中藥大黃不同儲存時期內(nèi)的有效成分含量研究＊

宋文惠 邊軍昌 劉勤社 陜西省人民醫(yī)院（西安710068）

△西安醫(yī)學(xué)院（西安710021）

大黃為蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatum L.）、唐古特大黃（Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.）或藥用大黃（Rheum officinale Baill.）的干燥根及根莖。主含蒽醌類衍生物、苷類化合物，其他的成分還有鞣質(zhì)類、有機(jī)酸類、揮發(fā)油類、脂肪酸及植物甾醇等等［1］。

根及根狀莖含大黃酸、大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃素甲醚等游離蒽醌衍生物，是抗菌成分；另含以上物質(zhì)的葡萄糖苷及蕃瀉葉苷A、B、C等結(jié)合狀蒽醌衍生物，有致瀉作用。此外尚含鞣質(zhì)類，是收斂、止血成分［2］。大黃根及根狀莖有清熱瀉下、破積去瘀、抗菌消炎等作用。生用為峻下藥，炮制后使用為緩下藥。炒炭后又可用于止血。小劑量服用時有健胃、收斂作用。

儲存時期的不同，導(dǎo)致大黃的有效成分含量發(fā)生變化，若不能正確掌握儲存時期，就會使有效成分含量下降，影響臨床療效。筆者對大黃的不同儲存時期有效成分含量的變化規(guī)律進(jìn)行研究，以指導(dǎo)生產(chǎn)企業(yè)和使用單位合理保管應(yīng)用。

1 儀器、藥品與試劑

1.1 儀器 安捷倫1100型液相色譜儀（美國）；HP1100分離系統(tǒng)（四元泵，柱溫箱和自動進(jìn)樣器），HP1100紫外檢測器，安捷倫化學(xué)工作站；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器等。

1.2 試劑與試藥 大黃素對照品（中國藥品生物制品檢定所，20mg/瓶），新鮮大黃藥材訂制于西安藥材公司，其他大黃藥材樣品以月份、年份儲存使用，甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱為安捷倫ZORBAX Stable Bound（1.8μm，4.6mm×50mm），以甲醇－0.1%磷酸溶液（體積比85∶15）為流動相，檢測波長254nm；流速為0.8mL·min－1，柱溫：室溫。進(jìn)樣量：5μL；靈敏度：0.02

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性范圍 精密稱取大黃素對照品2.0mg，置于50mL量瓶中，加甲醇溶解、定溶，大黃素含量為0.04g/L作為對照品儲備溶液。移液管取上述溶液1.0mL于10mL量瓶中，甲醇定溶混勻，既得標(biāo)準(zhǔn)對照液（大黃素含量為4μL/mL）。分別精密吸取上述標(biāo)品溶液1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、30.0μL，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，作線性回歸，得回歸方程 A＝－3.1736＋25.6462C，r＝0.9999，結(jié)果表明，線性范圍μg 0.04～0.12。

2.3 供試品溶液的制備 取新鮮大黃藥材烘干粉碎、過四十目篩，精密稱取粉末約0.15g置于具塞錐形瓶中，加甲醇25mL稱重，加熱回流1h，放冷稱重，補(bǔ)足甲醇損失量，搖勻過濾，精密量取繼濾液1mL定容至10mL，置于燒瓶中蒸去甲醇，加20% 鹽酸10mL超聲水解5min，再加氯仿回流提取1h，冷后置于分液漏斗中，少量氯仿洗滌容器，合并濾液，分取氯仿層，酸液再用氯仿萃取三次，每次10mL，合并氯仿層，分別用少量5%的碳酸氫鈉、碳酸鈉和2%氫氧化鈉萃取三次，留取碳酸鈉萃取液，酸化得結(jié)晶，加甲醇溶解于10mL容量瓶中，定容，搖勻過濾，進(jìn)樣前取2mL再用0.4 5μm微孔濾膜過濾，取濾液即得。其他不同時期的大黃制法同此項。

2.4 精密度實驗 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，依據(jù)大黃素的峰面積計算精密度，結(jié)果大黃素的RSD＝0.08%，表明，本方法精密度良好。

2.5 重復(fù)性實驗 樣品依2.3項平行處理6份，測定峰面積來計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，大黃的RSD為0.07%。

2.6 回收率試驗 精密稱取已測知含量的樣品溶液，加入一定量的大黃素對照品溶液，按供試品制法和測定方法計算加標(biāo)回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果

2.7 不同時期樣品的測定 新鮮的藥材及不同年限的藥材操作時每份取三份，平行操作，測定時取其平均值，結(jié)果見表2。

表2 不同時期大黃中大黃素的含量測定結(jié)果

3 討 論3.1 大黃的主要有效成分為蒽醌衍生物，它包括羥基蒽醌、蒽酚、蒽酮及蒽醌衍生物。這些常以游離狀態(tài)或與糖結(jié)合成苷或與金屬成鹽等形式存在，蒽酚、蒽酮是蒽醌的還原產(chǎn)物，常與蒽醌同時存在于中藥中，可以相互轉(zhuǎn)化，還原型多存在于新鮮藥材中，它們在儲存中會逐漸氧化變成蒽醌［2］。所以含有蒽醌的多數(shù)藥材采集后需儲藏才可藥用，目的使其成分氧化完全，蒽醌含量增加。但是大黃藥材因儲藏不當(dāng)兩年左右極易蟲蛀，此后隨蟲蛀加深有效成分急劇下降，以至于完全不可藥用。

3.2 大黃素的提取方法很多，如水提法、堿溶酸沉法、滲濾法、回流法、超聲法等等［2，3］。但以乙醇、氯仿和加酸水解提取常見；影響回收率的因素也很多，如藥材的產(chǎn)地、采收季節(jié)；提取的工藝、溶劑和溫度的選擇；水解的時間、水解的程度；人為操作因素等等。

3.3 由于大黃的來源復(fù)雜，南北各地區(qū)的有效成分含量差距很大。所以本法只對其主要成分—大黃素作為檢測指標(biāo)，以檢驗其隨儲存年限的變化規(guī)律；大黃素的含量測定方法也很多，如薄層掃描法、分光光度法、高效液相法等等，藥典為HPLC法，所以本文選用高效液相色譜法測定其含量。

3.4 經(jīng)本次實驗操作，可以得到這樣的結(jié)論：含蒽醌類的藥物如大黃在儲存一年左右含量最高，但在兩年后極易蟲蛀，有效成分含量下降，虎杖、何首烏、萱草、牛膝等也有此現(xiàn)象，故新鮮的、蟲蛀的藥材其有效成分含量不高，使用保管時需注意。

［1］葛亞寧，魏寶林，董明芝，等.不同炮制方法對大黃有效成分的影響研究［J］.陜西中醫(yī)，2013，34（08）：1069－1070.

［2］吳立軍.天然藥物化學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：151－171.

［3］李沛清，張 帆，金建文，等.不同產(chǎn)地大黃ITS序列分析［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2010，37（1）：136.