新疆維吾爾族非小細胞肺癌表皮生長因子受體基因突變與病理特征的相關(guān)性研究

阿提坎·卡吾力++++++張淑娟++++++王磊++++++克尤木·阿不來提++++++常建華

[摘要] 目的 研究新疆維吾爾族非小細胞肺癌（NSCLC）表皮生長因子受體（EGFR）基因突變與病理特征的相關(guān)性。 方法 回顧性分析2003年1月～2014年1月新疆喀什地區(qū)第二人民醫(yī)院診治的新疆維吾爾族NSCLC患者的組織蠟塊43例，病理標(biāo)本均予EGFR基因突變檢測試劑盒檢測，觀察患者EGFR基因突變檢出率、臨床病癥分型與EGFR基因突變的相關(guān)性，基線資料與EGFR基因突變的相關(guān)性。 結(jié)果 本組患者病理標(biāo)本EGFR基因突變率為11.63%（5/43），第19外顯子缺失改變率[80.00%（4/5）]顯著高于第21外顯子L858R點突變率[20.00%（1/5）]（P < 0.01）；臨床病癥分型中腺癌EGFR基因突變檢出率[19.05%（4/21）]較鱗癌[6.67%（1/15）]、大細胞癌[0.00%（0/4）]及其他癌[0.00%（0/3）]高（P < 0.05），同時臨床基線資料中女性EGFR基因突變檢出率[20.00%（4/20）]較男性[4.34%（1/23）]高（P < 0.05）。在臨床基線資料中年齡、吸煙史和TNM分期的EGFR基因突變檢出率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 新疆維吾爾族NSCLC患者EGFR基因突變與病理特征具一定相關(guān)性，臨床女性腺癌患者較多見。

[關(guān)鍵詞] 新疆維吾爾族；非小細胞肺癌；表皮生長因子受體；基因突變；病理特征

[中圖分類號] R734.2 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2016）11（b）-0105-04

[Abstract] Objective To explore the relevance between the gene mutation and pathologic feature of epidermal growth factor receptor in non small cell lung cancer of Xinjiang Uygur. Methods 43 cases wax block tissue of Xinjiang Uygur non small cell lung cancer patients in the Second People's Hospital of Xinjiang Kashi District from January 2003 to January 2014 were selected for retrospective analysis， pathological specimen were tested by EGFR gene mutation detection kit.The mutation detection rate of EGFR gene， relevance between clinical classification of diseases， EGFR gene mutation， the relevance between baseline data and EGFR gene mutation were observed. Results The mutation rate of EGFR gene was 11.63%（5/43）. The constituent ratio of exon nineteenth deletion was 80.00% （4/5）， which was higher than the constituent ratio of exon Twenty-one L858R mutation （20.00%， 1/5）（P < 0.01）. In clinical classification of diseases， mutation detection rate of EGFR gene in adenocarcinoma was 19.05% （4/21）， which was higher than 6.67% （1/15） of squamous cell carcinoma， 0.00%（0/4） of Large cell carcinoma and 0.00%（0/3）of other cancer（P < 0.05）. In clinical baseline data， mutation detection rate of EGFR gene of female was 20.00%（4/20）， which was higher than 4.34% （1/23） of man' （P < 0.05）. In clinical baseline data， Age， smoking history and TNM stage had no significant difference（P > 0.05）. Conclusion There is certain correlation between gene mutation and pathological characteristics in epidermal growth factor receptor in non small cell lung cancer of Xinjiang Uygur， clinical female patients with adenocarcinoma are more common.

[Key words] Xinjiang Uygur； Non small cell lung cancer； epidermal growth factor receptor； Gene mutation； Pathological characteristics

肺癌是臨床常見、多發(fā)的肺原發(fā)惡性腫瘤，臨床患病率、致殘率和死亡率均居高不下。各類肺癌疾病中又以非小細胞癌（non-small-cell carcinoma，NSCLC）的患病人數(shù)最多，約占肺癌總?cè)藬?shù)的75%，且大量研究表明，80%以上NSCLC患者病情已進入中晚期，錯過了常規(guī)根治性手術(shù)或放射性治療的最佳時期[1-4]，勉強手術(shù)后的5年存活期也較短。表皮生長因子受體（epithelial growth factor receptor，EGFR）是上皮生長因子細胞增殖和信號傳導(dǎo)的受體，屬于ErbB受體家族的一種，突變或過表達均會造成腫瘤疾病的快速發(fā)展[5]。EGFR在正常肺細胞組織中不表達或表達較低，而在NSCLC患者肺細胞組織中表現(xiàn)為活性顯著增高，由此可初步認定，EGFR是NSCLC患者較有前途的特異性癌病治療靶點[6-7]。本研究對新疆喀什地區(qū)第二人民醫(yī)院（以下簡稱“本院”）診治的43例新疆維吾爾族非小細胞肺癌患者臨床資料進行回顧性分析，以期為該類型病癥患者臨床治療方案的合理選擇提供科學(xué)指導(dǎo)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2003年1月～2014年1月本院診治的新疆維吾爾族非小細胞肺癌患者的組織蠟塊43例，病情均經(jīng)手術(shù)病理證實[8]。本組患者男23例（53.49%），年齡23～72歲，平均（56.95±2.54）歲；女20例（46.51%），年齡23～75歲，平均（57.88±2.74）歲；年齡分界：<60歲者11例（25.58%），≥60歲者32例（74.42%）；鱗癌、腺癌、大細胞癌和其他癌癥的情況分別為15例（34.88%），21例（48.84%），4例（9.30%）和3例（6.98%）；依據(jù)國際通用腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)做TNM分期，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期腫瘤分別為9例（20.93%），12例（27.90%），19例（44.19%）和3例（6.98%）；有吸煙史者16例（37.21%），無吸煙史者27例（62.79%）；受教育程度：初中及以下12例（27.91%），高中至大專17例（39.53%），大專以上14例（32.56%）。本組患者性別、年齡、病癥分型、TNM分期及受教育程度等基線資料均未對本研究實驗結(jié)果構(gòu)成不良影響。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者病情符合本研究實驗基本要求；均為新疆維吾爾族；研究實驗展開條件均相同；臨床資料無缺失。排除標(biāo)準(zhǔn)：較難完全配合本研究實驗實施者；患者統(tǒng)計資料缺失，無法完成研究分析[9-10]。

1.3 方法

采用4%中性甲醛固定，經(jīng)石蠟包埋本組所有患者的病理標(biāo)本，行常規(guī)HE染色，選擇腫瘤成分>80.00%的瘤組織切片進行EGFR基因突變檢測。43例患者病理標(biāo)本行ARMS-PCR法檢測，均采用EGFR基因突變檢測試劑盒檢測，試劑盒購自廈門艾德生物醫(yī)藥科技有限公司[（貨號：ADx-EG01，EG07，EG08，EG09），規(guī)格：24測試/盒]。反應(yīng)條件分別為，第一次擴增：94℃預(yù)變性3 min，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共25個循環(huán)，最后72℃延伸3 min；第二次擴增：94℃預(yù)變性3 min，58℃ 30 s，72℃ 30 s，共25個循環(huán)，最后72℃延伸3 min。具體操作步驟：將陽性質(zhì)控品Tap酶（EGFR29）取出，室溫解凍后搖勻，離心15 min后待用。然后將3份2.25 μL EGFR29分別置入45 μL待測標(biāo)本DNA、45 μL陽性質(zhì)控品（STD）和45 μL超純水（NTC）中，用渦旋器搖勻15 min后再快速離心15 min[11]。揭開8聯(lián)反應(yīng)條條蓋，取出DNA樣品5 μL分別加入8聯(lián)PCR管反應(yīng)條，蓋上條蓋做離心處理。然后加入PCR儀器，行擴增程序。共進行三個階段，將各階段收集到的信號，行實時PCR，并保存文件。

1.4 觀察指標(biāo)

統(tǒng)計本組43例NSCLC患者的EGFR基因，主要包括第19外顯子和第21外顯子L858R點的突變檢測情況；分析本組所有患者各基線資料與EGFR基因突變的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 本組NSCLC患者EGFR基因突變檢測情況

本組43例NSCLC患者EGFR基因突變的檢出例數(shù)為5例（11.63%），其中4例患者為EGFR基因第19外顯子缺失改變，占EGFR基因突變總數(shù)的80.00%（4/5），明顯高于1例患者EGFR基因第21外顯子L858R點突變，所占的20.00%（1/5），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。

2.2 本組NSCLC臨床病癥分型與EGFR基因突變的相關(guān)性

本組43例NSCLC患者臨床病癥分型與EGFR基因突變具有一定相關(guān)性，即腺癌患者EGFR基因突變檢出率為19.05%（4/21），明顯高于臨床其他幾個癌病癥。見表1。

2.3 本組NSCLC基線資料與EGFR基因突變的相關(guān)性

本組43例NSCLC臨床基線資料中女性EGFR基因突變檢出率為20.00%（4/20），較男性的4.35%（1/23）高（P<0.05），剩余3項基線資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

3 討論

肺癌在臨床惡性腫瘤疾病中位居首位，具有極高的病死率，其中NSCLC又以75%的比率，為肺癌患病人數(shù)最多的病癥。NSCLC確診較晚，常見手術(shù)和化療方法治療已無法取得理想臨床效果，患者5年存活期也較短。隨著科學(xué)技術(shù)的進步和對NSCLC的深入研究，EGFR作為原癌基因的一種表達產(chǎn)物，EGFR高表達或基因突變會促進瘤血管生成，加快癌變進展，NSCLC患者肺細胞組織中EGFR表達普遍較高，因此尋找EGFR基因突變的關(guān)聯(lián)因素并靶向抑制，對NSCLC疾病的治療具較大幫助。由于國內(nèi)外對新疆維吾爾族NSCLC患者EGFR基因突變的相關(guān)研究較少，本文相關(guān)研究具有十分重要的意義。

EGFR基因位于人類第7號染色體短臂7p12-14區(qū)，包括28個外顯子，EGFR基因是上皮生長因子細胞增殖和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的受體，與腫瘤細胞組織的侵襲、增殖、轉(zhuǎn)移、凋亡抑制及血管生成有密切聯(lián)系[12-13]。EGFR基因突變檢測對非小細胞癌患者個體化療具有積極幫助，所以本研究回顧性分析本院診治的43例新疆維吾爾族NSCLC患者的臨床資料，根據(jù)其EGFR基因突變檢出率，患者臨床病癥分型與EGFR基因突變的相關(guān)性以及患者臨床基線資料與EGFR基因突變的相關(guān)性予以綜合性分析，旨在為NSCLC患者臨床治療提供依據(jù)。本次收集標(biāo)本量較少，考慮原因為：①患者就診時即為晚期，失去了手術(shù)機會，未能收集到組織標(biāo)本；②特殊的地理區(qū)域及經(jīng)濟特點，患者經(jīng)濟承受能力較差，未能進一步診斷治療；③部分患者經(jīng)穿刺確診為肺癌，但組織較小，無法完成EGFR基因的進一步檢測。

研究結(jié)果顯示，本組43例患者中EGFR基因突總檢出率為11.63%（5/43），其中4例患者為EGFR基因第19外顯子缺失改變，占EGFR基因突變總數(shù)的80.00%（4/5），明顯高于1例患者EGFR基因第21外顯子L858R點突變占EGFR基因突變總數(shù)的20.00%（1/5），其可能與小分子TKIs的敏感度具有一定關(guān)系。大量研究證實，18-21外顯子為EGFR基因的主要突變點，而其中90%是19和21號的外顯子突變，腫瘤細胞的耐藥性與21號外顯子點突變密切關(guān)聯(lián)，這主要是由于C-T的轉(zhuǎn)換在790位密碼子出現(xiàn)，引起的EGFR基因中790位點的T790M轉(zhuǎn)變，好發(fā)于藥物治療后癌癥復(fù)發(fā)患者中[14]。本研究患者均未首次接受治療，因此第21號外顯子L858R突變檢測率低于第19外顯子缺失改變，上述理論研究很好地證明了本次實驗結(jié)果。EGFR基因突變率在不同種族的人群中存在顯著差異。文獻報道，亞洲人口EGFR基因突變率能夠達到40%左右，而高加索人群則還不到10%[15]。另有研究認為，新疆維吾爾族為羅馬人種，本組患者的EGFR基因突變率為11.63%，考慮與種族差異有關(guān)，需要進一步的實驗研究[16]。

本研究中針對患者臨床病癥分型與EGFR基因突變的相關(guān)性給予調(diào)查分析，結(jié)果顯示，本組患者臨床病癥分型與EGFR基因突變具有一定相關(guān)性，即腺癌患者EGFR基因突變檢出率最高：19.05%（4/21），明顯高于鱗癌的6.67%（1/15），大細胞癌的0.00%（0/4）及其他癌病患者的0.00%（0/3）。提示NSCLC患者病癥分析與EGFR基因突變具有一定相關(guān)性，由此看來，在臨床治療中可根據(jù)患者疾病類型做出良好治療方案的擬定，這對增強NSCLC患者臨床治療效果，提高生存率，改善其生活質(zhì)量均具有積極影響意義[17]。臨床相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，我國漢族肺腺癌EGFR突變率約為75%，本研究新疆維吾爾族19.05%檢出率明顯比較低，因此臨床應(yīng)用EGFR-TKI的效果會受到限制，但是本研究樣本較少，期待以后會有進一步的研究進展[18]。

本研究結(jié)果顯示，本組43例非小細胞癌患者臨床基線資料中女性患者EGFR基因突變檢出率為20.00%（4/20），較男性患者4.35%（1/23）高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，但患者年齡、有無吸煙史、TNM分期等基線資料比較無明顯差別。相關(guān)臨床研究發(fā)現(xiàn)，EGFR基因突變檢出率與性別無關(guān)聯(lián)，男女患者相關(guān)檢出率無明顯差異，與本研究結(jié)果存在差異，分析原因可能與本研究樣本基數(shù)比較少相關(guān)[19]。且本研究吸煙與非吸煙突變無明顯差異，與相關(guān)研究存在區(qū)別，分析原因可能與當(dāng)?shù)剡x取樣本二手煙、其他途徑吸煙造成突變降低相關(guān)[20]。關(guān)于新疆維吾爾族NSCLC患者EGFR基因突變與相關(guān)病理特征因素的相關(guān)性，還需后續(xù)更多的臨床研究及驗證。

綜上所述，新疆維吾爾族NSCLC患者EGFR基因突變與病理特征具有一定相關(guān)性，通常多見于腺癌，好發(fā)于女性患者，且EGFR的基因突變研究可有效促進肺癌分子靶向的治療發(fā)展。靶向藥物治療雖然個體差異較大，但其能夠針對性地阻斷機體腫瘤細胞增殖，具有獨特的靶向治療機制，且毒副作用小。因此，可合理利用基因檢測進行靶向治療優(yōu)勢人群的篩選，完成個體化的治療方案實施，從而進一步提升腫瘤患者的臨床療效。

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