• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    煎餅發(fā)酵面糊中乳酸菌的鑒定及保護劑配方的優(yōu)化

    2014-11-20 12:11:10唐明禮王勃劉賀何余堂惠麗娟馬濤
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2014年10期
    關(guān)鍵詞:戊糖脫脂乳谷氨酸鈉

    唐明禮,王勃,劉賀,何余堂,惠麗娟,馬濤

    (渤海大學(xué)化學(xué)化工與食品安全學(xué)院,渤海大學(xué)糧油科學(xué)與技術(shù)研究所,遼寧錦州,121013)

    煎餅的傳統(tǒng)生產(chǎn)主要利用面糊及環(huán)境中的乳酸菌和酵母菌自然發(fā)酵進行攤制,但生產(chǎn)過程易受微生物二次污染、食品質(zhì)量安全堪憂等問題將被發(fā)酵劑取代。乳酸菌廣泛應(yīng)用于發(fā)酵劑、益生菌、青貯飼料防腐劑等[1]。在煎餅的生產(chǎn)中乳酸菌有助于形成乳酸、乙醇、二氧化碳、芳香族化合物等化合物,有助于產(chǎn)品的風(fēng)味、香氣和口感,還能提高營養(yǎng)價值,對改善產(chǎn)品品質(zhì)與安全具有重要作用[2-4]。

    真空冷凍干燥在低溫條件下利用升華作用去除水分,降低了化學(xué)反應(yīng)速率和減少了對生物結(jié)構(gòu)的破壞[5]。但凍干過程可導(dǎo)致冰晶、高滲環(huán)境的形成、細胞膜通透性的改變、敏感蛋白的變性與失活等,從而導(dǎo)致微生物的死亡,通過添加多糖、羥基化合物、蛋白質(zhì)、聚合物等保護劑能夠減低結(jié)晶率、提高最大凍結(jié)濃縮液和干物質(zhì)的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度[6-9],保證了凍干菌的存活率。

    本文使用VITEC-2 compact微生物鑒定系統(tǒng)對煎餅發(fā)酵面糊中分離的乳酸菌進行鑒定,并制成直投式活菌發(fā)酵劑。為滿足產(chǎn)品質(zhì)量的要求,保證戊糖片球菌較高的存活率,本研究重點在于應(yīng)用響應(yīng)面分析方法對海藻糖、蔗糖、脫脂乳、L-谷氨酸鈉4種保護劑優(yōu)化戊糖片球菌在真空冷凍干燥過程的生物活性。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    菌種:乳酸菌,實驗室分離保藏。

    試劑:海藻糖 (分析純),國藥集團化學(xué)試劑有限公司;甘油 (食品級),連云港友進食品添加劑技術(shù)開發(fā)有限公司;脫脂乳(食品級),黑龍江完達山乳業(yè)股份有限公司;乳糖 (分析純),天津市化學(xué)試劑工廠;葡萄糖(分析純),天津市天利化學(xué)試劑有限公司;蔗糖(食品級),龍舟南華糖業(yè)有限公司;L-谷氨酸鈉(分析純),北京市朝陽區(qū)中聯(lián)化工試劑廠;MnSO4(分析純),天津市致遠化學(xué)試劑有限公司;GP鑒定卡片,法國梅里埃。

    MRS培養(yǎng)基,北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司;MRS肉湯,北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    VITEC-2 compact全自動微生物鑒定儀,法國梅里埃;FreeZone臺式真空冷凍干燥機,上海珂淮儀器有限公司;Biofuge Stratos高速冷凍離心機,美國THERMO;GMSX-280手提式壓力蒸汽滅菌器,北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司;HS-1300無菌操作臺,蘇州安泰;DHP-9082電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海一恒科學(xué)儀器有限公司;HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋,金壇市鑫鑫試驗儀器廠;AR224CN電子天平,奧豪斯儀器(上海)有限公司制造;MDF-382E(CN)超低溫冰箱,日本三洋。

    1.3 實驗方法

    1.3.1 VITEC-2 compact微生物鑒定儀對乳酸菌的鑒定

    乳酸菌在-4℃的條件進行保藏,測試前將MRS固體培養(yǎng)基上的單菌落懸浮于0.45%的滅菌生理鹽水中,并用濁度儀確定濁度為0.5~0.63,將GP卡片插入此菌懸浮液中進行鑒定。GP卡片首先進入填充倉進行填充,使菌懸液進入卡片試劑中,填充完成將卡片放入切片分裝倉,儀器進行自動切片、封裝,將卡打入孵育倉,此后儀器每15 min自動讀卡檢測1次,檢測完畢后將自動打印報告單。

    1.3.2 工藝流程

    斜面菌株→活化→搖瓶擴大培養(yǎng)→離心濃縮→制備菌懸液→活菌計數(shù)→加入保護劑→預(yù)凍→真空冷凍干燥→產(chǎn)品→活菌計數(shù)

    1.3.3 單一保護劑的制備與選擇

    將表1中的保護劑按照相應(yīng)的濃度進行配制,在121℃,15 min的條件下滅菌備用。以生理鹽水為對照,測定凍干前后活菌數(shù),計算存活率。

    表1 保護劑的種類與用量Table 1 The type and amount of protective agent

    1.3.4 菌體的培養(yǎng)與收集

    將斜面上的菌株接至含有MRS肉湯的三角瓶中,36℃靜置培養(yǎng)12 h,將10 mL菌液加入到100 mL MRS肉湯中進行擴培,使培養(yǎng)液的菌數(shù)達到108/mL。將培養(yǎng)液以8 000 r/min、4℃的條件下離心10 min,棄去上清液,以一定量的無菌生理鹽水清洗菌泥。

    1.3.5 真空冷凍干燥

    在無菌的條件下,菌液與保護劑的比例為1∶1條件混合,保護劑與乳酸菌懸液平衡時間為30 min,-70℃預(yù)凍2 h,之后進行真空冷凍干燥。冷凍干燥參數(shù)為:22Pa、-50℃。

    1.3.6 凍干前后活菌數(shù)的計算

    將乳酸菌離心后的菌懸浮和凍干后的菌粉梯度稀釋,平板計數(shù)法計數(shù),選擇菌落數(shù)30~300 CFU/mL的為有效稀釋倍數(shù),記錄菌落數(shù)。

    1.3.7 存活率的計算

    實驗結(jié)果以存活率表示,分析真空冷凍干燥對乳酸菌的影響[10-11]。

    式中,N:冷凍干燥后乳酸菌的數(shù)量;N0:冷凍干燥前乳酸菌的數(shù)量。

    1.3.8 響應(yīng)面分析

    在單因素實驗結(jié)果的基礎(chǔ)之上,采用Box-Behnken實驗設(shè)計方案,以海藻糖、谷氨酸鈉、蔗糖、脫脂乳為考察變量,分別以A、B、C表示,以存活率Y為響應(yīng)值,以+1、0、-1分別代表自變量的高、中、低水平,按方程對自變量進行編碼。其中,xi為自變量的編碼值,Xi為自變量的真實值,X0為實驗中心點處自變量的真實值,X為自變量的變化步長[12-15]。因子編碼及各自變量水平見表2。

    表2 實驗因素水平及編碼Table 2 Code and level of factors chosen for the trials

    2 結(jié)果與分析

    2.1 VITEC-2 compact微生物鑒定儀對煎餅發(fā)酵面糊中乳酸菌的鑒定

    使用濁度儀將乳酸菌的菌懸液濁度調(diào)為0.55,經(jīng)過5h的分析鑒定,鑒定結(jié)果為戊糖片球菌,可能性百分比為97%,具有良好的鑒定效果。

    2.2 單一保護劑對戊糖片球菌存活率的影響

    單一保護劑對戊糖片球菌存活率的影響見表3,蔗糖、海藻糖、脫脂乳、谷氨酸鈉對戊糖片球菌具有較好的保護效果,海藻糖對菌體的保護效果最好,對菌體的最大存活率可達65%。糖類對菌體的保護作用是凍干過程可取代水分子與磷脂雙分子層的極性基團形成氫鍵,防止了磷脂雙分子層的相變,保護了細胞膜的完整性[16]。脫脂乳對菌體的保護作用是脫脂乳中含有乳糖,乳中的膠體物質(zhì)也提高了玻璃化轉(zhuǎn)變溫度,對微生物起到保護作用[17]。甘油通過與結(jié)合水發(fā)生水化作用,增加溶液的黏度,可防止冰晶的形成,故提高了戊糖片球菌在冷凍干燥過程中的存活率[18]。故選用谷氨酸鈉、蔗糖、海藻糖和脫脂乳4種保護劑進行復(fù)配實驗,以得到較好的存活率。

    表3 單一保護劑對戊糖片球菌存活率的影響Table 3 The effect of a single protective agent on survival rate of Pediococcus pentosaceus

    2.3 模型的建立及顯著性檢驗

    表4列出戊糖片球菌凍干存活率的實測值及預(yù)測值,利用Design Expert軟件進行實驗設(shè)計并優(yōu)化出來的17組實驗以及結(jié)果見表4。

    表4 實驗設(shè)計及其結(jié)果Table 4 Experimental designs and results

    利用Design Expert(8.0.6)軟件對表4數(shù)據(jù)進行多元回歸方程擬合,得到海藻糖(X1)、谷氨酸鈉(X2)、蔗糖(X3)、脫脂乳(X4)的二次回歸方程為:Y=87.44+4.34X1+0.93X2+1.08X3+1.39X4+0.33X1X2+0.000X1X3+3.55X1X4+0.95X2X3--4.75X42。并對該模型進行模型系數(shù)顯著性檢驗及方差分析,見表5和表6。

    表5 真空冷凍干燥對戊糖片球菌存活率回歸模型的方差分析結(jié)果Table 5 Analysis of variance for regression equation of Pediococcus pentosaceus survival rate of vacuum freeze-drying

    由表5方程回歸模型方差分析(ANOVA)可得,F(xiàn)=33.20 > F0.01(9,4)=14.66,P < 0.000 1,表明模型方程極顯著。失擬項p=3.42>0.05,不顯著。模型的校正決定系數(shù)(Adj R2)為0.901 0,說明該模型能解釋90.1%響應(yīng)值的變化,該方程與實際擬合的較好,能有效反應(yīng)戊糖片球菌存活率與海藻糖、谷氨酸鈉、蔗糖、脫脂乳之間的關(guān)系,因此所得的方程能預(yù)測響應(yīng)值隨各參數(shù)的變化規(guī)律。

    表6 回歸方程系數(shù)顯著性檢驗Table 6 Test of significance for regression coefficient of Pediococcus pentosaceus survival rate of vacuum freeze-drying

    從表6的回歸方程系數(shù)顯著性檢驗可知,一次項中X1和X4(P<0.01)的偏回歸系數(shù)極顯著,X2(P>0.05)的偏回歸系數(shù)不顯著,X3(P<0.05)的偏回歸系數(shù)顯著,說明海藻糖和脫脂乳對戊糖片球菌的存活率極顯著影響,蔗糖對戊糖片球菌的存活極顯著影響,谷氨酸鈉對存活率影響不顯著。交互項X1X4(P<0.05)的交互作用對戊糖片球菌的存活率影響顯著,交互項 X1X2、X1X3、X2X3、X2X3、X2X4和 X3X4的 P值大于0.05,說明它們對存活率的影響不顯著,二次項的回歸系數(shù)均極顯著,對存活率影響極顯著。綜合上述分析得知,各因素對響應(yīng)值的影響程度為X1(海藻糖)>X4(脫脂乳)>X3(蔗糖)>X2(谷氨酸鈉)。

    2.4 保護劑對釀酒酵母菌存活率的響應(yīng)面分析

    圖1~圖4為Design-Expert軟件對回歸方程構(gòu)建響應(yīng)面分析圖。圖1為固定蔗糖14%、脫脂乳12.5%情況下,不同含量的海藻糖和谷氨酸鈉對戊糖片球菌的影響,在海藻糖1%~1.4%,谷氨酸鈉4%~5.14%時,固定谷氨酸鈉,戊糖片球菌的存活率隨海藻糖的增加而增加。圖2為固定谷氨酸鈉5%和脫脂乳12.5%情況下,不同含量的海藻糖和蔗糖對戊糖片球菌的影響,在海藻糖含量1%~1.4%,蔗糖含量12%~14.24%的等高線可看出,固定海藻糖的用量,戊糖片球菌的存活率與蔗糖含量成正比。圖3和圖4分別是蔗糖、谷氨酸鈉和谷氨酸鈉、脫脂乳對戊糖片球菌的存活率的影響。

    圖1 海藻糖、谷氨酸鈉及其相互作用對戊糖片球菌存活率的響應(yīng)面和等高線圖Fig.1 Response surface plot and its contour plot showing the effects of trehalose,sodium glutamate and their mutual interactions on pediococcus pentosaceus survival rate

    圖2 海藻糖、蔗糖及其相互作用對戊糖片球菌存活率的響應(yīng)面和等高線圖Fig.2 Response surface plot and its contour plot showing the effects of trehalose,sucrose and their mutual interactions on Pediococcus pentosaceus survival rate

    圖3 蔗糖、谷氨酸鈉及其相互作用對戊糖片球菌存活率的響應(yīng)面和等高線圖Fig.3 Response surface plot and its contour plot showing the effects of sucrose,sodium glutamate and their mutual interactions on Pediococcus pentosaceus survival rate

    圖4 谷氨酸鈉、脫脂乳及其相互作用對戊糖片球菌存活率的響應(yīng)面和等高線圖Fig.4 Response surface plot and its contour plot showing the effects of sodium glutamate,skim milk and their mutual interactions on Pediococcus pentosaceus survival rate

    2.4 戊糖片球菌保護劑最佳配方的確定

    在選取的各范圍內(nèi),根據(jù)回歸模型通過Design Expert軟件分析優(yōu)化得出,戊糖片球菌保護劑的最佳配方為海藻糖 1.38%,谷氨酸鈉 4.80%,蔗糖13.80%,脫脂乳13.50%。在此優(yōu)化條件下戊糖片球菌的存活率可達88.8%。為證實實驗結(jié)果,用實驗中得到的最佳配方重復(fù)實驗3次并取平均值,戊糖片球菌存活率可達88%,與預(yù)測值基本一致,說明該方程與實際情況擬合得較好,充分驗證了模型的正確性,說明響應(yīng)面法適用于戊糖片球菌保護劑成分的回歸分析和參數(shù)優(yōu)化。

    3 結(jié)論

    (1)VITEC-2 compact全自動微生物鑒定儀對煎餅發(fā)酵面糊中乳酸菌的鑒定結(jié)果為戊糖片球菌。

    (2)通過單因素實驗,從葡萄糖、蔗糖、海藻糖、谷氨酸鈉、脫脂乳、乳糖和MnSO4等保護劑中,篩選效果較好的海藻糖、谷氨酸鈉、蔗糖、脫脂乳4種保護劑應(yīng)用響應(yīng)面方法對復(fù)合保護劑進行優(yōu)化,確定保護劑的最佳配方為:海藻糖1.38%,谷氨酸鈉4.80%,蔗糖13.80%,脫脂乳13.50%,在此優(yōu)化條件下,戊糖片球菌的存活率可達88%。

    [1]Schoug ?,Olsson J,Carlfors J,et al.Freeze-drying of Lactobacillus coryniformis Si3-effects of sucrose concentration,cell density,and freezing rate on cell survival and thermophysical properties[J].Cryobiology,2006,53(1):119 -127.

    [2]Ibanoglu S,Ainsworth P,Wilson G,et al.The effect of fermentation conditions on the nutrients and acceptability of tarhana[J].Food Chemistry,1995,53(2):143 -147.

    [3]Paludan-Müller C,Madsen M,Sophanodora P,et al.Fermentation and microflora of plaa-som,a Thai fermented fish product prepared with different salt concentrations[J].International Journal of Food Microbiology,2002,73(1):61-70.

    [4]Visessanguan W,Benjakul S,Smitinont T,et al.Changes in microbiological, biochemicaland physico-chemical properties of Nham inoculated with different inoculum levels of Lactobacillus curvatus[J].LWT-Food Science and Technology,2006,39(7):814 -826.

    [5]Gatlin L A,Nail S L.Freeze-drying:a practical overview[J].Bioproc.-Techn,1994,18:317 -367.

    [6]Jagannath A,Raju P S,Bawa A S.Comparative evaluation of bacterial cellulose nata as a cryoprotectant and carrier support during the freeze drying process of probiotic lactic acid bacteria[J].LWT-Food Science and Technology,2010,43(8):1 197-1 203.

    [7]Strasser S,Neureiter M,Geppl M,et al.Influence of lyophilization,fluidized bed drying,addition of protectants,and storage on the viability of lactic acid bacteria[J].Journal of Applied Microbiology,2009,107(1):167 -177.

    [8]Schoug ?,Olsson J,Carlfors J,et al.Freeze-drying of Lactobacillus coryniformis Si3 -effects of sucrose concentration,cell density,and freezing rate on cell survival and thermophysical properties[J].Cryobiology,2006,53(1):119 -127.

    [9]Streeter J G.Effect of trehalose on survival of Bradyrhizobium japonicum during desiccation[J].Journal of Applied Microbiology,2003,95(3):484 -491.

    [10]曾小群,潘道東,包紅燕,等.干酪乳桿菌凍干保護劑研究[J].中國食品學(xué)報,2013,13(1):44-50.

    [11]YANG C,ZHU X,F(xiàn)AN D,et al.Optimizing the chemical compositions of protective agents for freeze-drying bifidobacterium longum BIOMA 5920[J].Chinese Journal of Chemical Engineering,2012,20(5):930-936.

    [12]Aouadhi C,Simonin H,Prévost H,et al.Inactivation of Bacillus sporothermodurans LTIS27 spores by high hydrostatic pressure and moderate heat studied by response surface methodology[J].LWT-Food Science and Technology,2012,50(2013):50 -56.

    [13]高璃瓏,王允祥,江漢湖.超高壓殺菌條件的響應(yīng)曲面法優(yōu)化研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2004,37(10):1 544-1 549.

    [14]吳華勇,黃贛輝,顧振宇,等.響應(yīng)曲面法優(yōu)化竹葉總黃酮的提取工藝研究[J].食品科學(xué),2008,29(11):196-200.

    [15]曾慶梅,潘見,謝慧明,等.超高壓滅活枯草芽孢桿菌(AS 1.140)的參數(shù)優(yōu)化[J].農(nóng)業(yè)工程學(xué)報,2005,21(4):158-162.

    [16]Crowe J H,Hoekstra F A,Crowe L M.Anhydrobiosis[J].Annual Review of Physiology,1992,54(1):579-599.

    [17]Jagannath A,Raju P S,Bawa A S.Comparative evaluation of bacterial cellulose as a cryoprotectant and carrier support during the freeze drying process of probiotic lactic acid bacteria[J].LWT-Food Science and Technology,2010,43(8):1 197-1 203.

    [18]PU Li-li,LIU Ning,ZHANG Ying-h(huán)ua ,et al.The research development of cryoprotector of lactic acid bacteria and its protective mechanism [J].Guangzhou Food Science and Technology,2005(1):147 -149.

    猜你喜歡
    戊糖脫脂乳谷氨酸鈉
    味精加熱超過100℃會致癌?
    未來全球脫脂乳粉價格將明顯上漲
    味精不是害人精
    特別文摘(2019年5期)2019-02-28 04:12:30
    沒食子酸對谷氨酸鈉誘導(dǎo)的肥胖小鼠的降脂作用
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:35
    戊糖乳桿菌制劑防治仔豬腹瀉效果初探
    脫脂乳粉中硝酸鹽、亞硝酸鹽標準物質(zhì)制備技術(shù)研究與評估
    奧曲肽對谷氨酸鈉誘發(fā)的Aδ和C纖維放電活性的抑制效應(yīng)
    不同非氧化磷酸戊糖途徑基因的過表達對釀酒酵母木糖發(fā)酵性能的影響
    嗜熱鏈球菌與不同乳桿菌組合在脫脂乳中的發(fā)酵特性
    κ-卡拉膠對魔芋膠與脫脂乳蛋白混合體系相形為的影響
    国产人伦9x9x在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 天堂影院成人在线观看| 日本成人三级电影网站| av在线播放免费不卡| 国产亚洲欧美在线一区二区| 少妇 在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产一区二区在线av高清观看| cao死你这个sao货| 午夜福利成人在线免费观看| 91九色精品人成在线观看| 精品电影一区二区在线| 久久久久久大精品| 免费在线观看黄色视频的| 欧美大码av| 精品福利观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产成人精品无人区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 不卡av一区二区三区| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 香蕉丝袜av| 久久香蕉激情| 一区二区三区国产精品乱码| 男女午夜视频在线观看| 久久久国产精品麻豆| 久久久国产成人免费| 久久久久久久久免费视频了| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧美黑人欧美精品刺激| a在线观看视频网站| 国产精品 欧美亚洲| 手机成人av网站| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲欧美激情综合另类| 在线观看舔阴道视频| www.自偷自拍.com| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲人成电影免费在线| 精品卡一卡二卡四卡免费| 男人舔女人的私密视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产单亲对白刺激| 曰老女人黄片| 午夜福利欧美成人| 亚洲精华国产精华精| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲中文字幕日韩| 在线天堂中文资源库| 男人操女人黄网站| 欧美日本视频| 午夜福利欧美成人| 亚洲黑人精品在线| 成熟少妇高潮喷水视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品免费一区二区三区在线| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 欧美日韩黄片免| 88av欧美| 久久这里只有精品19| 国产1区2区3区精品| 悠悠久久av| 免费高清视频大片| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲av成人一区二区三| www日本黄色视频网| 国产高清有码在线观看视频 | 婷婷丁香在线五月| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美黑人欧美精品刺激| 午夜激情福利司机影院| 中文字幕精品免费在线观看视频| 免费在线观看影片大全网站| 日本 av在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产av一区在线观看免费| 国产1区2区3区精品| 少妇 在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产黄a三级三级三级人| 99精品久久久久人妻精品| 日日夜夜操网爽| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲av第一区精品v没综合| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲专区国产一区二区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 最近在线观看免费完整版| 欧美最黄视频在线播放免费| 无遮挡黄片免费观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产片内射在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国产国语露脸激情在线看| 久久久久久久久中文| 国产精品影院久久| 69av精品久久久久久| 国产激情久久老熟女| 一二三四在线观看免费中文在| 国产私拍福利视频在线观看| 女警被强在线播放| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲第一青青草原| 久久这里只有精品19| 欧美乱色亚洲激情| 精品国产美女av久久久久小说| 嫁个100分男人电影在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 男人舔奶头视频| 久久中文字幕一级| www.熟女人妻精品国产| 午夜视频精品福利| 性色av乱码一区二区三区2| 婷婷丁香在线五月| 亚洲电影在线观看av| 长腿黑丝高跟| 精品欧美一区二区三区在线| 国产黄片美女视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产国语露脸激情在线看| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产成人系列免费观看| 亚洲成av人片免费观看| 国产精品亚洲美女久久久| 国产又爽黄色视频| 后天国语完整版免费观看| 一级毛片精品| 成人三级黄色视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲成a人片在线一区二区| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲最大成人中文| 精品国产美女av久久久久小说| 好男人在线观看高清免费视频 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 一区二区三区高清视频在线| a级毛片a级免费在线| 国产单亲对白刺激| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲无线在线观看| 国产精品 欧美亚洲| 欧美日韩黄片免| 一个人免费在线观看的高清视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲av美国av| 国产单亲对白刺激| 亚洲精品中文字幕在线视频| 成人午夜高清在线视频 | 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 最新在线观看一区二区三区| 女同久久另类99精品国产91| 听说在线观看完整版免费高清| 久久久国产成人精品二区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 日韩视频一区二区在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 精品久久久久久,| 中亚洲国语对白在线视频| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 久久久久亚洲av毛片大全| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产av一区在线观看免费| 国产精品综合久久久久久久免费| 色播亚洲综合网| 怎么达到女性高潮| 欧美黑人精品巨大| e午夜精品久久久久久久| 精品福利观看| 久久中文字幕人妻熟女| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 午夜a级毛片| 国产熟女午夜一区二区三区| 757午夜福利合集在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日本成人三级电影网站| 日本免费a在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲 欧美一区二区三区| 成人三级黄色视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | www.999成人在线观看| 免费在线观看成人毛片| 亚洲中文字幕日韩| 最近最新中文字幕大全免费视频| 男男h啪啪无遮挡| 国产一区在线观看成人免费| 三级毛片av免费| 老司机在亚洲福利影院| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久热在线av| 免费看a级黄色片| 日韩高清综合在线| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 精品乱码久久久久久99久播| 婷婷丁香在线五月| 悠悠久久av| 满18在线观看网站| 亚洲 欧美一区二区三区| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产av又大| 中文字幕精品免费在线观看视频| 国产精品日韩av在线免费观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一级作爱视频免费观看| 精品不卡国产一区二区三区| 日本a在线网址| 亚洲人成网站高清观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 欧美激情高清一区二区三区| 黄色毛片三级朝国网站| 99热只有精品国产| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产成人欧美| a级毛片在线看网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 99热只有精品国产| 日本在线视频免费播放| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产熟女午夜一区二区三区| 熟女电影av网| 欧美zozozo另类| 国产99久久九九免费精品| 一a级毛片在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 老司机在亚洲福利影院| 男女之事视频高清在线观看| netflix在线观看网站| 91麻豆精品激情在线观看国产| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 中文字幕高清在线视频| 88av欧美| 中文字幕最新亚洲高清| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 99热6这里只有精品| 一级黄色大片毛片| av视频在线观看入口| 欧美最黄视频在线播放免费| 男女午夜视频在线观看| 两个人视频免费观看高清| 欧美日韩一级在线毛片| 18禁美女被吸乳视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 男人舔女人下体高潮全视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 观看免费一级毛片| 欧美成人午夜精品| 国产av一区二区精品久久| 欧美在线一区亚洲| 欧美黑人巨大hd| 亚洲男人的天堂狠狠| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 男男h啪啪无遮挡| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 两个人看的免费小视频| 亚洲电影在线观看av| 露出奶头的视频| 成人18禁在线播放| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| xxx96com| 免费电影在线观看免费观看| 成人18禁在线播放| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲成人久久性| 亚洲av熟女| 国产熟女xx| 亚洲精品粉嫩美女一区| 怎么达到女性高潮| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日本一本二区三区精品| 久久中文看片网| 亚洲avbb在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国内精品久久久久久久电影| 好男人电影高清在线观看| 一区二区三区精品91| 欧美日韩精品网址| 狠狠狠狠99中文字幕| 欧美日本视频| 嫩草影院精品99| 成人欧美大片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日本一本二区三区精品| 88av欧美| xxx96com| 99精品欧美一区二区三区四区| 国产精品久久电影中文字幕| av欧美777| 亚洲免费av在线视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲av电影在线进入| 免费观看精品视频网站| 哪里可以看免费的av片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 香蕉av资源在线| www.精华液| 国产又爽黄色视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 无遮挡黄片免费观看| 久久这里只有精品19| 国产精品综合久久久久久久免费| 1024手机看黄色片| 老司机靠b影院| 十八禁人妻一区二区| 午夜激情av网站| 最近最新中文字幕大全免费视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 人成视频在线观看免费观看| 老司机在亚洲福利影院| av超薄肉色丝袜交足视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品国产乱码久久久久久男人| 久久久久久久久中文| 国产精品九九99| 我的亚洲天堂| 免费高清视频大片| 一级毛片精品| 91成年电影在线观看| 国产激情欧美一区二区| 女性生殖器流出的白浆| 色综合婷婷激情| 国产亚洲欧美在线一区二区| 色综合婷婷激情| 成人免费观看视频高清| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 窝窝影院91人妻| 亚洲av成人av| 国产99久久九九免费精品| www.999成人在线观看| 亚洲在线自拍视频| 亚洲男人天堂网一区| 中文在线观看免费www的网站 | 麻豆av在线久日| 亚洲色图av天堂| 色播亚洲综合网| 曰老女人黄片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 亚洲熟女毛片儿| 久久久久国内视频| 动漫黄色视频在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 免费看a级黄色片| 在线看三级毛片| 99国产极品粉嫩在线观看| 久久这里只有精品19| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 狂野欧美激情性xxxx| 丁香欧美五月| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久天堂一区二区三区四区| 黄片播放在线免费| 国产精品九九99| 99国产精品99久久久久| 天天添夜夜摸| 日韩国内少妇激情av| 国产伦人伦偷精品视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲av五月六月丁香网| 视频在线观看一区二区三区| 国产99白浆流出| 好男人在线观看高清免费视频 | www国产在线视频色| 搡老岳熟女国产| 成熟少妇高潮喷水视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲专区字幕在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 亚洲专区字幕在线| 夜夜爽天天搞| 亚洲中文字幕日韩| 精品熟女少妇八av免费久了| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 人妻久久中文字幕网| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| www.熟女人妻精品国产| 天堂动漫精品| 午夜日韩欧美国产| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 美女国产高潮福利片在线看| 久久精品成人免费网站| 亚洲成人久久性| 99久久国产精品久久久| 久久人人精品亚洲av| 欧美中文日本在线观看视频| 男女下面进入的视频免费午夜 | 18禁黄网站禁片免费观看直播| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品免费一区二区三区在线| 我的亚洲天堂| 免费高清在线观看日韩| 超碰成人久久| 欧美黑人巨大hd| 午夜两性在线视频| 欧美乱妇无乱码| 午夜福利高清视频| 久久久国产成人精品二区| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精品永久免费网站| 长腿黑丝高跟| 国产熟女xx| 国产成人精品久久二区二区91| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 青草久久国产| 男人舔女人的私密视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 在线观看一区二区三区| 午夜成年电影在线免费观看| 国产精品二区激情视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 黄频高清免费视频| 女同久久另类99精品国产91| 99精品久久久久人妻精品| 婷婷精品国产亚洲av在线| 婷婷丁香在线五月| 99热只有精品国产| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 又大又爽又粗| 男人舔女人的私密视频| 婷婷精品国产亚洲av| 又紧又爽又黄一区二区| 成人av一区二区三区在线看| 免费搜索国产男女视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 欧美在线黄色| 国产区一区二久久| 色哟哟哟哟哟哟| www.www免费av| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 在线免费观看的www视频| 校园春色视频在线观看| 午夜影院日韩av| 久久精品91无色码中文字幕| 最新美女视频免费是黄的| 999久久久国产精品视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 99精品在免费线老司机午夜| 黄色毛片三级朝国网站| 看片在线看免费视频| 亚洲午夜理论影院| 国产熟女xx| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 一区二区日韩欧美中文字幕| 最近在线观看免费完整版| 亚洲国产精品合色在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 高清在线国产一区| av天堂在线播放| 久久精品91无色码中文字幕| netflix在线观看网站| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | xxxwww97欧美| 国产亚洲精品av在线| 啦啦啦免费观看视频1| 国产精品久久视频播放| 久久热在线av| 自线自在国产av| cao死你这个sao货| 正在播放国产对白刺激| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 免费高清在线观看日韩| 精品久久蜜臀av无| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 色综合站精品国产| 国产视频内射| 一级a爱视频在线免费观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久99久视频精品免费| 黑人操中国人逼视频| 久久天堂一区二区三区四区| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲黑人精品在线| 精品一区二区三区av网在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 亚洲成人久久爱视频| 超碰成人久久| 国产亚洲欧美在线一区二区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 12—13女人毛片做爰片一| 精品免费久久久久久久清纯| 精品久久久久久久久久久久久 | 一级a爱片免费观看的视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 美国免费a级毛片| 国产精品久久久久久精品电影 | 在线观看免费视频日本深夜| 久久中文字幕人妻熟女| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久久久久人人人人人| 人成视频在线观看免费观看| 成人精品一区二区免费| 在线观看一区二区三区| 久久久国产成人免费| 手机成人av网站| 视频区欧美日本亚洲| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 欧美又色又爽又黄视频| 一本久久中文字幕| 超碰成人久久| 99在线人妻在线中文字幕| 国产av一区在线观看免费| 91字幕亚洲| 中亚洲国语对白在线视频| 精品高清国产在线一区| avwww免费| 十分钟在线观看高清视频www| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久久水蜜桃国产精品网| 最新在线观看一区二区三区| ponron亚洲| 一区二区三区精品91| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产精品二区激情视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产免费av片在线观看野外av| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 最好的美女福利视频网| 久99久视频精品免费| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 欧美性长视频在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 国内精品久久久久精免费| 国产精品免费一区二区三区在线| 特大巨黑吊av在线直播 | 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 色综合亚洲欧美另类图片| 99热这里只有精品一区 | 一级片免费观看大全| 一级a爱视频在线免费观看| 午夜福利在线观看吧| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美性长视频在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 淫秽高清视频在线观看| 91在线观看av| 午夜亚洲福利在线播放| 又黄又爽又免费观看的视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 精品福利观看| 麻豆av在线久日| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| av视频在线观看入口| 亚洲专区字幕在线| 亚洲av电影在线进入| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 老司机福利观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲欧美激情综合另类| 好男人电影高清在线观看| 久9热在线精品视频| 不卡一级毛片| 一边摸一边抽搐一进一小说| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 天天一区二区日本电影三级| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 精品国产国语对白av| 香蕉丝袜av| 一二三四在线观看免费中文在| 欧美色视频一区免费| 日韩欧美 国产精品| 99精品久久久久人妻精品| 国产成人欧美| tocl精华| 国产高清视频在线播放一区| 99精品久久久久人妻精品| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲精品美女久久av网站| 日韩大尺度精品在线看网址| 十八禁网站免费在线| 免费观看精品视频网站| 在线天堂中文资源库| 成人一区二区视频在线观看| 天堂√8在线中文| 亚洲精品av麻豆狂野| 岛国视频午夜一区免费看|