落花生莖葉中揮發(fā)性成分及芳樟醇含量的GC—MS法測(cè)定

鉏曉艷+熊光權(quán)+廖濤+喬宇+李新+耿勝榮

摘要：為了建立氣相色譜法測(cè)定落花生（Arachis hypogaea L.）莖葉中揮發(fā)性成分及芳樟醇含量的方法，通過(guò)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用，以石油醚為介質(zhì)，分析了落花生莖葉中揮發(fā)性成分，并測(cè)定了落花生莖葉揮發(fā)油中芳樟醇的含量。結(jié)果鑒定出33種落花生莖葉揮發(fā)性成分，其中主要組分為3，7-二甲基-1，6-辛二烯-3-醇（芳樟醇，16.82%）、N-棕櫚酸（17.07%）和1-辛烯-3-醇（芳樟醇的分解產(chǎn)物，8.82%），均能與內(nèi)標(biāo)物很好地分離。芳樟醇在6.25～200.00 μg/mL內(nèi)線性關(guān)系良好（R2=0.999 7）。石油醚中的芳樟醇濃度為10.415 mg/mL，落花生莖葉中芳樟醇濃度為578.611 mg/kg。試驗(yàn)結(jié)果表明，該方法適用于落花生莖葉揮發(fā)性成分及芳樟醇的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：落花生（Arachis hypogaea L.）莖葉；GC-MS； 揮發(fā)性成分；芳樟醇

中圖分類號(hào)：O657.63 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）19-4701-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.19.051

Analyzing Contents of Essential Oil and Linalool in Stems

and Leaves of Archis Hypogaea L. with GC-MS

ZU Xiao-yan， XIONG Guang-quan， LIAO Tao， QIAO Yu， LI Xin， GENG Sheng-rong

（Institute for Farm Products Processing and Nuclear-Agricultural Technology， Hubei Academy of Agricultural Sciences/Hubei Innovation Center of Agricultural Science and Technology/Hubei Engineering Research Center for Farm Products Irradiation，Wuhan 430064， China）

Abstract：Gas chromatography-mass spectrometry（GC-MS） was used to analyze the contents of essential oil and linalool in stem and leaf of Arachis hypogaea L. （AHSL）. The results showed that a total of 33 compounds were identified and the major components were 3，7-dimethyl-1，6-octadien-3-ol（linalool， 16.82%），N-hexadecanoic acid（17.07%）， and 1-octen-3-ol （decomposition product of linalool， 8.82%）， which could be separated from internal standard Compound. The calibration curves were linear in the range of 6.25～200.00 μg/mL（R2=0.999 7） for linalool. According to the peak area and standard curve， the linalool concentration was 10.415 mg/mL in petroleum ether， and 578.611 mg/kg in AHSL. The method can be applied in determing chemicals and linalool of essential oil from AHSL.

Key words：Arachis hypogaea L. stem and leaf； GC-MS； essential oil； linalool

落花生莖葉為豆科植物落花生屬落花生（Arachis hypogaea L.）的莖和葉，其莖高30～70 cm，匍匐或直立；雙數(shù)羽狀復(fù)葉互生，長(zhǎng)圓形至倒卵圓形，長(zhǎng)2.5～5.5 cm，寬1.4～3.0 cm。作為民間用中草藥，落花生莖葉始載于明《滇南本草》，其后《福建藥物志》和《浙江藥用植物志》都有相關(guān)功效的記載。1977年出版的《中藥大辭典》載有用落花生枝葉煎煮可治療失眠癥[1]，提示其具有促睡眠功能。多項(xiàng)研究表明，落花生莖葉具有清熱解毒、寧神降壓的功效[2-6]，是具有高價(jià)值轉(zhuǎn)化潛力的草藥。但其有效成分的化學(xué)物質(zhì)組成尚未有定論。

本研究通過(guò)同時(shí)蒸餾萃取獲得落花生莖葉揮發(fā)性成分，通過(guò)氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀分析其揮發(fā)性成分的化學(xué)組成，同時(shí)對(duì)文獻(xiàn)報(bào)道[7，8]的有鎮(zhèn)靜安神功效的芳樟醇的含量進(jìn)行了測(cè)定。建立了落花生莖葉揮發(fā)性成分和芳樟醇含量的測(cè)定方法，為相關(guān)研究奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

落花生莖葉采收于武漢市野芷湖周圍，采收后清洗、晾干、粉碎過(guò)40目備用。Aglient 7890AGC/5975MS（美國(guó)Agilent公司）；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。芳樟醇對(duì)照品（≥98%，上海源葉生物制品有限公司），環(huán)己酮、乙酸乙酯為色譜純（天津光復(fù)精細(xì)化工研究所），其他試劑為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 同時(shí)蒸餾萃取與供試品溶液的制備 取250 mL的圓底燒瓶1裝80 mL石油醚（60～90 ℃）作為低密度提取溶劑，另取500 mL圓底燒瓶2裝30 g花生莖葉粉末和220 mL蒸餾水置于高密度蒸餾器處。啟動(dòng)同時(shí)蒸餾萃取裝置循環(huán)提取5～6 h。另取2份30 g花生莖葉采用上述方法蒸餾提取有機(jī)相，合并于圓底燒瓶1中。得到的有機(jī)相過(guò)無(wú)水Na2SO4除去微量水，最終90 g花生莖葉共得到5 mL揮發(fā)油萃取液。萃取液過(guò)0.45 μm微孔濾膜后，備用。

1.2.2 內(nèi)標(biāo)液及芳樟醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 精密量取環(huán)己酮10 μL用乙酸乙酯定容至1 mL，得內(nèi)標(biāo)液濃度為10 mg/mL。10 μL芳樟醇對(duì)照品（20 mg/mL），用乙酸乙酯定容至1 mL，得200 μg/mL對(duì)照品溶液，稀釋成100.00、50.00、25.00、12.50、6.25 μg/mL梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，每管添加10 μL內(nèi)標(biāo)液。

1.2.3 GC-MS條件 氣相色譜條件：HP-5MS色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；載氣為He（99.999%），流速1 mL/min；進(jìn)樣口溫度為250 ℃； 升溫程序：初始溫度為80 ℃， 保持5 min， 以4 ℃/min升至280 ℃，保持5 min；分流方式進(jìn)樣，進(jìn)樣體積為1 μL，分流比為50∶1， 分流流速為50 mL/min。芳樟醇標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述方法測(cè)定并進(jìn)行相應(yīng)修改， 初始溫度為80 ℃，保持5 min，以4 ℃/min升至160 ℃。質(zhì)譜條件：接口溫度為280 ℃，離子源溫度為230 ℃，四級(jí)桿溫度為150 ℃； EI源，電子轟擊能量為70 eV；溶劑延遲時(shí)間為2.2 min，全掃描范圍為m/z 50～400。以NIST 08譜庫(kù)檢索定性，峰面積定量。

1.2.4 芳樟醇濃度計(jì)算 配制芳樟醇標(biāo)準(zhǔn)液，濃度分別為6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 μg/mL，按“1.2.3”方法測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積，落花生莖葉揮發(fā)油中的芳樟醇濃度通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到。

2 結(jié)果與分析

2.1 芳樟醇質(zhì)譜圖

通過(guò)NIST 08譜庫(kù)檢索出芳樟醇質(zhì)譜圖（圖1）。以相對(duì)強(qiáng)度較高的3個(gè)碎片離子峰的m/z值（71，93，55）與樣品進(jìn)行比對(duì)，鑒定待測(cè)樣品中的芳樟醇。

2.2 落花生莖葉揮發(fā)性成分的總離子流圖

圖2A顯示，芳樟醇標(biāo)準(zhǔn)溶液與內(nèi)標(biāo)溶液峰形良好，芳樟醇的保留時(shí)間為7.435 min。圖2B顯示各揮發(fā)性化學(xué)組分分離較好，拖尾峰通過(guò)谷底基點(diǎn)連線進(jìn)行自動(dòng)切割。各峰的數(shù)字與表1編號(hào)相對(duì)應(yīng)，可看出峰12（芳樟醇），峰4（1-辛烯-3-醇，芳樟醇的分解產(chǎn)物）的出峰強(qiáng)度較高。

2.3 花生莖葉揮發(fā)油的化學(xué)組分

表1結(jié)果表明，落花生莖葉揮發(fā)性油的主要成分為3，7-二甲基-1，6 -辛二烯-3-醇（芳樟醇，16.82%）、N-棕櫚酸（17.07%）、1-辛烯-3-醇（芳樟醇的分解產(chǎn)物，8.82%）、1，2，3-三甲基苯（6.82%）、葉綠醇（6.59%）、2-甲氧基-4-乙烯基苯酚（4.88%）、6，10，14-三甲基-2-十五烷酮（4.12%）、α--松油醇（3.95%）、1-乙基-2-甲基苯（3.89%）、順式-芳樟醇氧化物（3.68%）、1，3，5-三甲基苯（3.05%）和苯乙醛（2.93%），這12個(gè)組分共占總峰面積的82.62%。其他組分含量均小于2%。

芳樟醇標(biāo)準(zhǔn)溶液在6.25～200.00 μg/mL內(nèi)線性相關(guān)良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=2 926.4x-16 702.0，R2= 0.999 7，根據(jù)峰面積（表1），石油醚中的芳樟醇濃度為10.415 mg/mL，落花生莖葉中芳樟醇濃度為578.611 mg/kg。

3 小結(jié)與討論

3.1 萃取方法的選擇

同時(shí)蒸餾萃取作為一種新型前處理技術(shù)，蒸餾和提取同時(shí)進(jìn)行，只需要少量溶劑就可提取大量樣品，揮發(fā)性成分得到濃縮，萃取回收率較高，在連續(xù)萃取過(guò)程中，揮發(fā)性成分被濃縮，可把物料中的痕量揮發(fā)性成分分離出來(lái)[9-11]。同固相微萃取、頂空進(jìn)樣等相比，具有較高的萃取量，而且操作簡(jiǎn)便、定性定量效果好，是一種行之有效的前處理方法。此外，王方敏等[12]嘗試用冰浴超聲處理的方法來(lái)進(jìn)行萃取，發(fā)現(xiàn)該方法獲得的揮發(fā)性物質(zhì)極少，難以進(jìn)行檢測(cè)。因此采用水蒸氣蒸餾和有機(jī)溶劑萃取同步進(jìn)行的方法來(lái)獲得落花生莖葉揮發(fā)油。

3.2 萃取時(shí)低密度溶劑的選擇

在低密度溶劑的選擇上，選用乙酸乙酯[13]和石油醚（60～90 ℃）[12，14]進(jìn)行試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯對(duì)揮發(fā)性物質(zhì)的溶解效果較好，但由于其相對(duì)密度為0.90，比重接近水，導(dǎo)致冷凝時(shí)較難與水分離。因此本研究嘗試使用比重較輕的石油醚（相對(duì)密度為0.64～0.66），發(fā)現(xiàn)揮發(fā)性物質(zhì)在其中溶解良好，其與水分離良好，因此確定使用石油醚作為低密度提取溶劑。

3.3 色譜柱的選擇

在本研究前期嘗試用較長(zhǎng)的極性柱DB-WAX（60 cm×0.25 mm×0.25 μm）來(lái)分離落花生莖葉的揮發(fā)性成分，發(fā)現(xiàn)各峰雖然分離較好但出峰較晚，如芳樟醇在21.704 min出峰，使得測(cè)定時(shí)間內(nèi)后續(xù)組分出峰不完全。此外，極性柱的柱溫升高后基線上飄嚴(yán)重，降至220 ℃仍未能恢復(fù)正常，導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。又采用非極性柱HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果（圖2）顯示出峰時(shí)間緊湊、組分分離效果及峰形良好，因此選用HP-5MS色譜柱進(jìn)行落花生莖葉揮發(fā)性成分的分析。

該測(cè)定方法的建立為落花生莖葉揮發(fā)油中各組分的定性定量分析提供了依據(jù)。此外，對(duì)揮發(fā)油中一般化合物的定性分析上，可通過(guò)正構(gòu)烷烴的標(biāo)定，計(jì)算出各化合物在升溫程序下的保留指數(shù)，此工作會(huì)在進(jìn)一步的研究中加以完善。

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