抗IL-1β和TNF-αIgY抗體治療豚鼠過(guò)敏性支氣管哮喘的機(jī)制①

涂 威 向 勤 胡微煦 陳元宜 胡國(guó)柱 何 丹 文 珠

(江西省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院，南昌 330006)

抗原進(jìn)入致敏機(jī)體的呼吸道后刺激其釋放ATP和尿酸激活NLRP3炎癥復(fù)合體，裂解IL-1β原產(chǎn)生活性IL-1β，IL-1β再誘導(dǎo)多種炎癥因子產(chǎn)生并引起氣道炎癥，增加 TNF-α mRNA 在氣管中的表達(dá)［1，2］。然而抗TNF-α抗體、可溶性TNF-α受體及IL-1受體拮抗劑(IL-1ra)治療哮喘患者及OVA誘導(dǎo)的哮喘模型小鼠和大鼠的療效肯定［3-6］。本研究應(yīng)用抗IL-1β和TNF-α IgY抗體聯(lián)合霧化吸入治療OVA霧化吸入誘導(dǎo)的過(guò)敏性支氣管哮喘模型豚鼠，以期探討其局部治療過(guò)敏性支氣管哮喘的可能機(jī)制，開(kāi)辟一種新的治療方法和治療途徑。

1 材料與方法

1.1 材料 清潔級(jí)Hartly豚鼠68只，雄性，7周齡，(230±40)g［長(zhǎng)沙市開(kāi)福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部，生產(chǎn)許可證SCXK(湘)2009-0012］;抗IL-1β和TNF-α IgY抗體(本室制備，IgY純度85%，效價(jià)1∶3 200/mg蛋白)。使用重組人IL-1β和TNF-α免疫接種產(chǎn)蛋母雞，收集的雞蛋黃采用水稀釋法提取IgY，兩步硫酸銨鹽析法純化IgY，非還原性SDSPAGE測(cè)定IgY純度，免疫酶聯(lián)吸附法(ELISA)測(cè)定IgY特異性抗原結(jié)合效價(jià)。布地奈德混懸液(1 mg/2 ml，批號(hào) LOT 311385，澳大利亞 AstraZeneca Pty Ltd.);卵清白蛋白(OVA，ovalbumin GradeⅡ，批號(hào)A5253，美國(guó) SIGMA 公司);抗豚鼠 IL-1β、IL-4、IL-6、IL-13(批號(hào)1106101)、IL-8(批號(hào) 1106121)、IL-16(批號(hào) 1106102)、TNF-α(批號(hào) 1105261)、TGF-β1(批號(hào)1105221)、IgE(批號(hào)1105205)等 ELISA試劑盒(上海西塘生物科技有限公司)。超聲波霧化吸入器(JSC-202型，遼寧省鞍山市醫(yī)療器械廠);酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀(Multiskan Ascent型，美國(guó)熱電公司)。

1.2 方法

1.2.1 過(guò)敏性支氣管哮喘豚鼠模型的建立及實(shí)驗(yàn)分組 過(guò)敏性支氣管哮喘豚鼠模型的建立參照文獻(xiàn)［7］。豚鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后將其按隨機(jī)數(shù)字表法分為:對(duì)照組(C組)15只，模型組(M組)19只豚鼠，1.0%抗TNF-α和IL-1β IgY多克隆抗體治療組(Z1組)18只，布地奈德混懸液治療組(Z2組)16只豚鼠。簡(jiǎn)言之，正常對(duì)照組(C組)15只，基礎(chǔ)致敏階段(第1、3、5、7日)霧化吸入 0.9%生理鹽水，20 ml/10 min/10只豚鼠/次，連續(xù)霧化4次;加強(qiáng)免疫階段(攻擊)(第15至第25日)霧化吸入0.9%生理鹽水，20 ml/10 min/10只豚鼠/次，連續(xù)霧化11次。過(guò)敏性支氣管哮喘模型建立:90只豚鼠隔日(第1、3、5、7日)霧化吸入1.0%OVA生理鹽水溶液，20 ml/10 min/10只豚鼠/次在霧化箱內(nèi)超聲霧化，連續(xù)霧化4次作為基礎(chǔ)致敏，豚鼠致敏30 min內(nèi)出現(xiàn)抓鼻、噴嚏、咳嗽、呼吸加快、口唇紫紺，死亡的豚鼠突然氣絕倒斃或四肢抽搐后死亡，其中致敏階段死亡豚鼠9只;將81只豚鼠經(jīng)背部皮內(nèi)注射25 μl的200 μg/ml卵白蛋白生理鹽水(0.02%OVA)，20～40 min后注射部位出現(xiàn)紅斑和水腫直徑大于1.0 mm的皮丘為致敏成功，其中3只豚鼠致敏不成功(占3.70%);剩余78只豚鼠休息一周又死亡6只;72只豚鼠第15天開(kāi)始加強(qiáng)免疫(攻擊)(第15至第25日)，每天霧化吸入1.5%OVA生理鹽水溶液，20 ml/10 min/10只豚鼠/次在霧化箱內(nèi)超聲霧化，霧化攻擊6次(第15天至第20天)后又死亡15只豚鼠，將剩余57只豚鼠隨機(jī)分成:模型組(M組)(21只)，第21至第25天先霧化吸入1.5%OVA生理鹽水溶液，20 ml/10 min/10只豚鼠/次在霧化箱內(nèi)超聲霧化，然后即刻霧化吸入0.9%生理鹽水，20 ml/10 min/10只豚鼠/次;1.0%抗 TNF-α和 IL-1β IgY多克隆抗體治療組(Z1組)(18只)，第21至第25天先霧化吸入1.5%OVA生理鹽水溶液，20 ml/10 min/10只豚鼠/次在霧化箱內(nèi)超聲霧化，然后即刻霧化吸入1.0%抗TNF-α和IL-1β IgY多克隆抗體溶液，20 ml/10 min/10只豚鼠/次在霧化箱內(nèi)超聲霧化;布地奈德混懸液模型豚鼠治療組(Z2組)(18只)，第21至第25天先霧化吸入1.5%OVA生理鹽水溶液，20 ml/10 min/10只豚鼠/次在霧化箱內(nèi)超聲霧化，然后即刻霧化吸入布地奈德混懸液(1 mg/2 ml)，20 ml/10 min/10只豚鼠/次在霧化箱內(nèi)超聲霧化。最后5 d治療期間M組和Z2組分別死亡2只豚鼠，因此造模成功率為96.67%(87只/90只，死亡豚鼠屬于過(guò)敏反應(yīng)死亡)，豚鼠造模死亡率為39.08%(34只/87只)。所有4組豚鼠于末次治療結(jié)束后(第 25 天)的 2、4、8、24 h、4 個(gè)時(shí)間點(diǎn)被腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛麻醉，行心臟穿刺取血、支氣管肺泡灌洗及收集BALF。

1.2.2 血漿和支氣管肺泡灌洗及灌洗液采集 豚鼠采用10%水合氯醛(2 ml)腹腔內(nèi)注射麻醉，胸部剖開(kāi)暴露心臟穿刺取血5～8 ml置EDTA抗凝管中，然后血液涂片染色進(jìn)行白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)，離心2 000 r/min×10 min取血漿置于－80℃保存。取血后心臟注射空氣處死豚鼠，暴露氣管，在氣管正中做“T”形小切口，插入灌洗針頭并結(jié)扎，向氣管內(nèi)注入生理鹽水2.0 ml反復(fù)抽吸并將灌洗液抽出，以1 000 r/min×10 min離心取上清，放置－80℃保存。

1.2.3 細(xì)胞染色 將血液細(xì)胞滴加于玻片上推片，室溫晾干，滴加美藍(lán)固定及染色1～2 min，再滴加伊紅染色10 min，蒸餾水沖洗，室溫晾干;高倍鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞以上，分類(lèi)計(jì)數(shù)。

1.2.4 血漿及支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞因子測(cè)定采用雙抗夾心ELISA法測(cè)定血漿和BALF上清中IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE等，操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出各細(xì)胞因子的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)采用表示。對(duì)各組不同時(shí)間之間先進(jìn)行χ2正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)，若符合正態(tài)分布和方差齊性，則采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩組間比較再采用LSD檢驗(yàn)。若方差不齊兩組之間比較采用Dunnett T3檢驗(yàn)。相關(guān)性檢驗(yàn)使用Pearson方法。取P＜0.05表示差異有顯著性。

2 結(jié)果

2.1 血液中炎癥細(xì)胞含量變化 霧化吸入OVA引起的豚鼠(M組)過(guò)敏性支氣管哮喘炎癥在血液中的表現(xiàn)以嗜酸性粒細(xì)胞增多為主，其中2 h升高最為顯著，持續(xù)24 h。然而霧化吸入1.0%抗IL-1β和TNF-α IgY(Z1組)在2～8 h，以及激素藥物布地奈德混懸液(Z2組)在2、24 h降低血液中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量。見(jiàn)表1。

表1 各組豚鼠血液中嗜酸性粒細(xì)胞比較(，%)Tab.1 Comparison of eosinophils in peripheral blood during different groups(，%)

表1 各組豚鼠血液中嗜酸性粒細(xì)胞比較(，%)Tab.1 Comparison of eosinophils in peripheral blood during different groups(，%)

Note:n.Numbers of guinea pig;1)comparation with group C，P ＜0.05;2)comparation with group M，P＜0.05.

Groups 2 h(n) 4 h(n) 8 h(n) 24 h(n)C 1.08±0.27(3)0.75±0.37(4)0.83±0.42(4)1.07±0.96(4)M 8.19±1.881)(5)2.36±0.371)(5)3.13±0.631)(5)2.31±1.321)(4)Z1 2.87±1.472)(4)0.74±0.932)(4)1.63±1.512)(5)1.19±0.87(5)Z2 1.63±0.522)(4)1.70±0.80(4)2.40±0.46(4)0.79±0.292)(4)

2.2 血漿及BALF中炎癥細(xì)胞因子含量變化

2.2.1 血漿中炎癥細(xì)胞因子含量變化 霧化吸入OVA的過(guò)敏性哮喘豚鼠(M組)血漿中炎癥因子僅僅是 IL-16 在 2、4、24 h，TNF-α 在 24 h，TGF-β1 在4、8、24 h顯著高于 C 組。而 IL-1β 在Z1 組4、24 h，IL-16 在 Z1 組2、4、24 h，TGF-β1 在 Z1 組4、8、24 h，以及IgE在Z1組24 h等顯著低于M組(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

表2 血漿中炎癥因子含量變化()Tab.2 Content variation of inflammatory cytokines in plasma()

表2 血漿中炎癥因子含量變化()Tab.2 Content variation of inflammatory cytokines in plasma()

Note:n.Numbers of guinea pig;1)comparation with group C，P ＜0.05;2)comparation with group M，P ＜0.05;3)comparation with group Z1，P＜0.05.

TimeGroups n IL-1β(pg/ml)IL-4(pg/ml)IL-6(pg/ml)IL-8(pg/ml)IL-13(pg/ml)IL-16(pg/ml)TNF-α(pg/ml)TGF-β1(pg/ml)IgE(ng/ml)147.27±199.50 211.43±14.35 M 4 18.97±2.53 137.23±23.33 4.61±3.00 41.69±11.80 19.64±6.05 27.33±5.44 1)281.35±14.92 13 996.66±265.49 237.52±27.32 Z1 4 62.34±87.26 205.16±58.28 4.81±1.93 56.53±15.24 7.50±1.66 17.75±4.582)264.68±11.68 14 417.57±5 202.91 278.24±21.21 Z2 4 53.27±19.28 466.52±428.81 4.71±2.22 86.52±57.84 17.59±18.8453.26±9.001)2)3)436.73±349.72 9 225.42±1 076.43 198.59±25.52 4 h C 4 14.70±1.45 319.45±232.62 4.11±2.71 60.52±36.91 19.59±23.46 12.24±3.21 340.19±246.06 11 194.94±10 29.68 262.98±102.79 M 4 18.29±2.07 125.14±26.01 4.62±1.31 40.12±8.43 8.64±1.81 27.85±3.871)272.72±13.65 14 413.86±332.581)268.92±39.34 Z1 4 8.74±1.921)2)246.76±131.04 3.66±1.01 33.82±9.15 7.55±1.11 8.50±2.152) 351.48±174.38 12 193.71±191.042)252.84±48.39 Z2 4 16.24±1.90 209.32±53.11 3.41±3.06 39.93±8.20 6.04±5.89 17.03±2.342)3)248.42±25.8113 969.72±1195.781)2)240.30±22.79 8 h C 4 12.73±5.06 202.78±32.81 1.96±1.95 41.95±17.40 9.81±5.31 21.21±17.60 213.48±26.41 10 914.63±688.72 252.13±62.09 M 4 17.28±2.32 126.40±18.381)4.17±2.01 41.10±18.66 9.33±2.43 29.84±5.47 274.58±23.99 14 259.20±240.671)263.94±32.95 Z1 4 14.91±6.93 131.79±29.26 2.77±1.98 36.92±10.71 9.23±3.71 25.67±12.27 228.89±67.45 10 077.51±890.042)364.63±129.12 Z2 4 6.95±4.971)151.76±88.58 1.04±1.162)37.94±17.68 4.55±1.85 22.10±11.03 160.55±71.402)8588.33±1037.981)2)3)142.52±76.492)24 h C 4 18.29±6.77 244.23±79.69 2.54±1.59 53.82±24.73 14.76±1.95 12.73±4.35 255.20±57.23 10 219.84±419.73 219.05±25.46 M 4 19.02±1.18 124.31±25.31 4.36±1.31 40.47±11.57 12.17±4.29 28.24±4.161)271.78±18.101)14 638.11±274.871)256.13±18.66 Z1 4 11.22±3.121)2)168.37±75.03 1.74±0.92 31.95±16.54 8.59±3.13 12.91±2.652)254.13±32.14 6 970.94±2723.032)170.85±29.101)2)Z2 4 13.10±4.70 274.19±102.29 2.46±1.45 53.96±18.51 10.75±1.49 14.24±3.462)444.58±365.40 7 889.74±933.661)126.71±52.021)2)2 h C 3 14.37±2.24 173.35±26.25 2.92±2.68 45.64±8.10 8.97±2.89 11.88±5.65 214.65±13.83 10

2.2.2 BALF中炎癥細(xì)胞因子含量變化 霧化吸入OVA的過(guò)敏性哮喘豚鼠(M組)BALF中炎癥因子 IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE在2～24 h期間較C組顯著增加(P＜0.05)。僅僅是IL-1β和TNF-α在 Z1組2～8 h顯著低于M 組(P ＜0.05)。然而IL-4、IL-6、IL-8、IL-13在Z1組4～24 h，TGF-β 和 IgE 在 Z1組4～8 h，IL-16在 Z1組8 h等顯著低于M組(P＜0.05)見(jiàn)表3。BALF中炎癥因子有意義地變化是IL-1β和TNF-α首先降低，然后是其他因子下降，這表明過(guò)敏性炎癥反應(yīng)中IL-1β和TNF-α可能是始動(dòng)因子。

表3 支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子含量變化()Tab.3 Content variation of inflammatory cytokines in bronchoalveolar lavage fluid()

表3 支氣管肺泡灌洗液中炎癥因子含量變化()Tab.3 Content variation of inflammatory cytokines in bronchoalveolar lavage fluid()

Note:n:Numbers of guinea pig;1)comparation with group C，P ＜0.05;2)comparation with group M，P ＜0.05;3)comparation with group Z1，P＜0.05.

Time Group n IL-1β(pg/ml)IL-4(pg/ml)IL-6(pg/ml)IL-8(pg/ml)IL-13(pg/ml)IL-16(pg/ml)TNF-α(pg/ml)TGF-β1(pg/ml)IgE(ng/ml)±21.27 6.06±1.01 M 4 6.35±0.801)51.62±3.171)5.30±1.94 47.07±6.331)4.76±0.651)60.61±9.731) 65.13±1.301) 1 348.39±29.48 11.52±1.031)Z1 4 4.82±0.601)2)54.92±7.381)4.12±1.29 46.26±4.651)5.37±0.761)66.42±18.181)57.20±3.312) 1 365.39±60.531) 11.52±2.441)Z2 4 4.45±0.881)2)41.10±2.821)2)3)3.13±0.88 38.19±9.031)4.52±0.371)3)53.47±17.68 71.67±7.371)3)1 268.70±67.372) 10.51±0.671)4 h C 3 3.05±0.06 33.03±2.80 3.44±0.63 25.24±5.41 3.17±0.82 34.23±6.58 57.39±2.86 1 251.79±25.55 6.06±0.80 M 4 6.56±1.061)56.20±2.651)5.35±0.871)48.72±9.331)4.82±0.691)63.29±6.151) 63.30±3.04 1 365.28±31.171) 11.20±0.551)Z1 4 2.32±0.852)35.38±4.442)3.66±0.862)25.54±4.222)3.45±0.782)48.28±18.08 56.70±3.242) 1 208.34±11.892) 9.30±1.121)2)Z2 4 3.37±0.701)30.15±6.652)2.93±0.912)28.69±6.722)3)3.05±0.472)33.52±7.562) 48.34±3.662) 1 280.78±88.68 8.06±0.901)2)8 h C 4 3.64±0.93 34.47±5.56 3.17±9.86 24.26±5.58 3.24±0.23 31.70±8.31 51.61±3.04 1 232.46±43.24 6.63±1.06 M 4 6.28±0.661)50.16±4.281)5.18±0.911)48.72±8.301)4.49±0.551)58.60±3.871) 67.96±2.011) 1 329.07±33.711) 10.47±0.791)Z1 4 3.17±0.562)30.00±4.322)2.82±1.022)27.70±3.232)2.65±0.472)28.45±4.172)55.13±10.602)1 191.43±71.252) 7.32±1.102)Z2 4 1.28±0.651)2)3)29.49±2.572)1.65±0.841)2)22.31±6.682)2.58±0.371)2)30.39±10.352)54.44±9.572) 1 167.29±25.992) 7.02±1.382)24 h C 4 3.49±0.90 36.12±4.02 3.88±0.85 27.87±6.79 3.34±0.59 32.44±7.02 53.87±2.89 1 300.09±138.13 6.59±0.86 M 4 6.51±0.651)52.28±4.281)5.18±1.211)46.56±6.081)4.51±0.661)53.49±6.561) 61.74±4.671) 1 367.70±68.26 11.11±1.101)Z1 3 6.12±1.651)39.09±11.062)2.58±0.681)2)35.73±5.442)3.01±0.872)45.83±22.03 63.62±6.211) 1 416.00±303.08 9.46±1.971)Z2 4 3.75±0.972)3)37.44±11.032)3.23±0.761)2)32.63±7.572)2.46±0.492)3)35.91±4.552)70.54±5.691)2)3)1 191.44±14.492) 7.73±0.882)2 h C 3 3.16±0.79 32.35±3.67 3.54±1.38 27.37±3.63 3.15±0.21 39.46±5.26 56.72±2.80 1 280.77

2.3 血漿及BALF中炎癥細(xì)胞因子相關(guān)性 在血漿中 IL-1β 與 IL-4、IL-8、IL-16、TNF-α 等呈正相關(guān)(P ＜ 0.05)，以及 TNF-α 與 IL-6、IL-16、TGF-β、IgE等呈正相關(guān)(P＜0.05)。在BALF中，IL-1β與IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE 等呈正相關(guān)(P ＜0.05)，以及 TNF-α 與 IL-1β、IL-4、IL-8、IL-13、IL-16、IgE 等呈正相關(guān)(P ＜0.05)。

3 討論

豚鼠經(jīng)OVA致敏4次平滑肌收縮不斷增強(qiáng)，攻擊1小時(shí)BALF中嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞增加，直至24 h增加 3～44倍;TNF-α、IL-4、IL-5也增加［8-10］。我們現(xiàn)在與以往的研究［7］都證明霧化吸入OVA致敏和攻擊的豚鼠出現(xiàn)典型的過(guò)敏性病理反應(yīng)，并且現(xiàn)在也證明血液嗜酸性粒細(xì)胞增加，以及血液和BALF中Th2細(xì)胞因子及炎癥因子升高。OVA誘導(dǎo)的哮喘模型大鼠血清IgE濃度升高，而每次激發(fā)之前30 min靜脈注射 IL-1ra使之顯著降低［6］。本文霧化吸入OVA致敏和攻擊的豚鼠血液中以嗜酸性粒細(xì)胞顯著增加為主，但在霧化吸入1.0%抗IL-1β和TNF-α IgY治療后在2～8 h明顯降低，且與布地奈德激素治療組無(wú)顯著性差異(見(jiàn)表1)。本文過(guò)敏性哮喘豚鼠血液中 IL-16、TNF-α、TGF-β 在不同時(shí)間點(diǎn)顯著高于正常對(duì)照組，然而經(jīng)1.0%抗IL-1β 和 TNF-α IgY 治療后 IL-1β、IL-16、TGF-β 和IgE等在不同時(shí)間點(diǎn)顯著低于M組，且與布地奈德激素治療組相似(見(jiàn)表2)。本文豚鼠模型為霧化吸入OVA致敏和攻擊模型，氣道和肺泡等肺組織以局部過(guò)敏反應(yīng)為主，這可能更符合吸入性過(guò)敏反應(yīng)的患者的實(shí)際情況，因此豚鼠血液中炎癥細(xì)胞數(shù)量和炎癥細(xì)胞因子變化較其他學(xué)者采用的皮下或腹腔注射OVA全身過(guò)敏性反應(yīng)模型不同，后者血液中炎癥細(xì)胞數(shù)量和炎癥細(xì)胞因子變化更為顯著。

OVA致敏/攻擊的豚鼠 BALF中 TNF-α、IL-4、IL-5和嗜酸性粒細(xì)胞升高［8］，攻擊1 h嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞就增加，24 h嗜酸性粒細(xì)胞增加3～44倍，而中性粒細(xì)胞下降至正常［9］。布地奈德吸入均可抑制OVA致敏/攻擊的豚鼠BALF中嗜酸性粒細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，以及 TNF-α、IL-4、IL-5的增加［9］。OVA致敏/攻擊的小鼠靜脈注射抗TNF-α抗體(Infliximab)后BALF中嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、TNF-α、IL-6 減少［3］，而腹腔注射可溶性 TNF 受體(sTNFR)也減少了BALF中嗜酸性粒細(xì)胞、IL-4、IL-5、IL-13［4］。OVA 攻擊大鼠前 30min 靜脈注射IL-I受體拮抗劑(IL-1ra)其BALF中嗜酸性粒細(xì)胞百分比下降［6］。本文豚鼠霧化吸入OVA后BALF中 IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE在2～24 h期間顯著增加(M組)，但有趣的是1.0%抗IL-1β和TNF-α IgY抗體霧化吸入治療后BALF中炎癥因子IL-1β和TNF-α首先下降(2 h)，而其他Th2細(xì)胞因子和炎癥因子，如IL-4、IL-6、IL-8、IL-13 則在4～ 24 h，TGF-β、IgE 在4～8 h，IL-16在8 h期間顯著下降;當(dāng)IL-1β和TNF-α在24 h上升時(shí)，而 IL-4、IL-6、IL-8、IL-13在24 h仍顯著下降;并且 IL-1β 與 IL-4、IL-6、IL-8、IL-13、IL-16、TNF-α、TGF-β1、IgE，以及 TNF-α 與 IL-1β、IL-4、IL-8、IL-13、IL-16、IgE等呈正相關(guān)。這一現(xiàn)象初步證明IL-1β和TNF-α是過(guò)敏性哮喘免疫效應(yīng)階段炎癥發(fā)生、發(fā)展的始動(dòng)炎癥因子。其他學(xué)者的研究也證明IL-1β加入氣管培養(yǎng)中刺激氣管上皮細(xì)胞表達(dá)IL-1R1和TNFR1及平滑肌細(xì)胞表達(dá)TNFR1增加，并仍可刺激氣管上皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞本不表達(dá)的TNFR2表達(dá)［11］。IL-1β 增加 TNF-α mRNA 在氣管中的表達(dá)，而抗TNF-α抗體顯著抑制了IL-1β誘導(dǎo)的緩激肽B1和B2受體在氣道平滑肌上表達(dá)［3］，這也證明IL-1β可能在炎癥發(fā)展過(guò)程中出現(xiàn)在TNF-α之前。

本研究還證明抗IL-1β和TNF-α IgY霧化吸入治療OVA誘導(dǎo)的過(guò)敏性哮喘豚鼠的療效與布地奈德治療無(wú)顯著差異(見(jiàn)表1～3)。這一結(jié)論可能有利于抗IL-1β和TNF-α IgY霧化吸入治療過(guò)敏性哮喘患者，因?yàn)樘禺愋訧gY被動(dòng)免疫治療可以達(dá)到良好的局部治療的效果，同時(shí)不引起像激素治療所產(chǎn)生的全身不良反應(yīng)等毒副作用。事實(shí)上，一項(xiàng)長(zhǎng)達(dá)十年的特異性抗綠膿桿菌IgY口服預(yù)防肺囊性纖維化患者綠膿桿菌感染的試驗(yàn)證明，IgY治療未見(jiàn)毒副作用，且療效明確［12］。本研究還提示，抗 IL-1β和TNF-α IgY抗體霧化吸入局部治療可能是一種新的有效治療過(guò)敏性哮喘的手段和途徑。

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