正交試驗(yàn)法優(yōu)選紅鹿補(bǔ)腎膠囊的提取工藝

楊滋淵 楊玲玲 陜西省人民醫(yī)院（西安710068）

△商洛學(xué)院（商洛721000）

紅鹿補(bǔ)腎膠囊由黃芪、紅參、淫羊藿等16味藥材組成，具有益氣養(yǎng)血，溫腎壯陽(yáng)等功效。臨床用于治療面色白，精神疲乏，四肢少溫，小便清長(zhǎng)，舌淡苔薄白，脈沉細(xì)弱等癥。方中黃芪、淫羊藿等9味藥材作為水提工藝的主要藥材，淫羊藿中的淫羊藿苷［1］作為淫羊藿的指標(biāo)性成分。為了有效地控制該工藝，我們通過(guò)正交試驗(yàn)，采用高效液相色譜法［2］測(cè)定淫羊藿苷的含量［3］，結(jié)合干浸膏得率兩項(xiàng)指標(biāo)，確定最佳工藝。

1 儀器與試藥1.1 儀器日本島津LC－2010A高效液相色譜儀；BS210S型電子分析天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）d＝0.1mg；BT25S型電子分析天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）d＝0.01mg；LXJ－Ⅱ型臺(tái)式離心沉淀機(jī)（南京第一醫(yī)療器械廠）；DK－98－ⅡA型水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司）；UP3200H型超聲波清洗器（熊貓集團(tuán)南京電子計(jì)量有限公司）；MH－2000調(diào)溫型電熱套（北京科偉永興儀器有限公司）；JS15－1型電子天平（上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司）d＝1g；CS101－3EB型電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶四達(dá)試驗(yàn)設(shè)備有限公司）；FW177型中草藥粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）；HC·TP 11B－10型架盤(pán)藥物天平（北京醫(yī)用天平廠）最小和最大質(zhì)量1g－1000g。

1.2 試藥 淫羊藿苷對(duì)照品購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品鑒定所（批號(hào)：110737－200415）；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純；水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果2.1 檢測(cè)方法 2.1.1 干浸膏得率的測(cè)定 精密量取離心濾過(guò)后的濾液100mL，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，至烘箱于105℃干燥3h，置干燥器中冷卻0.5h，迅速稱(chēng)重，計(jì)算干浸膏得率。

2.1.2 淫羊藿苷含量測(cè)定［4］供試品溶液的制備 按淫羊藿藥材0.2g量計(jì)，精密量取離心濾過(guò)后的濾液適量，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)孟∫掖?0mL轉(zhuǎn)移至具塞錐形瓶中，稱(chēng)定重量，超聲處理1h，放冷，再稱(chēng)定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取淫羊藿苷對(duì)照品3.95mg，置25mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，制成每1mL含淫羊藿苷0.158mg的溶液，即得。

色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－水（30：70）；檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm；流速：1.0mL。理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。

含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 正交試驗(yàn) 2.2.1 實(shí)驗(yàn)因素和水平設(shè)定 影響水提取的主要因素有加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù)，因此我們選擇正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)研究。為了系統(tǒng)考察水提取的工藝參數(shù)，我們?cè)O(shè)計(jì)的因素水平表見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)因素水平表

2.2.2 正交試驗(yàn)安排及結(jié)果：見(jiàn)表2－3。

由表2K及R值可知，以干浸膏得率為考察指標(biāo)A3＞A2＞A1，B2＞B3＞B1，C3＞C2＞C1，C因素影響最大，A、B因素次之。結(jié)合表3干浸膏得率方差分析知，各因素作用主次為C＞A＞B，其中C因素影響極顯著，A、B因素次之，因此水煎煮最佳提取工藝為A3 B2C3。由表2K及R值可知，以淫羊藿苷得量為考察指標(biāo)時(shí)，A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，C因素影響最大，A、B因素次之。結(jié)合表3淫羊藿苷得量方差分析知，各因素作用主次為C＞B＞A，其中C因素影響較顯著，A、B因素次之，水煎煮最佳提取工藝為A3B3C3，從兩項(xiàng)考察指標(biāo)結(jié)果看，煎煮時(shí)間略有不同，為了考慮到含量這一重要指標(biāo)，故確定最佳工藝為A3B3C3。

表2 紅鹿補(bǔ)腎膠囊L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 干浸膏得率及淫羊藿苷得量方差分析

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

2.2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)：由于優(yōu)選的工藝不包括在正交表的9次試驗(yàn)中，故對(duì)其進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)。用同一批藥材，按湯劑處方量比例，稱(chēng)取炙黃芪30g，菟絲子、熟地、黃精、枸杞子各12g，韭菜籽9g，淫羊藿10g，五味子、甘草各6g共計(jì)109g，平行三份，按照優(yōu)選的A3B3C3提取參數(shù)進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定干浸膏得率及淫羊藿苷含量，結(jié)果見(jiàn)表4。

由表4可見(jiàn)，以干浸膏得率和淫羊藿苷得量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，數(shù)據(jù)較穩(wěn)定，且干膏得率和含量均較高。故確定A3B3C3為最佳工藝，即藥材加水煎煮3次，每次12倍量，煎煮2h。

3 討 論本實(shí)驗(yàn)研究黃芪、淫羊藿的水提取工藝，因其主要成分為淫羊藿苷，固本實(shí)驗(yàn)以干膏率及淫羊藿苷為考察指標(biāo)，通過(guò)正交試驗(yàn)結(jié)合方差分析結(jié)果表明，水提影響干膏得率的主要因素是煎煮次數(shù)，加水量和煎煮時(shí)間影響較小。水提影響淫羊藿苷得率的主因素也是煎煮次數(shù)。最佳提取工藝為加水12倍量，煎煮3次，每次2h，所得的浸膏得率和淫羊藿苷含量均較高。

［1］譚 鵬，仲玲利，楊 蕾，等.不同炮制方法巫山淫羊藿中3個(gè)黃酮類(lèi)成分油水分配系數(shù)的比較.藥物分析雜志［J］.2013，33（8）：1289.

［2］佟 杰.高效液相色譜法測(cè)定仙靈骨葆丸中淫羊藿苷的含量［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010，16（32）：139.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì)編，中華人民共和國(guó)藥典2010年版：一部［M］.中國(guó)醫(yī)藥科技出版社.

［4］梁 穎，孫思雨，劉 芳，等.高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方中藥強(qiáng)骨片中淫羊藿苷含量［J］.制劑與技術(shù)，2013，3（2）；52－70.