選擇性COX-2抑制劑塞來昔布抑制B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株MDR-1及Bcl-2的mRNA表達(dá) 并增強(qiáng)表柔比星的抗腫瘤作用

化范例，王玲燕，趙鑫，李瑩，鄔揚(yáng)炯，高松

1.復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院血液內(nèi)科，上海 201508；

2.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究中心，上海 200032

選擇性COX-2抑制劑塞來昔布抑制B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株MDR-1及Bcl-2的mRNA表達(dá) 并增強(qiáng)表柔比星的抗腫瘤作用

化范例1，王玲燕2，趙鑫1，李瑩1，鄔揚(yáng)炯1，高松1

1.復(fù)旦大學(xué)附屬金山醫(yī)院血液內(nèi)科，上海 201508；

2.復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院實(shí)驗(yàn)研究中心，上海 200032

背景與目的：部分非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma, NHL)具有高表達(dá)環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)的特征，而后者與P-糖蛋白及Bcl-2表達(dá)相關(guān)，可能導(dǎo)致NHL對(duì)化療耐藥。本研究旨在探討B(tài)細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株中COX-2的表達(dá)以及選擇性COX-2抑制劑塞來昔布增強(qiáng)淋巴瘤細(xì)胞對(duì)表柔比星抗腫瘤效應(yīng)的敏感性及其可能機(jī)制。方法：用熒光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白［質(zhì)］印跡法(Western blot)分別檢測Raji、Jeko-1和Namalwa等淋巴瘤細(xì)胞株以及正常人外周血B細(xì)胞的COX-2表達(dá)；以梯度濃度的塞來昔布作用于淋巴瘤細(xì)胞株，CCK-8方法檢測細(xì)胞增殖的抑制程度，qRT-PCR檢測各細(xì)胞株MDR-1 mRNA及Bcl-2 mRNA表達(dá)的變化；表柔比星單獨(dú)或聯(lián)合不同濃度的塞來昔布處理Raji細(xì)胞株72 h后，CCK-8方法分析塞來昔布對(duì)表柔比星的增敏作用。結(jié)果：各淋巴瘤細(xì)胞株及正常對(duì)照外周血B細(xì)胞均不表達(dá)COX-2。塞來昔布單藥即可對(duì)各淋巴瘤細(xì)胞株產(chǎn)生程度不同的抗增殖效應(yīng)；隨著塞來昔布作用濃度的增加，除Jeko-1細(xì)胞不表達(dá)MDR-1外，其余細(xì)胞株MDR-1 mRNA及Bcl-2 mRNA表達(dá)水平逐漸下降；塞來昔布明顯增強(qiáng)表柔比星對(duì)Raji細(xì)胞的抗腫瘤活性，兩者之間具有協(xié)同作用。結(jié)論：選擇性COX-2抑制劑塞來昔布下調(diào)B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株的MDR-1 mRNA及Bcl-2 mRNA水平，并且增強(qiáng)表柔比星對(duì)淋巴瘤細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)。

環(huán)氧合酶-2；塞來昔布；淋巴瘤；MDR-1基因；Bcl-2基因

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma, NHL)是淋巴造血系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，且近年來在我國的發(fā)病率及死亡率均有逐漸升高的趨勢［1］。雖然新的治療方法如分子靶向治療、造血干細(xì)胞移植等可以改善部分患者的預(yù)后，但化療仍然在臨床治療策略中占據(jù)著無可替代的基石地位。影響化療成敗的重要因素之一是腫瘤細(xì)胞是否出現(xiàn)耐藥，在此過程中，MDR-1基因產(chǎn)物P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)因可以將藥物主動(dòng)泵出細(xì)胞外而被廣泛關(guān)注，下調(diào)P-gp的表達(dá)可以有效減少腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的耐藥［2-3］。我們在前期研究中發(fā)現(xiàn)，部分NHL病理組織高表達(dá)環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)［4］，而COX-2的表達(dá)又與P-gp和Bcl-2蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)一定的聯(lián)系［5］。那么，選擇性的COX-2抑制劑塞來昔布在抑制COX-2活性的同時(shí)，是否能夠下調(diào)P-gp和Bcl-2的表達(dá)并進(jìn)一步影響淋巴瘤細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)呢？本研究選取了部分B細(xì)胞來源的淋巴瘤細(xì)胞株，觀察塞來昔布處理后MDR-1及Bcl-2基因表達(dá)的變化及其對(duì)表柔比星抗增殖效應(yīng)的影響，探討塞來昔布應(yīng)用于抗NHL治療的潛在價(jià)值。

1 材料和方法

1.1 主要試劑及細(xì)胞株

塞來昔布及表柔比星均為美國輝瑞公司產(chǎn)品；RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液及新生牛血清購自杭州四季青生物工程材料有限公司；CCK-8試劑盒由無錫碧云天生物技術(shù)有限公司供應(yīng)； CD19免疫磁珠為德國美天旎公司產(chǎn)品；兔抗人COX-2單克隆抗體及兔抗人GAPDH單克隆抗體、鼠抗兔IgG二抗均購自美國CST公司；cDNA逆轉(zhuǎn)錄及熒光定量PCR分別采用寶生物工程(大連)有限公司的PrimeScript逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒。人Burkitt淋巴瘤Raji、Namalwa細(xì)胞株(均為EBV陽性)及套細(xì)胞淋巴瘤Jeko-1細(xì)胞株(EBV陰性)均購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所。

1.2 免疫磁珠分離外周血B細(xì)胞

抽取3名健康志愿者外周EDTA-K2抗凝血20 mL，F(xiàn)icoll密度梯度離心法獲取單形核細(xì)胞約2×107個(gè)，加入40 μL CD19免疫磁珠4 ℃溫育15 min，洗滌2次后，過柱分選出CD19+B細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證所得細(xì)胞純度達(dá)99%以上。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及CCK-8檢測細(xì)胞增殖活力

將各細(xì)胞株置于含10%小牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)液中，在37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%的飽和濕度條件下培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞密度調(diào)整為5×104個(gè)/mL，接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔100 μL。細(xì)胞株均按處理藥物不同分為塞來昔布組(終濃度依次為0、10、20、40、60、80和100 μmol/mL)、表柔比星組(終濃度依次為0.05、0.1、0.25、0.5和1.0 μg/mL)和聯(lián)合藥物組(塞來昔布0～100 μmol/mL和表柔比星0.49 μg/mL)，培養(yǎng)72 h后加入10 μL CCK-8試劑，繼續(xù)培養(yǎng)2 h，450 nm處讀取吸光度值(D)，按如下公式計(jì)算細(xì)胞活力：細(xì)胞活力(%)=(D實(shí)驗(yàn)組-D空白對(duì)照)/(D對(duì)照組-D空白對(duì)照)×100%。

塞來昔布與表柔比星的協(xié)同作用以金氏公式q=Ea+b/(Ea+Eb-Ea×Eb)進(jìn)行評(píng)價(jià)，其中Ea、Eb、Ea+b代表兩藥分別應(yīng)用及聯(lián)用時(shí)的抑制率。q值介于0.85～1.15之間為相加作用，＞1.15為兩藥協(xié)同作用，＜0.85則為拮抗作用。

1.4 蛋白［質(zhì)］印跡法(Western blot)檢測

收集對(duì)數(shù)生長期的各細(xì)胞株，分別用含蛋白酶抑制劑的RIPA細(xì)胞裂解液裂解，提取蛋白并定量。取40 μL總蛋白進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，轉(zhuǎn)膜后以4% BSA封閉2 h，在1∶1 000濃度的兔抗人COX-2單克隆抗體及兔抗人GAPDH單克隆抗體中溫育16 h，TBST洗滌6次以后，1∶3 000濃度的鼠抗兔IgG1二抗溫育2 h，顯色。以目的條帶與內(nèi)參條帶灰度值的比值計(jì)算目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測

以TRIzol-氯仿-異丙醇法提取經(jīng)過0、10、20、40、60、80和100 μmol/mL等不同濃度塞來昔布處理后的各細(xì)胞株的總RNA，檢測其含量及D260/D280比值。按照產(chǎn)品操作說明，以20 μL體系逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的反應(yīng)條件為95 ℃，30 s 預(yù)變性，95 ℃5 s，60 ℃ 30 s共40個(gè)循環(huán)。COX-2基因上游引物序列為：5’-TGCATTCTTTGCCCAGCACT -3’，下游：5’-AAAGGCGCAGTTTAC GCTGT-3’，產(chǎn)物長度146 bp；MDR-1上游：5’-GCTCGTGCCCTTGTTAGAC-3’，下游：5’-C A G G G C T T C T T G G A C A ACC-3’，產(chǎn)物長度96 bp；Bcl-2上游：5’-ATCGCCCTGTGGATGACTGAG-3’，下游：5’-CAGCCAGGAGAAATCAAACAGA GG-3’，產(chǎn)物長度129 bp；GAPDH上游：5’-GGTGGTCTCCTCTGACTTCAACA-3’，下 游 ： 5’-G T T G C T G T A G C C A A ATTCGTTGT-3’，產(chǎn)物長度127 bp。以GAPDH的Ct值作為參照，以2-ΔΔCt計(jì)算mRNA倍數(shù)變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS l6.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。不同細(xì)胞株對(duì)各濃度塞來昔布增殖抑制的反應(yīng)采用雙向方差分析，塞來昔布處理后MDR-1和Bcl-2 mRNA表達(dá)變化以ΔΔCt作為統(tǒng)計(jì)量進(jìn)行單因素方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 Raji、Namalwa及Jeko-1細(xì)胞株均不表達(dá)COX-2

無論是EBV陽性的Raji、Namalwa細(xì)胞株，還是EBV陰性的Jeko-1細(xì)胞株，也無論是在蛋白水平還是mRNA水平，均未見COX-2表達(dá)。多次改變實(shí)驗(yàn)條件(Western blot檢測增加總蛋白量至80 μL及提高抗體工作濃度，實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)更換引物及改變擴(kuò)增條件等)并未能改變陰性結(jié)果。同樣，來源于正常對(duì)照外周血的B細(xì)胞也不表達(dá)COX-2(圖1)。

圖1 Western blot未檢測到Raji、Namalwa及Jeko-1細(xì)胞株和正常對(duì)照外周血B細(xì)胞COX-2的表達(dá)Fig. 1 COX-2 was not detectable both in normal B cells (control) and in B-cell-originated lymphoma cell lines by Western blot

2.2 塞來昔布對(duì)實(shí)驗(yàn)淋巴瘤細(xì)胞株增殖的抑制作用

雖然實(shí)驗(yàn)所使用的3種細(xì)胞株均不表達(dá)COX-2，但COX-2的選擇性抑制劑塞來昔布卻對(duì)3種細(xì)胞株的增殖均有抑制作用(F=34.60，P＜0.001)。3種細(xì)胞株對(duì)塞來昔布的反應(yīng)不盡相同(F=58.14，P＜0.001)。由圖2可見，Raji細(xì)胞株在接受較低濃度塞來昔布(10 μmol/L)處理時(shí)即出現(xiàn)增殖抑制效應(yīng)，并且隨著濃度增加而逐漸顯著；而Namalwa和Jeko-1細(xì)胞株對(duì)塞來昔布的反應(yīng)弱于Raji細(xì)胞株，直至濃度達(dá)60 μmol/L，甚至更高時(shí)，才能觀察到塞來昔布對(duì)其增殖的抑制作用。

2.3 塞來昔布下調(diào)各淋巴瘤細(xì)胞株MDR-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表達(dá)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示，雖然強(qiáng)弱程度有差異，但3種細(xì)胞株均表達(dá)Bcl-2，塞來昔布明顯影響B(tài)cl-2的表達(dá)(Raji、Jeko-1和Namalwa細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)中F值分別為58.37、42.62和50.83，P值均＜0.001)，且呈現(xiàn)出濃度梯度效應(yīng)。與Bcl-2表達(dá)不同，Jeko-1細(xì)胞株并不表達(dá)MDR-1，而Raji細(xì)胞株中MDR-1的表達(dá)又強(qiáng)于Namalwa細(xì)胞株。塞來昔布同樣影響Raji和Namalwa細(xì)胞株的MDR-1表達(dá)(前者F=45.99，P＜0.001；后者F=18.05，P＜0.001)，并且亦呈濃度依賴性。圖3顯示各細(xì)胞株分別接受20、40和80 μmol/L塞來昔布處理后MDR-1 mRNA和Bcl-2 mRNA表達(dá)相對(duì)于處理前的倍數(shù)變化。

圖2 塞來昔布抑制淋巴瘤細(xì)胞株增殖Fig. 2 Celecoxib inhibited the proliferation of B-cell-originated lymphoma cell lines

2.4 塞來昔布增加Raji細(xì)胞株對(duì)表柔比星的敏感性

由于M D R-1和B c l-2基因產(chǎn)物均與腫瘤對(duì)化療藥物的耐藥相關(guān)，我們選擇了M D R-1和B c l-2基因表達(dá)均較強(qiáng)的R a j i細(xì)胞株進(jìn)行了塞來昔布對(duì)表柔比星的增敏實(shí)驗(yàn)。不同濃度(0.01～2 μmol/L)的表柔比星單獨(dú)作用于對(duì)數(shù)生長期的Raji細(xì)胞株72 h，計(jì)算其IC50為0.49 μmol/L，作為實(shí)驗(yàn)濃度。分別將終濃度為0、10、20、40、60、80和100 μmol/L的塞來昔布與終濃度0.49 μmol/L 的表柔比星共同作用于Raji細(xì)胞。結(jié)果顯示，塞來昔布在10、20、40和60 μmol/L時(shí)與表柔比星對(duì)Raji細(xì)胞株增殖的抑制呈現(xiàn)協(xié)同作用，金氏公式計(jì)算q值分別為1.28、1.19、1.18和1.23，而當(dāng)塞來昔布濃度進(jìn)一步增加時(shí)，q有所減小，但仍介于1.1～1.15之間。

圖3 MDR-1和Bcl-2 mRNA表達(dá)隨塞來昔布濃度增加而下降Fig. 3 The expression MDR-1 and Bcl-2 mRNA was decreased in B-cell-originated lymphoma cell lines by celecoxib in a concentration-dependent manner

3 討 論

COX-2是前列腺素合成過程中的限速酶，正常生理狀態(tài)下通常難以檢測，但在炎性條件下可由IL-1β、IL-6、TNFα等細(xì)胞因子誘導(dǎo)表達(dá)，其催化產(chǎn)物前列腺素E2在抑制細(xì)胞凋亡、增加血管生成、促使前致癌物質(zhì)向致癌物質(zhì)轉(zhuǎn)化等過程中起到重要作用。由于多種惡性腫瘤具有高表達(dá)COX-2的特征，COX-2也被認(rèn)為在慢性炎癥與腫瘤形成之間起著重要的橋梁作用［6］。本研究之前也在NHL中發(fā)現(xiàn)高表達(dá)COX-2的病理亞型通常與病原體感染密切相關(guān)［4］，例如MALT淋巴瘤和鼻型結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤分別與幽門螺桿菌和EB病毒感染有關(guān)。本研究選取了EBV陽性的Raji、Namalwa細(xì)胞株及EBV陰性的Jeko-1細(xì)胞株，以期進(jìn)一步證實(shí)病原感染對(duì)COX-2表達(dá)的影響，但結(jié)果顯示，與正常B細(xì)胞無差異，無論是mRNA水平還是蛋白水平，上述細(xì)胞株中均未能檢測出COX-2表達(dá)，提示至少在淋巴瘤中，單獨(dú)EBV感染因素并不能決定COX-2的表達(dá)。

塞來昔布是選擇性COX-2抑制劑，臨床上常用來作為解熱鎮(zhèn)痛藥物。由于COX-2與惡性腫瘤的聯(lián)系密切，塞來昔布也被推測可以預(yù)防或者延緩腫瘤發(fā)生，控制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移、浸潤等。雖然有研究證實(shí)，塞來昔布對(duì)多種惡性腫瘤的負(fù)向調(diào)控作用［7-10］，但同時(shí)發(fā)現(xiàn)，這種作用并不一定依賴于COX-2活性的抑制。正如本研究結(jié)果顯示，雖然Raji、Namalwa和Jeko-1細(xì)胞株中均不表達(dá)COX-2，但經(jīng)過塞來昔布處理后，各細(xì)胞株的生長仍然受到了不同程度的抑制。有學(xué)者證實(shí)，在淋巴瘤Raji細(xì)胞株中，塞來昔布可以通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑發(fā)揮抗增殖效應(yīng)［11］，而在同樣不表達(dá)COX-2的多種Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株和濾泡細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株中，塞來昔布則可以通過促進(jìn)TRAIL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)［12］。這些結(jié)果一方面說明塞來昔布對(duì)腫瘤細(xì)胞作用的復(fù)雜性，另一方面亦提示不能僅根據(jù)腫瘤是否表達(dá)COX-2判斷塞來昔布的適用性。

本研究結(jié)果提示，塞來昔布在單獨(dú)應(yīng)用尤其是低劑量時(shí)對(duì)淋巴瘤的抑制作用有限，反而下調(diào)MDR-1和Bcl-2基因表達(dá)的作用十分顯著，在其他類型的腫瘤細(xì)胞中亦有類似發(fā)現(xiàn)［8,13-14］。MDR-1和Bcl-2基因分別編碼P-gp和Bcl-2蛋白，其中Bcl-2是調(diào)控細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵蛋白之一，其高表達(dá)已被證實(shí)與淋巴瘤細(xì)胞對(duì)化療和放療敏感性降低有關(guān)［15］。P-gp則是公認(rèn)的導(dǎo)致耐藥的重要因素［2］，其可依賴ATP將藥物泵出細(xì)胞外，通過降低細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥。本研究中，塞來昔布下調(diào)實(shí)驗(yàn)NHL細(xì)胞MDR-1和Bcl-2基因表達(dá)，可使腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的抵抗減弱，凋亡增加，從而協(xié)同放大表柔比星的抗腫瘤效應(yīng)。

目前在世界范圍內(nèi)多項(xiàng)塞來昔布應(yīng)用于腫瘤輔助治療的臨床試驗(yàn)已經(jīng)開展，但初步結(jié)論并不一致：雖然在乳腺癌［16］、復(fù)發(fā)性卵巢癌［17］等惡性疾病中塞來昔布顯示出令人鼓舞的臨床療效，但被寄予厚望的STAMPEDE研究否認(rèn)了塞來昔布對(duì)激素敏感型前列腺癌的治療作用［18］。亦有學(xué)者樂觀估計(jì)塞來昔布等COX-2抑制劑在淋巴瘤治療中的應(yīng)用前景［19］，并且塞來昔布的確在部分難治/復(fù)發(fā)性淋巴瘤患者以及MALT淋巴瘤動(dòng)物模型中顯示出一定的抗腫瘤作用［20-21］，但是否所有的NHL病理亞型均適用COX-2抑制劑，是否存在某種可以預(yù)測COX-2抑制劑的生物標(biāo)志，雖然本研究尚不能給出答案，但這些問題無疑值得深入研究。

應(yīng)當(dāng)注意的是，在上述臨床試驗(yàn)中，塞來昔布均為連續(xù)給藥，造成部分患者難以耐受，例如在DoCaCel研究中［22］，雖然塞來昔布帶來的益處已經(jīng)初步顯現(xiàn)，但實(shí)驗(yàn)組患者平均應(yīng)用僅8.5個(gè)月，以致無進(jìn)展生存期及總生存率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。本研究結(jié)果顯示，塞來昔布單獨(dú)應(yīng)用并不能顯著抑制淋巴瘤細(xì)胞增殖，而明顯下調(diào)MDR-1和Bcl-2基因的表達(dá)，與化療藥物表現(xiàn)出協(xié)同抗腫瘤效應(yīng)。由此設(shè)想，在化療的同時(shí)給予塞來昔布，而在化療間歇期則停用，一方面可以保持塞來昔布對(duì)化療的增敏作用，提高療效，另一方面也可以避免長時(shí)間連續(xù)應(yīng)用塞來昔布所帶來的不良反應(yīng)，提高患者對(duì)治療的耐受性。但是該設(shè)想僅由淋巴瘤細(xì)胞系的體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果推斷，是否可行還需要?jiǎng)游矬w內(nèi)實(shí)驗(yàn)、臨床實(shí)踐等進(jìn)一步驗(yàn)證。

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Selective cyclooxygenase-2 inhibitor celecoxib could sensitize B-cell-originated lymphoma cell lines to epirubicin via down-regulation of MDR-1 mRNA and Bcl-2 mRNA expression

HUA Fanli1, WANG Lingyan2, ZHAO Xin1, LI Ying1, WU Yangjiong1, GAO Song1 (1. Department of Hematology, Jinshan Hospital, Fudan University, Shanghai 201508, China; 2. Biomedical Research Centre, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China)

GAO Song E-mail: jsyyxyk2014@163.com

Background and purpose:It has been demonstrated that cyclooxygenase-2 (COX-2) is overexpressed in some subtypes of non-Hodgkin’s lymphoma (NHL), and COX-2 correlates with the expression of P-glycoprotein and Bcl-2, which may contribute to chemotherapy-resistance in NHL. The purpose of this study was to investigate the expression of COX-2 in B-cell lymphoma cell lines and the potential mechanisms of celecoxib, a selective COX-2 inhibitor, to sensitize lymphoma cell lines to epirubicin.Methods:Quantitative fluorescent realtime poly-chain-reaction (qRT-PCR) and Western blot were employed to determine the expression of COX-2 in Raji, Jeko-1 and Namalwa cell lines, as well as in peripheral blood B cells from normal controls. Cell lines were treated with celecoxib at gradient concentrations, followed by the detection of cell viabilities by cell counting kit-8 (CCK-8). Meanwhile, the changes in expression of MDR-1 mRNA and Bcl-2 mRNA before and after celecoxib treatment were determined by qRT-PCR. Raji cells were treated with epirubicin alone or in combination with gradient concentrations of celecoxib for 72 h, then CCK-8 was used to analyze whether celecoxib sensitize Raji cells to epirubicin.Results:Neither lymphoma cell lines nor normal B cells expressed detectable COX-2 in this study. Celecoxib inhibited the proliferation of the 3 lymphoma cell lines, and the mRNA expressions of MDR-1 and Bcl-2 were decreased by celecoxib in a concentration-dependent manner, except for that MDR-1 was undetectable in Jeko-1 cells. In addition, celecoxib sensitized Raji cells to epirubicin, indicating a synergistic anti-tumor effect between the two agents.Conclusion:Selective COX-2 inhibitor celecoxib down-regulates the expressions of MDR-1 mRNA and Bcl-2 mRNA in B-cell-originated lymphoma cell lines, and sensitizes Raji cells to epirubicin.

Cyclooxygenase-2; Celecoxib; Lymphoma; MDR-1 gene; Bcl-2 gene

10.3969/j.issn.1007-3969.2015.06.005

R733.4

A

：1007-3639(2015)06-0433-06

2014-12-05

2015-04-27）

上海市自然科學(xué)基金(13ZR1405700)。

高松 E-mail:jsyyxyk2014@163.com