(1 →4)-α-L-鼠李糖基-(1 →2)-［α-L-鼠李糖基-(1→3)］-［4-O-(E/Z)-對甲氧基肉桂?；?β-D-巖藻糖基酯。通過與文獻［12］比較，發(fā)現(xiàn)化合物2 與Onjisaponin Y 的結構相同，但文獻沒有對該化合物的立體構型進行闡述。最終命名為(E/Z)-Onjisaponin Y。

化合物3 白色粉末，質譜FAB-MS m/z:1674［M］-，結合13C 核磁共振數據確定該化合物分子式為C79H118O38。通過與文獻［11］比較，發(fā)現(xiàn)化合物3與polygalasaponin XXXII 的13C 和1H NMR 數據基本一致，但文獻沒有對該化合物的立體構型進行闡述。與化合物1 和2 情況相同，化合物3 出現(xiàn)圖譜雙峰或細微裂分現(xiàn)象，歸結其原因是由于(E/Z)-對甲氧基肉桂酰基的存在。用RP-18 柱HPLC 制備分離，發(fā)現(xiàn)兩個化合物之間也存在互變，無法使其分離。所以，化合物3 最終也是以立體異構混合物形式得到，結構鑒定為3-O-β-D-葡萄糖基presenegenin 28-O-α-L-阿拉伯糖基-(1→4)-β-D-木糖基-(1→4)-［β-D-芹糖基-(1 →3)］-α-L-鼠李糖 基-(1 →2)-［4-O-(E/Z)-對甲氧基肉桂?；?［α-L-鼠李糖基-(1 →3)］-β-D-巖藻糖基酯，命名為(E/Z)-polygalasaponin XXXII。

表1 化合物1～3 的碳譜數據(125 MHz，C5D5N，δ)Table 1 13C NMR spectral data of 1-3 (125 MHz，C5D5N，δ)

表2 化合物1～3 的氫譜數據(500 MHz，C5D5N，δ)Table 2 1H NMR spectral data of 1-3 (500 MHz，C5D5N，δ)

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