半胱氨酰白三烯受體CysLT1R在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義

張世強(qiáng)，唐采白，陳衛(wèi)花(徐州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，徐州 006;徐州醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院消化內(nèi)科;徐州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院病理科)

近年來，炎癥因子和大腸癌發(fā)生之間的關(guān)系逐漸引起人們的重視。研究表明，炎性腸病患者結(jié)腸癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)要高30倍［1］，在許多與腸道炎癥和腫瘤發(fā)生有關(guān)的炎性因子中，白三烯(leukotrienes，LTs)和前列腺素的作用受到特別的關(guān)注，其中LTs包括白三烯B4(LTB4)以及半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes，CysLTs)。LTs與炎性腸病的發(fā)生有特殊的相關(guān)性［2，3］，然而，國外研究發(fā)現(xiàn) CysLTs能刺激腸道上皮細(xì)胞發(fā)生增生反應(yīng)，提示白三烯也可能參與腸道上皮細(xì)胞的過度增生和腫瘤形成［4］。本研究通過免疫組化檢測大腸癌組織、癌旁組織及大腸癌前病變腺瘤性息肉組織中CysLT1R的表達(dá)，來探討CysLT1R在人類大腸癌發(fā)生發(fā)展中的可能作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2009-2013年間徐州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院病理科存檔大腸癌組織蠟塊46例，其中男性26例，女性20例，年齡29-72歲，中位年齡56歲;癌旁組織32例(與32例癌組織標(biāo)本為同一患者，另外14例患者癌旁組織中發(fā)現(xiàn)有點(diǎn)狀癌細(xì)胞浸潤，無法作為對照組)，其中男性18例，女性14例，年齡29-68歲;管狀絨毛狀腺瘤15例，其中男性8例，女性7例，年齡35-74歲。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行放療和化療。標(biāo)本分為大腸癌組、腺瘤性息肉組及癌旁黏膜組。

1.2 主要試劑

CysLT1R兔抗人多克隆抗體購自美國Cayman公司，免疫組化DAB顯色試劑盒購自北京中杉生物技術(shù)公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

免疫組化技術(shù)采用EnVision二步法，免疫組化過程:組織切片經(jīng)脫蠟、水化后，用檸檬酸緩沖液(pH=6.0)微波熱修復(fù)抗原5 min，30 g/L過氧化氫封閉內(nèi)源性的過氧化物酶，山羊血清封閉非特異性反應(yīng)。PBS替代一抗作陰性對照。參照文獻(xiàn)［5］對染色結(jié)果進(jìn)行判斷。5%以上細(xì)胞胞膜或胞質(zhì)染色判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

將所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)輸入SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)或Fisher檢驗(yàn)分析CysLT1R表達(dá)與大腸癌臨床病理因素的相互關(guān)系，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CysLT1R在大腸癌組織、癌旁組織及腺瘤性息肉組織的表達(dá)

CysLT1R免疫組化陽性產(chǎn)物主要定位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，部分患者可見胞核著色(圖1，見第247頁)。46例大腸癌組織中，CysLT1R陽性表達(dá)31例(67.39%)，32例癌旁組織中，CysLT1R陽性表達(dá)13例(40.62%)，15例大腸腺瘤性息肉組織中，Cys-LT1R陽性表達(dá)6例(40.00%)，大腸癌組織中，Cys-LT1R的陽性表達(dá)率高于癌旁組織、腺瘤性息肉組織(P ＜0.05，見表1)。

圖1 CysLT1R在大腸癌組織、癌旁組織及腺瘤性息肉組織中的表達(dá) (EnVision，×400)Figure 1 CysLT1R protein expression in colorectal carcinoma tissues，para-neoplastic tissues and adenomatous polyp tissues(EnVision，×400)

表1 CysLT1R在大腸癌組織、癌旁組織及腺瘤性息肉組織的表達(dá) (例)Table 1 CysLT1R expression in colorectal carcinoma tissues，para-neoplastic tissues and adenomatous polyp tissues (cases)

2.2 CysLT1R的表達(dá)與大腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系

CysLT1R的表達(dá)與大腸癌的病理分級、腫瘤最大徑、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)，其中高分化腺癌、腫瘤最大徑＜5 cm、淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移及臨床分期早的患者CysLT1R的陽性表達(dá)率均明顯低于中低分化腺癌、腫瘤最大徑＞5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及中晚期的患者(P＜0.05);但CysLT1R的表達(dá)與大腸癌患者的性別無明顯的關(guān)系(P＞0.05，見表2)。

表2 CysLT1R的表達(dá)與大腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系Table 2 Correlation of CysLT1R expression in colorectal carcinoma tissues with clinical pathological features

3 討論

大腸癌是目前嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤之一，大腸癌在全球發(fā)病率高居惡性腫瘤第四位［6］，我國大腸癌發(fā)病率在近30年中總體增加36.7%，年均新發(fā)大腸癌病例13萬，并以年均4.2%的增幅攀升［7］。大腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)涉及多因素、多步驟、多基因的過程，具有高復(fù)發(fā)和高轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，目前對于大腸癌的發(fā)病及其轉(zhuǎn)移尚無有效的防治手段，其發(fā)病機(jī)制和防治依然是這一領(lǐng)域中的研究熱點(diǎn)。

近年來研究證實(shí)，白三烯及其受體(1eukotriene receptors，LTRs)參與了多種腫瘤的發(fā)生，是腫瘤發(fā)生的一種新機(jī)制，其主要機(jī)制可能為腫瘤細(xì)胞上白三烯受體高表達(dá)，發(fā)揮了對腫瘤細(xì)胞的促增殖作用。另外有研究發(fā)現(xiàn)半胱氨酰白三烯受體1(CysLTR1)在結(jié)腸癌細(xì)胞中發(fā)生核轉(zhuǎn)位是發(fā)揮促增殖作用的重要機(jī)制，這種促增殖效應(yīng)可被相應(yīng)的受體拮抗劑所阻斷［8］。白三烯B4(LTB4)受體結(jié)抗劑LY29311是第二代LTB4受體結(jié)抗劑，在臨床試驗(yàn)中顯示有顯著的抗瘤效應(yīng)［9，10］。因此，研究白三烯及其受體與腫瘤的發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，對于大腸癌的早期防治具有重要的意義。目前雖然已有研究報(bào)道LTRs在多種組織細(xì)胞中表達(dá)，但關(guān)于LTRs在結(jié)腸腫瘤組織中的表達(dá)、分布與功能，以及他們在結(jié)腸腫瘤發(fā)病中作用的研究少見報(bào)道。如果能夠了解白三烯受體在腸黏膜上皮細(xì)胞中的表達(dá)狀況與功能，對于評價(jià)LTRs在結(jié)腸腫瘤發(fā)病中的作用以及尋求新的治療靶位具有積極的意義。

本研究結(jié)果顯示，大腸癌組織中CysLT1R的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織、腺瘤性息肉，而高分化腺癌、腫瘤最大徑＜5 cm、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期較早期的患者CysLT1R陽性表達(dá)率均明顯低于中或低分化腺癌、腫瘤最大徑≥5 cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期較晚的患者，統(tǒng)計(jì)分析顯示差異均具有顯著性(P＜0.05)。因此，本研究認(rèn)為，大腸癌變過程中CysLT1R表達(dá)水平明顯上調(diào)，陽性表達(dá)者進(jìn)展快，易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，CysLT1R表達(dá)水平可能是反映大腸癌發(fā)生發(fā)展的重要標(biāo)志物，且其表達(dá)水平與大腸癌分化程度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期密切相關(guān)，但由于本研究中病例數(shù)較少，仍有待積累更多的病例進(jìn)行更深入的研究。

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