蝴蝶蘭花梗離體培養(yǎng)中褐變的控制研究

黃靖

摘 要：該文以蝴蝶蘭花后帶腋芽花梗節(jié)為外植體，比較了附加不同激素的MS培養(yǎng)基以及不同培養(yǎng)條件對(duì)控制外植體褐變的影響。結(jié)果表明，采用1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁的配方對(duì)控制花梗褐變及誘導(dǎo)叢生芽效果最為顯著。

關(guān)鍵詞：蝴蝶蘭；花梗；離體培養(yǎng)；褐變；控制

中圖分類(lèi)號(hào) S68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）21-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）屬蘭科植物，因其風(fēng)姿綽約、體態(tài)輕盈、花色秀麗、氣質(zhì)飄逸，被譽(yù)為“洋蘭王后”，其原生種的花色因種類(lèi)不同而有較大的變化。由于蝴蝶蘭的種子在自然條件下發(fā)芽率極低，很難利用種子播種的方式來(lái)進(jìn)行有性繁殖，而且由于蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，在植株上少有側(cè)枝，也難以采用常規(guī)分株法進(jìn)行無(wú)性繁殖。因此，采用離體快速繁殖技術(shù)，對(duì)于擴(kuò)大蝴蝶蘭的繁殖是非常必要的，利用花梗離體培養(yǎng)是當(dāng)前蝴蝶蘭快速繁殖的主要途徑。但蝴蝶蘭在組培快繁生產(chǎn)中存在著極易褐變夭折的問(wèn)題，褐化直接影響蝴蝶蘭離體培養(yǎng)的正常進(jìn)行，包括芽的萌發(fā)和增殖效果，生長(zhǎng)緩慢，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)材料死亡。為此，筆者針對(duì)蝴蝶蘭花梗腋芽離體快繁褐變問(wèn)題進(jìn)行了相關(guān)試驗(yàn)研究，以期為蝴蝶蘭工廠(chǎng)化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 蝴蝶蘭選用V31品種，福建新世景園藝有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)用藥品均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法 選取健壯無(wú)病蟲(chóng)害的蝴蝶蘭花梗，剝除花朵和花蕾后將花柄清凈，用解剖刀切成2～4cm段，每段帶一個(gè)腋芽。流水沖洗0.5h后用75%酒精浸泡30s，然后用無(wú)菌水沖洗干凈，在超凈工作臺(tái)上用0.1%HgCl2溶液浸泡16min，取出后用無(wú)菌水沖洗5～8次，無(wú)菌濾紙吸干用解剖刀切除外植體頂部與基部各0.5～1cm部分，形成1～2cm長(zhǎng)莖段，每瓶接種一個(gè)外植體。然后以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養(yǎng)基，激素采用NAA與BA，另添加椰子汁、抗壞血酸、活性炭等物質(zhì)，進(jìn)行蝴蝶蘭離體培養(yǎng)。在光照培養(yǎng)室溫度為25℃，光照強(qiáng)度2 000lx，光照時(shí)間12h/d的條件下誘導(dǎo)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)花梗褐變的影響 將基本培養(yǎng)基分別設(shè)置為MS、1/2MS、1/4MS，各培養(yǎng)基均加BA3.0mg/L，接種后每10d進(jìn)行觀(guān)察，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表1。外植體接種10d后，各處理的莖段開(kāi)始萌動(dòng)，以后陸續(xù)萌芽，長(zhǎng)出芽苗。MS培養(yǎng)基處理首先出現(xiàn)褐變，20d后1/2MS培養(yǎng)基處理也開(kāi)始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象；一個(gè)月后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)觀(guān)察，1/2MS培養(yǎng)基處理的外植體萌芽率最高，1/4MS培養(yǎng)基處理的外植體褐變程度最輕；60d后觀(guān)察，1/4MS培養(yǎng)基處理的腋芽生長(zhǎng)狀態(tài)較差。因此，生產(chǎn)上應(yīng)選擇1/2MS培養(yǎng)基或適時(shí)更換培養(yǎng)基，以防止無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)缺乏。

2.2 不同激素配比對(duì)花梗褐變的影響 以蝴蝶蘭帶腋芽花梗節(jié)為外植體，以l/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA和NAA，每瓶接種1個(gè)外植體，接種培養(yǎng)10d后開(kāi)始觀(guān)察，培養(yǎng)一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，培養(yǎng)基中不含外源激素時(shí)，培養(yǎng)30d后也有少量花梗腋芽萌發(fā)，但培養(yǎng)基褐化現(xiàn)象較重（43.3%）；在培養(yǎng)基中添加BA 3.0mg/L時(shí)，蝴蝶蘭花梗腋芽萌芽數(shù)最高（83個(gè)），繼續(xù)添加BA 5.0mg/L萌芽數(shù)有所降低（57個(gè)），褐變現(xiàn)象最為嚴(yán)重（73.3%）；在BA 3.0mg/L的基礎(chǔ)上添加NAA，BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L的激素配比，萌芽數(shù)及褐變率都在最優(yōu)范圍內(nèi)，分別為79個(gè)和26.7%。

2.3 不同添加物對(duì)花梗褐變的影響 椰子汁是一種天然的復(fù)合有機(jī)物，含有豐富的氨基酸、礦物質(zhì)、維生素和碳水化合物等，這些物質(zhì)具有促進(jìn)培養(yǎng)物的生長(zhǎng)，提高存活率，減少褐化死亡現(xiàn)象的作用?？箟难崾侵参锝M織培養(yǎng)中常用的抗褐變劑，其對(duì)外植體褐變的抑制多有報(bào)道?；钚蕴烤哂休^強(qiáng)的吸附能力，對(duì)抑制褐變起重要作用。本試驗(yàn)以1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別添加5%椰子汁、10%椰子汁、50mg/LVC、100mg/LVC、500mg/L活性炭、2 000mg/L活性炭等，與未添加上達(dá)物質(zhì)的培養(yǎng)一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可知，附加活性炭的培養(yǎng)基能明顯抑制外植體褐變產(chǎn)生，但是由于活性炭不但對(duì)培養(yǎng)基中的醌類(lèi)化合物有吸附作用，同時(shí)也吸附了部分分裂素、生長(zhǎng)素、維生素等相關(guān)成分，在抑制褐化的同時(shí)也嚴(yán)重影響到芽的萌發(fā)和增殖效果；而添加10%的椰子汁或100mg/L抗壞血酸的培養(yǎng)基，均能有效抑制褐變，從萌芽效果看，添加椰子汁的培養(yǎng)基效果較添加抗壞血酸的優(yōu)。

2.4 不同培養(yǎng)條件對(duì)花梗褐變及生長(zhǎng)的影響 將接種于1/2MS+BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L培養(yǎng)基上的蝴蝶蘭花梗節(jié)放置于不同溫度及不同光照的培養(yǎng)環(huán)境內(nèi)，比較其褐變及生長(zhǎng)情況，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，蝴蝶蘭花梗節(jié)培養(yǎng)過(guò)程中溫度應(yīng)比較恒定，若溫度過(guò)低，形成原球莖叢生芽所需時(shí)間較長(zhǎng)，生長(zhǎng)緩慢，若溫度過(guò)高，則容易造成污染褐變率也上升；同樣，暗培養(yǎng)對(duì)控制褐變有顯著效果，但由于缺乏光照，材料生長(zhǎng)緩慢，在暗培養(yǎng)一定時(shí)間后應(yīng)移至常規(guī)光照條件下放置。

3 結(jié)論與討論

國(guó)內(nèi)外蝴蝶蘭離體快繁以莖尖為外植體的研究較多，盡管莖尖容易脫分化并再分化成完整植株，但由于蝴蝶蘭為單莖性植物，摘取莖尖就會(huì)犧牲母株，造成不必要的浪費(fèi)。因此，在實(shí)際的生產(chǎn)中，現(xiàn)階段代替蝴蝶蘭莖尖培養(yǎng)的方法是利用蝴蝶蘭的花梗作為外植體進(jìn)行培養(yǎng)，其花梗通常只有4～5個(gè)腋芽，腋芽啟動(dòng)培養(yǎng)的效果直接關(guān)系到增殖培養(yǎng)時(shí)無(wú)菌材料的多少，從而影響花?？焖俜敝车男?。以蝴蝶蘭花梗為材料建立蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖體系，比采用根尖、莖尖和種子進(jìn)行蝴蝶蘭的快速無(wú)性繁殖更具有應(yīng)用價(jià)值。蘭科植物在外植體誘導(dǎo)和原球莖分化培養(yǎng)時(shí)都存在褐變死亡的問(wèn)題，因而減輕或控制褐變發(fā)生是蘭科植物組織培養(yǎng)研究的重要內(nèi)容。

本研究針對(duì)蝴蝶蘭組培褐變問(wèn)題進(jìn)行了試驗(yàn)研究，嘗試探尋蝴蝶蘭花梗腋芽培養(yǎng)過(guò)程中有效控制褐變的方法。試驗(yàn)表明：適當(dāng)降低無(wú)機(jī)離子濃度，有利于降低外植體褐變率；恰當(dāng)?shù)募?xì)胞分裂素BA與生長(zhǎng)素NAA配比，在控制褐變及誘導(dǎo)叢生芽上有增效作用；添加一定劑量的椰子汁、抗壞血酸、活性炭等均可減輕褐變，但活性炭對(duì)外源激素的吸附較大；在培養(yǎng)環(huán)境上，短期暗培養(yǎng)有利于減輕外植體的褐變，低溫雖然也能降低褐變率，但由于此條件下試驗(yàn)材料生長(zhǎng)緩慢，對(duì)于工廠(chǎng)化育苗意義不大。

參考文獻(xiàn)

[1]曾都華，郁培義，陳偉玉，等.“滿(mǎn)天紅”蝴蝶蘭花梗組培快繁技術(shù)研究[J].熱帶林業(yè)，2014，42（1）：46-49.

[2]王玲，陳發(fā)棣，陳鳳，等.不同培養(yǎng)基及添加物對(duì)蝴蝶蘭花梗芽壯苗生根的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（5）：134-136.

[3]印芳，彭克勤，葛紅，等.礦質(zhì)元素對(duì)蝴蝶蘭組培褐變的影響[J].北方園藝，2006（6）：137-139.

[4]張凡凡.蝴蝶蘭組培快繁中褐變問(wèn)題的研究進(jìn)展[J].探索，2010（5）：362. （責(zé)編：張宏民）endprint

摘 要：該文以蝴蝶蘭花后帶腋芽花梗節(jié)為外植體，比較了附加不同激素的MS培養(yǎng)基以及不同培養(yǎng)條件對(duì)控制外植體褐變的影響。結(jié)果表明，采用1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁的配方對(duì)控制花梗褐變及誘導(dǎo)叢生芽效果最為顯著。

關(guān)鍵詞：蝴蝶蘭；花梗；離體培養(yǎng)；褐變；控制

中圖分類(lèi)號(hào) S68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）21-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）屬蘭科植物，因其風(fēng)姿綽約、體態(tài)輕盈、花色秀麗、氣質(zhì)飄逸，被譽(yù)為“洋蘭王后”，其原生種的花色因種類(lèi)不同而有較大的變化。由于蝴蝶蘭的種子在自然條件下發(fā)芽率極低，很難利用種子播種的方式來(lái)進(jìn)行有性繁殖，而且由于蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，在植株上少有側(cè)枝，也難以采用常規(guī)分株法進(jìn)行無(wú)性繁殖。因此，采用離體快速繁殖技術(shù)，對(duì)于擴(kuò)大蝴蝶蘭的繁殖是非常必要的，利用花梗離體培養(yǎng)是當(dāng)前蝴蝶蘭快速繁殖的主要途徑。但蝴蝶蘭在組培快繁生產(chǎn)中存在著極易褐變夭折的問(wèn)題，褐化直接影響蝴蝶蘭離體培養(yǎng)的正常進(jìn)行，包括芽的萌發(fā)和增殖效果，生長(zhǎng)緩慢，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)材料死亡。為此，筆者針對(duì)蝴蝶蘭花梗腋芽離體快繁褐變問(wèn)題進(jìn)行了相關(guān)試驗(yàn)研究，以期為蝴蝶蘭工廠(chǎng)化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 蝴蝶蘭選用V31品種，福建新世景園藝有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)用藥品均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法 選取健壯無(wú)病蟲(chóng)害的蝴蝶蘭花梗，剝除花朵和花蕾后將花柄清凈，用解剖刀切成2～4cm段，每段帶一個(gè)腋芽。流水沖洗0.5h后用75%酒精浸泡30s，然后用無(wú)菌水沖洗干凈，在超凈工作臺(tái)上用0.1%HgCl2溶液浸泡16min，取出后用無(wú)菌水沖洗5～8次，無(wú)菌濾紙吸干用解剖刀切除外植體頂部與基部各0.5～1cm部分，形成1～2cm長(zhǎng)莖段，每瓶接種一個(gè)外植體。然后以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養(yǎng)基，激素采用NAA與BA，另添加椰子汁、抗壞血酸、活性炭等物質(zhì)，進(jìn)行蝴蝶蘭離體培養(yǎng)。在光照培養(yǎng)室溫度為25℃，光照強(qiáng)度2 000lx，光照時(shí)間12h/d的條件下誘導(dǎo)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)花梗褐變的影響 將基本培養(yǎng)基分別設(shè)置為MS、1/2MS、1/4MS，各培養(yǎng)基均加BA3.0mg/L，接種后每10d進(jìn)行觀(guān)察，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表1。外植體接種10d后，各處理的莖段開(kāi)始萌動(dòng)，以后陸續(xù)萌芽，長(zhǎng)出芽苗。MS培養(yǎng)基處理首先出現(xiàn)褐變，20d后1/2MS培養(yǎng)基處理也開(kāi)始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象；一個(gè)月后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)觀(guān)察，1/2MS培養(yǎng)基處理的外植體萌芽率最高，1/4MS培養(yǎng)基處理的外植體褐變程度最輕；60d后觀(guān)察，1/4MS培養(yǎng)基處理的腋芽生長(zhǎng)狀態(tài)較差。因此，生產(chǎn)上應(yīng)選擇1/2MS培養(yǎng)基或適時(shí)更換培養(yǎng)基，以防止無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)缺乏。

2.2 不同激素配比對(duì)花梗褐變的影響 以蝴蝶蘭帶腋芽花梗節(jié)為外植體，以l/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA和NAA，每瓶接種1個(gè)外植體，接種培養(yǎng)10d后開(kāi)始觀(guān)察，培養(yǎng)一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，培養(yǎng)基中不含外源激素時(shí)，培養(yǎng)30d后也有少量花梗腋芽萌發(fā)，但培養(yǎng)基褐化現(xiàn)象較重（43.3%）；在培養(yǎng)基中添加BA 3.0mg/L時(shí)，蝴蝶蘭花梗腋芽萌芽數(shù)最高（83個(gè)），繼續(xù)添加BA 5.0mg/L萌芽數(shù)有所降低（57個(gè)），褐變現(xiàn)象最為嚴(yán)重（73.3%）；在BA 3.0mg/L的基礎(chǔ)上添加NAA，BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L的激素配比，萌芽數(shù)及褐變率都在最優(yōu)范圍內(nèi)，分別為79個(gè)和26.7%。

2.3 不同添加物對(duì)花梗褐變的影響 椰子汁是一種天然的復(fù)合有機(jī)物，含有豐富的氨基酸、礦物質(zhì)、維生素和碳水化合物等，這些物質(zhì)具有促進(jìn)培養(yǎng)物的生長(zhǎng)，提高存活率，減少褐化死亡現(xiàn)象的作用。抗壞血酸是植物組織培養(yǎng)中常用的抗褐變劑，其對(duì)外植體褐變的抑制多有報(bào)道?；钚蕴烤哂休^強(qiáng)的吸附能力，對(duì)抑制褐變起重要作用。本試驗(yàn)以1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別添加5%椰子汁、10%椰子汁、50mg/LVC、100mg/LVC、500mg/L活性炭、2 000mg/L活性炭等，與未添加上達(dá)物質(zhì)的培養(yǎng)一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可知，附加活性炭的培養(yǎng)基能明顯抑制外植體褐變產(chǎn)生，但是由于活性炭不但對(duì)培養(yǎng)基中的醌類(lèi)化合物有吸附作用，同時(shí)也吸附了部分分裂素、生長(zhǎng)素、維生素等相關(guān)成分，在抑制褐化的同時(shí)也嚴(yán)重影響到芽的萌發(fā)和增殖效果；而添加10%的椰子汁或100mg/L抗壞血酸的培養(yǎng)基，均能有效抑制褐變，從萌芽效果看，添加椰子汁的培養(yǎng)基效果較添加抗壞血酸的優(yōu)。

2.4 不同培養(yǎng)條件對(duì)花梗褐變及生長(zhǎng)的影響 將接種于1/2MS+BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L培養(yǎng)基上的蝴蝶蘭花梗節(jié)放置于不同溫度及不同光照的培養(yǎng)環(huán)境內(nèi)，比較其褐變及生長(zhǎng)情況，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，蝴蝶蘭花梗節(jié)培養(yǎng)過(guò)程中溫度應(yīng)比較恒定，若溫度過(guò)低，形成原球莖叢生芽所需時(shí)間較長(zhǎng)，生長(zhǎng)緩慢，若溫度過(guò)高，則容易造成污染褐變率也上升；同樣，暗培養(yǎng)對(duì)控制褐變有顯著效果，但由于缺乏光照，材料生長(zhǎng)緩慢，在暗培養(yǎng)一定時(shí)間后應(yīng)移至常規(guī)光照條件下放置。

3 結(jié)論與討論

國(guó)內(nèi)外蝴蝶蘭離體快繁以莖尖為外植體的研究較多，盡管莖尖容易脫分化并再分化成完整植株，但由于蝴蝶蘭為單莖性植物，摘取莖尖就會(huì)犧牲母株，造成不必要的浪費(fèi)。因此，在實(shí)際的生產(chǎn)中，現(xiàn)階段代替蝴蝶蘭莖尖培養(yǎng)的方法是利用蝴蝶蘭的花梗作為外植體進(jìn)行培養(yǎng)，其花梗通常只有4～5個(gè)腋芽，腋芽啟動(dòng)培養(yǎng)的效果直接關(guān)系到增殖培養(yǎng)時(shí)無(wú)菌材料的多少，從而影響花?？焖俜敝车男?。以蝴蝶蘭花梗為材料建立蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖體系，比采用根尖、莖尖和種子進(jìn)行蝴蝶蘭的快速無(wú)性繁殖更具有應(yīng)用價(jià)值。蘭科植物在外植體誘導(dǎo)和原球莖分化培養(yǎng)時(shí)都存在褐變死亡的問(wèn)題，因而減輕或控制褐變發(fā)生是蘭科植物組織培養(yǎng)研究的重要內(nèi)容。

本研究針對(duì)蝴蝶蘭組培褐變問(wèn)題進(jìn)行了試驗(yàn)研究，嘗試探尋蝴蝶蘭花梗腋芽培養(yǎng)過(guò)程中有效控制褐變的方法。試驗(yàn)表明：適當(dāng)降低無(wú)機(jī)離子濃度，有利于降低外植體褐變率；恰當(dāng)?shù)募?xì)胞分裂素BA與生長(zhǎng)素NAA配比，在控制褐變及誘導(dǎo)叢生芽上有增效作用；添加一定劑量的椰子汁、抗壞血酸、活性炭等均可減輕褐變，但活性炭對(duì)外源激素的吸附較大；在培養(yǎng)環(huán)境上，短期暗培養(yǎng)有利于減輕外植體的褐變，低溫雖然也能降低褐變率，但由于此條件下試驗(yàn)材料生長(zhǎng)緩慢，對(duì)于工廠(chǎng)化育苗意義不大。

參考文獻(xiàn)

[1]曾都華，郁培義，陳偉玉，等.“滿(mǎn)天紅”蝴蝶蘭花梗組培快繁技術(shù)研究[J].熱帶林業(yè)，2014，42（1）：46-49.

[2]王玲，陳發(fā)棣，陳鳳，等.不同培養(yǎng)基及添加物對(duì)蝴蝶蘭花梗芽壯苗生根的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（5）：134-136.

[3]印芳，彭克勤，葛紅，等.礦質(zhì)元素對(duì)蝴蝶蘭組培褐變的影響[J].北方園藝，2006（6）：137-139.

[4]張凡凡.蝴蝶蘭組培快繁中褐變問(wèn)題的研究進(jìn)展[J].探索，2010（5）：362. （責(zé)編：張宏民）endprint

摘 要：該文以蝴蝶蘭花后帶腋芽花梗節(jié)為外植體，比較了附加不同激素的MS培養(yǎng)基以及不同培養(yǎng)條件對(duì)控制外植體褐變的影響。結(jié)果表明，采用1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L+10%椰子汁的配方對(duì)控制花梗褐變及誘導(dǎo)叢生芽效果最為顯著。

關(guān)鍵詞：蝴蝶蘭；花梗；離體培養(yǎng)；褐變；控制

中圖分類(lèi)號(hào) S68 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2014）21-23-02

蝴蝶蘭（Phalaenopsis）屬蘭科植物，因其風(fēng)姿綽約、體態(tài)輕盈、花色秀麗、氣質(zhì)飄逸，被譽(yù)為“洋蘭王后”，其原生種的花色因種類(lèi)不同而有較大的變化。由于蝴蝶蘭的種子在自然條件下發(fā)芽率極低，很難利用種子播種的方式來(lái)進(jìn)行有性繁殖，而且由于蝴蝶蘭屬單莖氣生蘭，在植株上少有側(cè)枝，也難以采用常規(guī)分株法進(jìn)行無(wú)性繁殖。因此，采用離體快速繁殖技術(shù)，對(duì)于擴(kuò)大蝴蝶蘭的繁殖是非常必要的，利用花梗離體培養(yǎng)是當(dāng)前蝴蝶蘭快速繁殖的主要途徑。但蝴蝶蘭在組培快繁生產(chǎn)中存在著極易褐變夭折的問(wèn)題，褐化直接影響蝴蝶蘭離體培養(yǎng)的正常進(jìn)行，包括芽的萌發(fā)和增殖效果，生長(zhǎng)緩慢，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)材料死亡。為此，筆者針對(duì)蝴蝶蘭花梗腋芽離體快繁褐變問(wèn)題進(jìn)行了相關(guān)試驗(yàn)研究，以期為蝴蝶蘭工廠(chǎng)化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料 蝴蝶蘭選用V31品種，福建新世景園藝有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)用藥品均為分析純。

1.2 試驗(yàn)方法 選取健壯無(wú)病蟲(chóng)害的蝴蝶蘭花梗，剝除花朵和花蕾后將花柄清凈，用解剖刀切成2～4cm段，每段帶一個(gè)腋芽。流水沖洗0.5h后用75%酒精浸泡30s，然后用無(wú)菌水沖洗干凈，在超凈工作臺(tái)上用0.1%HgCl2溶液浸泡16min，取出后用無(wú)菌水沖洗5～8次，無(wú)菌濾紙吸干用解剖刀切除外植體頂部與基部各0.5～1cm部分，形成1～2cm長(zhǎng)莖段，每瓶接種一個(gè)外植體。然后以MS、1/2MS、1/4MS為基本培養(yǎng)基，激素采用NAA與BA，另添加椰子汁、抗壞血酸、活性炭等物質(zhì)，進(jìn)行蝴蝶蘭離體培養(yǎng)。在光照培養(yǎng)室溫度為25℃，光照強(qiáng)度2 000lx，光照時(shí)間12h/d的條件下誘導(dǎo)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)花梗褐變的影響 將基本培養(yǎng)基分別設(shè)置為MS、1/2MS、1/4MS，各培養(yǎng)基均加BA3.0mg/L，接種后每10d進(jìn)行觀(guān)察，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表1。外植體接種10d后，各處理的莖段開(kāi)始萌動(dòng)，以后陸續(xù)萌芽，長(zhǎng)出芽苗。MS培養(yǎng)基處理首先出現(xiàn)褐變，20d后1/2MS培養(yǎng)基處理也開(kāi)始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象；一個(gè)月后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)觀(guān)察，1/2MS培養(yǎng)基處理的外植體萌芽率最高，1/4MS培養(yǎng)基處理的外植體褐變程度最輕；60d后觀(guān)察，1/4MS培養(yǎng)基處理的腋芽生長(zhǎng)狀態(tài)較差。因此，生產(chǎn)上應(yīng)選擇1/2MS培養(yǎng)基或適時(shí)更換培養(yǎng)基，以防止無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)缺乏。

2.2 不同激素配比對(duì)花梗褐變的影響 以蝴蝶蘭帶腋芽花梗節(jié)為外植體，以l/2MS為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA和NAA，每瓶接種1個(gè)外植體，接種培養(yǎng)10d后開(kāi)始觀(guān)察，培養(yǎng)一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，培養(yǎng)基中不含外源激素時(shí)，培養(yǎng)30d后也有少量花梗腋芽萌發(fā)，但培養(yǎng)基褐化現(xiàn)象較重（43.3%）；在培養(yǎng)基中添加BA 3.0mg/L時(shí)，蝴蝶蘭花梗腋芽萌芽數(shù)最高（83個(gè)），繼續(xù)添加BA 5.0mg/L萌芽數(shù)有所降低（57個(gè)），褐變現(xiàn)象最為嚴(yán)重（73.3%）；在BA 3.0mg/L的基礎(chǔ)上添加NAA，BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L的激素配比，萌芽數(shù)及褐變率都在最優(yōu)范圍內(nèi)，分別為79個(gè)和26.7%。

2.3 不同添加物對(duì)花梗褐變的影響 椰子汁是一種天然的復(fù)合有機(jī)物，含有豐富的氨基酸、礦物質(zhì)、維生素和碳水化合物等，這些物質(zhì)具有促進(jìn)培養(yǎng)物的生長(zhǎng)，提高存活率，減少褐化死亡現(xiàn)象的作用。抗壞血酸是植物組織培養(yǎng)中常用的抗褐變劑，其對(duì)外植體褐變的抑制多有報(bào)道?；钚蕴烤哂休^強(qiáng)的吸附能力，對(duì)抑制褐變起重要作用。本試驗(yàn)以1/2MS+BA3.0mg/L+NAA2.0mg/L為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別添加5%椰子汁、10%椰子汁、50mg/LVC、100mg/LVC、500mg/L活性炭、2 000mg/L活性炭等，與未添加上達(dá)物質(zhì)的培養(yǎng)一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可知，附加活性炭的培養(yǎng)基能明顯抑制外植體褐變產(chǎn)生，但是由于活性炭不但對(duì)培養(yǎng)基中的醌類(lèi)化合物有吸附作用，同時(shí)也吸附了部分分裂素、生長(zhǎng)素、維生素等相關(guān)成分，在抑制褐化的同時(shí)也嚴(yán)重影響到芽的萌發(fā)和增殖效果；而添加10%的椰子汁或100mg/L抗壞血酸的培養(yǎng)基，均能有效抑制褐變，從萌芽效果看，添加椰子汁的培養(yǎng)基效果較添加抗壞血酸的優(yōu)。

2.4 不同培養(yǎng)條件對(duì)花梗褐變及生長(zhǎng)的影響 將接種于1/2MS+BA 3.0mg/L+NAA 2.0mg/L培養(yǎng)基上的蝴蝶蘭花梗節(jié)放置于不同溫度及不同光照的培養(yǎng)環(huán)境內(nèi)，比較其褐變及生長(zhǎng)情況，結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，蝴蝶蘭花梗節(jié)培養(yǎng)過(guò)程中溫度應(yīng)比較恒定，若溫度過(guò)低，形成原球莖叢生芽所需時(shí)間較長(zhǎng)，生長(zhǎng)緩慢，若溫度過(guò)高，則容易造成污染褐變率也上升；同樣，暗培養(yǎng)對(duì)控制褐變有顯著效果，但由于缺乏光照，材料生長(zhǎng)緩慢，在暗培養(yǎng)一定時(shí)間后應(yīng)移至常規(guī)光照條件下放置。

3 結(jié)論與討論

國(guó)內(nèi)外蝴蝶蘭離體快繁以莖尖為外植體的研究較多，盡管莖尖容易脫分化并再分化成完整植株，但由于蝴蝶蘭為單莖性植物，摘取莖尖就會(huì)犧牲母株，造成不必要的浪費(fèi)。因此，在實(shí)際的生產(chǎn)中，現(xiàn)階段代替蝴蝶蘭莖尖培養(yǎng)的方法是利用蝴蝶蘭的花梗作為外植體進(jìn)行培養(yǎng)，其花梗通常只有4～5個(gè)腋芽，腋芽啟動(dòng)培養(yǎng)的效果直接關(guān)系到增殖培養(yǎng)時(shí)無(wú)菌材料的多少，從而影響花梗快速繁殖的效率。以蝴蝶蘭花梗為材料建立蝴蝶蘭的無(wú)性繁殖體系，比采用根尖、莖尖和種子進(jìn)行蝴蝶蘭的快速無(wú)性繁殖更具有應(yīng)用價(jià)值。蘭科植物在外植體誘導(dǎo)和原球莖分化培養(yǎng)時(shí)都存在褐變死亡的問(wèn)題，因而減輕或控制褐變發(fā)生是蘭科植物組織培養(yǎng)研究的重要內(nèi)容。

本研究針對(duì)蝴蝶蘭組培褐變問(wèn)題進(jìn)行了試驗(yàn)研究，嘗試探尋蝴蝶蘭花梗腋芽培養(yǎng)過(guò)程中有效控制褐變的方法。試驗(yàn)表明：適當(dāng)降低無(wú)機(jī)離子濃度，有利于降低外植體褐變率；恰當(dāng)?shù)募?xì)胞分裂素BA與生長(zhǎng)素NAA配比，在控制褐變及誘導(dǎo)叢生芽上有增效作用；添加一定劑量的椰子汁、抗壞血酸、活性炭等均可減輕褐變，但活性炭對(duì)外源激素的吸附較大；在培養(yǎng)環(huán)境上，短期暗培養(yǎng)有利于減輕外植體的褐變，低溫雖然也能降低褐變率，但由于此條件下試驗(yàn)材料生長(zhǎng)緩慢，對(duì)于工廠(chǎng)化育苗意義不大。

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