抗敏止癢液的質(zhì)量研究

周 順，劉豐賢

(1. 湘西苗族土家族自治州民族中醫(yī)院，湖南 吉首 416000;2.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410013)

抗敏止癢液由千里光、苦參、大黃、金銀花等9味中藥經(jīng)水提、過濾、濃縮而成，功能:清熱祛風(fēng)，抗敏止癢;主治:痱子、丘疹、尋麻疹、夏季性皮炎、過敏性皮炎、風(fēng)熱性濕疹等。本文通TLC 法和HPLC 法對方中主要藥材和主要有效成分進(jìn)行了實驗研究，擬制定簡便有效的方法對本制劑進(jìn)行質(zhì)量控制。

1 主要儀器與試藥

島津LC-210ATvp 型高效液相色譜儀，SPD-210Avp 可見紫外檢測器，浙大N3000 雙通道色譜工作站;對照品綠原酸、對照藥材金銀花、千里光、苦參、大黃等均購自中國藥品生物制品檢定所;乙腈為色譜純，水為重蒸水。其他試劑均為分析純，抗敏止癢液由湘西苗族土家族自治州民族中醫(yī)院提供。

2 實驗及結(jié)果

2.1 薄層鑒別試驗

2.1.1 千里光［1］

取樣品20mL，水浴蒸干后，殘渣加無水乙醇50mL 水浴回流1 h，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加無水乙醇1mL 使溶解，作為供試品溶液;取缺千里光的陰性樣品，同供試品溶液的制備方法，制備成陰性對照溶液;取千里光對照藥材1.0g，加水100mL 煎煮1 h，濾過，濾液水浴蒸干，加無水乙醇50mL 水浴回流1 h，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為對照藥材溶液。

取上述溶液各10μL 分別點于以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:0.5)為展開劑上行展開。紫外燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點;陰性對照無干擾，薄層試驗結(jié)果見圖1A。

2.1.2 苦參［2］

取樣品10mL，加濃氨溶液調(diào)節(jié)pH 值至為12，加乙酸乙酯振搖提取2 次，每次30mL，合并乙酸乙酯溶液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1mL 使溶解，作為供試品溶液;取缺苦參的陰性樣品，同法制成陰性對照溶液;取苦參對照藥材0.5g，加濃氨溶液浸泡1 h后，再加乙酸乙酯20mL，超聲處理45min，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加甲醇1mL 使溶解，作為對照藥材溶液。

取上述溶液各10μL 分別點于以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 板上，以甲苯-丙酮-乙酸乙酯-濃氨試液(15:5:20:1)為展開劑，上行展開，噴以改良碘化鉍鉀試液顯色，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，薄層試驗結(jié)果見圖1B。

2.1.3 大黃［3］

取樣品15mL，加HCl1.5mL，水浴加熱30min，冷卻至室溫，加二氯甲烷振搖提取2 次，每次20mL，合并二氯甲烷溶液，水浴揮干，殘渣加甲醇1mL 使溶解，作為供試品溶液;取缺大黃的陰性樣品15mL，同法制成陰性對照溶液;取大黃對照藥材0.5g，加熱水20mL，超聲處理1 h，過濾，濾液加HCl1.5mL，水浴加熱30min，冷卻至室溫，加二氯甲烷振搖提取2 次，每次20mL，合并二氯甲烷，水浴揮干，殘渣加甲醇1mL 使溶解，作為對照藥材溶液。

取上述溶液各10μL 分別點于以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 板上，以石油醚(60℃ ～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)的上層液為展開劑，上行展開，日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點;陰性對照無干擾，薄層試驗結(jié)果見圖1C。

2.2 綠原酸含量測定［4］

2.2.1 色譜條件

Kromasil C18(250mm×4·6mm，5μm)色譜柱，乙腈-0·4% 磷酸(10:90)為流動相，檢測波長為327nm，流速1mL/min，柱溫室溫。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品0.1g，精密稱定，置10mL 量瓶，用甲醇稀釋至刻度，輕輕振搖，使溶解，得標(biāo)準(zhǔn)品母液備用。

2.2.3 供試品溶液配制

精密量取抗敏止癢液10mL，水浴蒸干，殘渣加甲醇30mL 使溶解，過濾，用適量甲醇洗滌殘渣，濾液定量轉(zhuǎn)移至100 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，作為供試品溶液。

2.2.4 專屬性試驗

按處方制備不含金銀花的陰性樣品，按照供試品溶液的制備方法制成陰性溶液。取陰性樣品、對照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣測定，色譜圖見圖2?？梢娫诖松V條件下，陰性樣品對測定無干擾。

圖1 薄層色譜圖(1. 陰性對照，2.3.4. 樣本，5.參考值)

圖2 薄層色譜圖

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別取2. 2 項下的標(biāo)準(zhǔn)母液溶液0. 1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL 稀釋至1mL。得到濃度分別為0. 1003mg/mL、0. 2006 mg/mL、0.3009 mg/mL、0. 4012 mg/mL、0. 5015 mg/mL、0.6018mg/mL。分別注入高液色譜儀，進(jìn)樣量20μL。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制表尊曲線，得回歸方程。y =1579461.7x +3123.2，r=0.9997，線性范圍:2μg ～12μg。

2.2.6 精密度試驗

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0.5015 mg/mL)20μL，連續(xù)進(jìn)樣6 次。綠原酸的峰面積RSD 為0.55%(n=6)。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品(20130601)溶液20μL，分別在0、2、4、6、8、10h 進(jìn)樣1 次，綠原酸的峰面積RSD為0.95%(n =5)，表明供試品溶液在10h 內(nèi)，綠原酸含量穩(wěn)定

2.2.8 加樣回收率

精密量取6 份同一批樣品(20130601)，每份5mL(含量0.4811mg/mL)，水浴蒸干，殘渣分別加標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0. 01003mg/mL、0. 03009 mg/mL、0.06018 mg/mL)25mL 定容，制備成供試品溶液，分別進(jìn)樣20μL，計算得平均回收率為99.56%，RSD為0.16%，結(jié)果見表1。

2.2.9 樣品測定

取五批樣品，制成供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液20μL，進(jìn)樣測定，按回歸方程計算綠原酸的含量，結(jié)果見表2。

表1 綠原酸的回收率

表2 綠原酸含量的測定

3 討論

TLC 實驗研究表明處方中千里光、苦參、大黃的薄層色譜鑒別簡便可行，結(jié)果可靠;HPLC 測定方中綠原酸含量方法簡捷，結(jié)果穩(wěn)定可靠。二者可作為該處方的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

［1］Chinese Materia Medica 中華本草［M］. Shanghai:Shanghai Provincial Science and Technology Press，1999，1390.

［2］李毅，王飛，吳民.苦參藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］. 中成藥，2011，32(2):363-364.

［3］顧明娟，蔡定國. 大黃蒽醌甙元的TLC 展開劑改進(jìn)［J］.中成藥，199，2(8):31.

［4］Zhang Jian-hai，F(xiàn)eng Bin-bin. RP-HPLC Determination on the Content of Chlorogenic Acid in FLOS LONICERAE JAPONICAE and FLOS LONICERAE from Different Producing Areas［J］. Medicinal Plant ，2012，3(1):52-53，57.