RP-HPLC法測(cè)定香連膠囊中鹽酸小檗堿的含量

徐慶輝

(安徽省黃山市食品藥品檢驗(yàn)研究所，安徽黃山 245000)

香連膠囊由黃連(吳茱萸制)及木香提取加工制成，用于濕熱痢疾，里急后重，腹痛泄瀉;菌痢，腸炎。其中黃連清熱燥濕，瀉火解毒。用于濕熱痞滿(mǎn)，嘔吐吞酸，瀉痢，黃疸，高熱神昏，心火亢盛，心煩不寐，血熱吐衄，目赤，牙痛，消渴，癰腫疔瘡;外治濕疹，濕瘡，耳道流膿。黃連主要成分為鹽酸小檗堿，主要用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等腸道感染、眼結(jié)膜炎、化膿性中耳炎等有效。我們以鹽酸小檗堿為對(duì)照品，參照有關(guān)文獻(xiàn)［1－10］，采用 HPLC法測(cè)定了香連膠囊中鹽酸小檗堿含量，并以此作為質(zhì)量控制指標(biāo)，試驗(yàn)結(jié)果表明，該法簡(jiǎn)便快速，穩(wěn)定可靠。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀，日本島津LC-10AT高效液相色譜儀;SPD-10A紫外檢測(cè)器;N2000色譜工作站;AB135-S十萬(wàn)分之一電子天平;ADVENTURER(AR1140)萬(wàn)分之一電子天平。

1.2 試藥 鹽酸小檗堿對(duì)照品:中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào):110713－200911(供含量測(cè)定用，含量為86.8%);香連膠囊三批樣品:由本公司提供，批號(hào):201202016，201202018，201202020。乙腈為色譜純，美國(guó)天地公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.1.1 色譜條件 色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(Shim －Pack VP －ODS，250 L ×4.6);流動(dòng)相為0.05 mol·L－1磷酸二氫鉀溶液 － 乙腈(50∶50，每1 000 mL流動(dòng)相含十二烷基硫酸鈉1.7 g);檢測(cè)波長(zhǎng):在200～400 nm波長(zhǎng)進(jìn)行掃描對(duì)照品溶液，鹽酸小檗堿的最大吸收波長(zhǎng)在265 nm，選擇其為檢測(cè)波長(zhǎng);柱溫:25 ℃，流速:1.0 mL·min－1。

2.1.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 在此條件下分別精密吸取下述對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖1～3。可見(jiàn)分離良好，陰性對(duì)照無(wú)干擾，供試品溶液的鹽酸小檗堿峰與相鄰峰達(dá)到基線(xiàn)分離。其保留時(shí)間為14.7 min，色譜柱理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算約為16 000。

圖1 鹽酸小檗堿的HPLC圖譜

圖2 陰性對(duì)照的HPLC圖譜

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品7.35 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，作為對(duì)照品溶液。

圖3 供試品的HPLC圖譜

2.3 供試品溶液的制備 取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，碾細(xì)，取0.2 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇－鹽酸(100∶1)的混合溶液50 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇－鹽酸(100∶1)的混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液1 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按本品的制備工藝，制成不含黃連的陰性對(duì)照樣品，再按供試品制備方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備及線(xiàn)性范圍的考察 精密量取鹽酸小檗堿對(duì)照品濃配液適量加甲醇分別稀釋50倍、25倍、10倍、5倍和2倍，搖勻，分別作為供試品溶液。分別吸取上述溶液各20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以對(duì)照品的峰面積(Y)對(duì)鹽酸小檗堿對(duì)照品濃度(X)回歸，得回歸方程Y=100 147X－16 995，相關(guān)系數(shù)r=1(n=5)，結(jié)果見(jiàn)表1。試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸小檗堿對(duì)照品在所試濃度5.104 ～127.595 mg·L－1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

表1 鹽酸小檗堿對(duì)照品線(xiàn)性考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖4 鹽酸小檗堿對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.6 精密度試驗(yàn)

2.6.1 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批香連膠囊樣品(201202016批)，照含量測(cè)定項(xiàng)下的測(cè)定方法，測(cè)定6次，記錄色譜圖。含量分別為 48.59、48.46、48.58、48.56、48.69、48.67 mg/粒，SD 為 0.08%，RSD為0.17%。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法重復(fù)性良好。

2.6.2 中間精密度試驗(yàn) 由兩人在不同時(shí)間不同儀器進(jìn)行同一批樣品的6次含量測(cè)定，數(shù)據(jù)及結(jié)果見(jiàn)表2。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法中間精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對(duì)照品及供試品溶液分別于0、2、4、6、8、10 h 進(jìn)樣，記錄峰面積積分值，對(duì)照品溶液分別為 2 543 733、2 545 687、2 545 370、2 543 954、2 541 189、2 550 710，RSD 為 0.12%;供照品溶液分別為 3 429 677、3 422 319、3 421 170、3 418 003、3 415 099、3 417 387，RSD 為0.15%。試驗(yàn)結(jié)果表明:樣品溶液在所試10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)(201202016批)樣品(含量為48.59 mg/粒)，取6份，每份稱(chēng)取0.1 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，分別加入鹽酸小檗堿對(duì)照品適量置相應(yīng)的錐形瓶中，精密加甲醇－鹽酸(100∶1)的混合溶液50 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇 －鹽酸(100∶1)的混合溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，精密量取續(xù)濾液1 mL置10 mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，即得。分別取供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積計(jì)算本法的回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。平均回收率99.58%，RSD為0.83%，試驗(yàn)結(jié)果表明，本法測(cè)定鹽酸小檗堿含量方法的準(zhǔn)確度良好。

表2 中間精密度試驗(yàn)

表3 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定及含量限度的確定 按上述確定的色譜條件和測(cè)定方法，對(duì)香連膠囊三批樣品中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表4。試驗(yàn)結(jié)果表明:三批樣品的含鹽酸小檗堿量符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的本品每粒含黃連以鹽酸小檗堿(C20H18ClNO4)計(jì)，應(yīng)不得少于 40.0 mg。

表4 三批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

供試品的提取中采用甲醇鹽酸溶液，因?yàn)辂}酸小檗堿為強(qiáng)酸弱堿鹽，以含1%鹽酸的甲醇溶液進(jìn)行提取有利于鹽酸小檗堿的溶出完全，并可顯著減少其他雜質(zhì)峰的干擾，保證方法的準(zhǔn)備性。

本法測(cè)定香連膠囊中鹽酸小檗堿含量簡(jiǎn)單迅速、分離度好，可用于香連膠囊鹽酸小檗堿含量的測(cè)定。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典(一部)［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:894.

［2］ 王 薇，劉祖雄，覃 貝，等.香連膠囊的制備與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.制劑技術(shù)，2011，20(13):29 －30.

［3］ 堵偉鋒，桂雙英，鉏 瑛.連桂扶正顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.安徽醫(yī)藥2012，16(4):462－464.

［4］ 楊冬梅，張 毅，劉 俊.不同溶媒在不同提取方法下對(duì)吳茱萸總堿提取率的影響［J］.安徽醫(yī)藥，2012，16(6):765 －766.

［5］ 蔣叔霏.高效液相色譜法測(cè)定消渴靈片中鹽酸小檗堿含量［J］.安徽醫(yī)藥，2012，16(6):766 －767.

［6］ 馮 果，劉 文，陳登科，等.香連丸中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定［J］.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，33(4):17 －19.

［7］ 柴 軍，汪佳萍，謝浙裕.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定明目蒺藜丸中黃芩苷、鹽酸小檗堿、升麻素苷和甘草苷的含量［J］.中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2013，31(3):652 －654.

［8］ 肖麗和，王鐵杰，韓東岐，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定萬(wàn)氏牛黃清心片中4個(gè)有效成分的含量［J］.藥物分析雜志，2013，33(7):1227－1230.

［9］ 林 微.高效液相色譜法測(cè)定砂連和胃膠囊中鹽酸小檗堿的含量［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)雜志，2013，19(10):1196 －1197.

［10］ 趙嚴(yán)麗，陳淑娟.高效液相色譜法測(cè)定消渴平膠囊中鹽酸小檗堿含量［J］.中國(guó)藥業(yè)，2014，23(1):10 －11.