李紅國,劉雙萍,崔銀姬,李柱虎
(延邊大學 醫(yī)學院 病理學教研部, 吉林 延吉 133002)
A.control group;B.experiment group in 48 hours(25 μmol/L);C.experiment group in 72 hours(25 μmol/L)
木脂素促進人胃癌MGC-803細胞凋亡
李紅國,劉雙萍,崔銀姬,李柱虎*
(延邊大學 醫(yī)學院 病理學教研部, 吉林 延吉 133002)
木脂素(lignans)是一類由苯丙素氧化聚合而成的天然產(chǎn)物,多以二聚體的形式存在,少數(shù)為三聚體和四聚體。木脂素類化合物具有廣泛的生物活性[1],如抗腫瘤、抗氧化、降壓、鎮(zhèn)靜和保肝等。
目前,木脂素對胃癌細胞抗增殖及機制方面的研究尚未見報道。因此,本實驗通過木脂素對胃癌細胞增殖的影響與Bax和Bcl-2等蛋白之間的相關性的研究,初步探討木脂素對胃癌細胞的抗增殖作用及其機制。
1.1 材料
1.1.1 細胞系:人胃癌MGC-803細胞系。
1.1.2 主要試劑:木脂素由延邊大學藥學院生藥學教研部提供(純度為99.9%,化學名稱為內(nèi)消旋二氫愈創(chuàng)木脂酸,meso-dihydroguaiaretic acid);Bax和Bcl-6單克隆抗體(Santa Cruz公司);Bcl-2單克隆抗體(碧云天生物技術研究所);ABC免疫組化檢測試劑盒(福州邁新生物技術開發(fā)有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 細胞生存率的檢測:取對數(shù)生長期細胞用于下列實驗,細胞數(shù)為3×104個/孔,采用MTT方法。細胞生存率(%) = 實驗組吸光值/對照組吸光值 ×100%。實驗重復進行3次。
1.2.2 檢測Bax、Bcl-2和Bcl-6蛋白的表達:用ABC免疫組化檢測試劑盒。實驗重復進行3次。Bax、Bcl-2和Bcl-6抗體的稀釋比例均為1∶50。免疫細胞化學染色結果判定根據(jù)Bax以胞質(zhì)呈棕褐色為陽性;Bcl-2和Bcl-6以胞核呈棕黃色為陽性。陽性表達率(%)=陽性細胞總數(shù)/總細胞數(shù)×100%。
1.2.3 細胞凋亡及細胞周期的檢測:采用流式細胞技術,實驗重復3次。
1.2.4 透射電鏡觀察:胃癌細胞的形態(tài)學變化。
2.1 細胞生存率的檢測結果:不同濃度的木脂素處理的MGC-803胃癌細胞的生存率呈濃度和時間依賴性降低(Plt;0.05)。其IC50值為24.8 μmol/L(表1)。
表1 不同濃度木脂素在不同時間段對MGC-803胃癌細胞存活率的影響
*Plt;0.05,**Plt;0.01 compared with control group.
2.2 免疫細胞化學的檢測結果
2.2.1 Bax、Bcl-2和Bcl-6蛋白的檢測結果(表2,圖1)。
2.2.2 細胞凋亡及細胞周期檢測結果:48和72 h對照組凋亡率分別為2.3%±0.4%和2.3%±0.4%,25 μmol/L濃度木脂素處理的實驗組凋亡率分別為15.5%±1.6%和19.8%±2.5%(Plt;0.01)。對照組G1期、G2期和S期細胞百分
A1.expression of Bax protein was weakly positive in control group;A2.expression of Bax protein was strong positive in experiment group;B1.expression of bcl-2 protein was strong positive in control group;B2.expression of Bcl-2 protein was weakly positive in experiment group;C1.expression of Bcl-6 protein was Strong positive in control group;C2.Expression of Bcl-6 protein was negative in experiment group
圖1 免疫細胞化學方法檢測MGC-803細胞Bax、Bcl-2和Bcl-6蛋白表達的影響
*Plt;0.01 compared with control group.
A.control group;B.experiment group in 48 hours(25 μmol/L);C.experiment group in 72 hours(25 μmol/L)
圖2流式細胞技術檢測細胞凋亡及細胞周期的影響
Fig2Detectedtheeffectofapoptosisandcellcyclebyflowcytometry(FCM)
比為54.4%、13.6% 和32.0%;實驗組48 h時為62.1%、8.0%和30.0%;72 h時為60.7%、12.5%和26.3%(圖2)。
2.2.3 透射電鏡觀察結果:實驗組MGC-803胃癌細胞形成凋亡小體,呈現(xiàn)出凋亡細胞典型的形態(tài)學改變(圖3)。
A.control group gastric carcinoma cell(×6 000);B.experiment group gastric carcinoma cell (×8 000)圖3 透射電鏡觀察胃癌細胞的形態(tài)學變化Fig 3 Observation on morphological changes of gastric cacinoma cells using a transmission electron microscope
木脂素在自然界分布廣泛,研究表明木脂素具有明顯的抗腫瘤作用[2]。木脂素對多種人腫瘤細胞具有促進細胞凋亡的作用。
本研究結果表明,木脂素對MGC-803胃癌細胞具有明顯的抗增殖作用,并具有濃度和時間依賴性。細胞凋亡率和細胞周期檢測結果,實驗組凋亡率與對照組相比有顯著性差異,說明,木脂素可促進胃癌細胞凋亡。同時,木脂素可下調(diào)Bcl-2和Bcl-6蛋白的表達,上調(diào)Bax蛋白的表達,表明木脂素通過Bcl-2/Bax蛋白及Bcl-6蛋白的調(diào)控來促進細胞凋亡。細胞周期檢測結果,實驗組G1期細胞百分比增多,而S期及G2期細胞百分比減少,說明,木脂素可阻止細胞從細胞周期G1期進入S期,從而抑制腫瘤細胞DNA合成,抑制腫瘤細胞的增殖。
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[2] Jeong JB, Hong SC, Jeong HJ,etal. Arctigenin induces cell cycle arrest by blocking the phosphorylation of Rb via the modulation of cell cycle regulatory proteins in human gastric cancer cells[J]. Int Immunopharmacol, 2011,11:1573-1577.
2013-07-21
2013-10-25
吉林省教育廳項目[吉教科合字(2009)第4號]
*通信作者(correspondingauthor): lizh@ybu.edu.cn
1001-6325(2014)05-0704-03
R 361+.1
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