不同粉碎粒度對(duì)黃芪多糖提取率影響研究

王淑萍，田 甜

（長(zhǎng)春工程學(xué)院理學(xué)院，長(zhǎng)春130012）

黃芪（Radix Astragalus）是豆科植物中常用的中草藥，黃芪多糖（Astragalus Polysacharin，APS）是黃芪中最重要的天然有效成分，是黃芪藥理作用中起決定性因素的一類大分子化合物，具有促進(jìn)免疫器官功能和抗體生成，抗菌抗病毒和抗腫瘤，防衰老及抗輻射，雙向調(diào)節(jié)血糖等作用［1－4］。黃芪多糖的多種生物活性及良好的臨床效果已成為多年來國(guó)內(nèi)外中藥提取及中草藥現(xiàn)代化研究的焦點(diǎn)之一［5－6］。自1981年黃芪多糖被提取分離以來，研究報(bào)道不斷增多［5－6］，作用范圍日益擴(kuò)大，對(duì)黃芪多糖的研究引起了人們的極大關(guān)注。但是傳統(tǒng)黃芪多糖的提取工藝得到多糖粗品的收率極低，加上提取成本很高，使得黃芪多糖的開發(fā)利用受到限制。為了進(jìn)一步開發(fā)利用該類活性成分，許多學(xué)者在研究黃芪多糖組成、結(jié)構(gòu)和產(chǎn)物活性的同時(shí)，對(duì)其提取分離工藝進(jìn)行了研究，以期找出一種更合理、更可行的生產(chǎn)工藝［1］。本文采用溫浸法對(duì)不同粉碎粒度對(duì)黃芪多糖提取率的影響進(jìn)行了研究，為黃芪多糖的大規(guī)模開發(fā)和應(yīng)用提供了科學(xué)資料和依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器、試劑及材料

電子天平（上海天平儀器廠，F(xiàn)A1004）；紫外可見分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司，UV755B）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠，101－1－BS）；恒溫水浴鍋（河北冀驊市航天儀器廠，DZKW－D）；循環(huán)水式多用真空泵（上海豫康科教儀器設(shè)備有限公司，SHB－ⅢA）；酒精計(jì)（河北省河間市黎民居儀表廠）；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（上海金穗生物科技有限公司，色譜純，批號(hào)：20131217）；黃芪飲片（購(gòu)之于長(zhǎng)春市人民大藥房，經(jīng)鑒定為蒙黃芪，產(chǎn)地甘肅）；實(shí)驗(yàn)所用試劑均為北京化工廠生產(chǎn)（分析純）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制［7］

準(zhǔn)確稱取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品10mg于100mL容量瓶中，加去離子水稀釋至刻度，搖勻，質(zhì)量濃度為0.1mg／mL。分別吸取配制好的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL于10mL容量瓶中，分別加去離子水至2mL，加入5%的苯酚溶液1mL，搖勻后迅速加入5mL濃硫酸顯色，振搖5min，在沸水浴上加熱15min后于冷水浴中冷卻30min。在490nm處以試劑為空白測(cè)定吸光度A。

1.2.2 黃芪多糖的提取

取黃芪飲片粉碎，分別過80目、45目、30目篩，分別稱取40g粉末置于250mL容量瓶中，按1∶10的料液比加去離子水，放入沸水浴中提取1.5h，提取液抽濾，濾渣按照1∶8料液比加水，再次提取1h，抽濾，合并2次濾液，濾液濃縮至1∶1（g／mL）

1.2.3 黃芪多糖的分離

將濃縮至1∶1的提取液分別按照1∶3加入95%的乙醇溶液，邊加邊攪拌，室溫靜置過夜，棄去上清液。沉淀用50mL無水乙醇洗滌一次，沉淀放置2h，揮發(fā)乙醇后，稱膏重。沉淀物放入真空干燥箱干燥12h，稱重。

1.2.4 95%乙醇沉淀物糖含量測(cè)定

分別取80目、45目、30目95%乙醇沉淀干燥物15mg，加水定容至100mL，取1mL于10mL容量瓶中，按照配制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法處理樣品，測(cè)定吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果分析

以葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為Y＝0.702 7 X＋0.013 1，相關(guān)系數(shù)r＝0.998 7，葡萄糖含量在（0.0～1.0）×10－4g范圍內(nèi)服從朗伯—比耳定律。

2.2 黃芪多糖分離結(jié)果與討論

不同粉碎粒度95%乙醇沉淀物得率見表1。

表1 不同粉碎粒度95%乙醇沉淀物重量及得率

可見，粉碎粒度為80目時(shí)95%乙醇沉淀物得率最高為18.49%，粉碎粒度為30目時(shí)95%乙醇沉淀物得率最低為11.90%。

2.3 95%乙醇沉淀物糖含量測(cè)定結(jié)果與分析

不同粉碎粒度95%乙醇沉淀物吸光度測(cè)得值，見表2。

根據(jù)葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線Y＝0.702 7 X＋0.013 1計(jì)算得到不同粉碎粒度95%乙醇沉淀物糖含量和純度，見表3。

可見黃芪多糖提取率受黃芪不同粉碎粒度的影響較大，粉碎粒度越小，黃芪多糖提取率越高，當(dāng)粉碎成細(xì)粉80目時(shí)可以大大提高黃芪多糖提取率。

表2 不同粉碎粒度95%乙醇沉淀物吸光度值

表3 不同粉碎粒度95%乙醇沉淀物黃芪多糖含量及純度

本論文通過溫浸法對(duì)黃芪不同粉碎粒度對(duì)黃芪多糖提取率的影響進(jìn)行了研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示黃芪粉碎粒度可能是影響黃芪多糖提取率的關(guān)鍵因素，當(dāng)黃芪粉碎成細(xì)粉80目時(shí)可以大大提高黃芪粗多糖的純度和提取率，這些數(shù)據(jù)為我國(guó)傳統(tǒng)中藥黃芪的大規(guī)模開發(fā)和應(yīng)用提供了科學(xué)資料和依據(jù)。

［1］劉瑞生.黃芪多糖提取方法研究進(jìn)展［J］.中國(guó)獸藥雜志，2007，41（3）：35－36.

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［4］韓鳳蘭，陸峰，陳宇紅.黃芪多糖的提取研究［J］.寧夏農(nóng)林科技，2004，5：22－23.

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［7］李孝棟，陳景山，陳峰，等.黃芪多糖含量測(cè)定的方法學(xué)研究［J］.世界科學(xué)技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2006，8（2）：36－37.