六月雪水提取物促凝血作用及機(jī)制的研究（Ⅱ）

鄭志燕++++鐘海利+++++廖細(xì)平+++++黃德強(qiáng)+++++張世琨

[摘要] 目的 研究六月雪水提取物促凝血作用及機(jī)制的影響。 方法 將清潔級(jí)SD大鼠45只，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、低劑量六月雪水提取物組（1.5 g/kg）、高劑量六月雪水提取物組（3.0 g/kg）。采用凝血因子分析儀測(cè)定血漿纖維蛋白原、活化部分凝血活酶時(shí)間和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值。 結(jié)果 與生理鹽水對(duì)照組比較，低、高劑量六月雪水提取物能顯著升高血漿纖維蛋白原水平（P<0.05，P<0.01），且顯著縮短活化部分凝血活酶時(shí)間（P<0.05，P<0.01）和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值（P<0.05，P<0.01）。 結(jié)論 六月雪水提取物具有明顯的促進(jìn)血液凝固作用，其作用機(jī)制可能與血漿纖維蛋白原升高、活化部分凝血活酶時(shí)間降低和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值降低有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 六月雪水提取物；血漿纖維蛋白原；凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值；活化部分凝血活酶時(shí)間

[中圖分類號(hào)] R965.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）10（b）-0012-03

六月雪為民間常用草藥，一直用于治療病毒性肝炎及肝硬化，為茜草科六月雪屬植物六月雪[Serissa serissoides （DC.）Druce（SSD）][1]。研究顯示，六月雪含有多種丙烯苯并呋喃類化合物以及β-谷甾醇和豆甾醇[2]。有研究顯示，六月雪對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃黏膜損傷具有明顯的保護(hù)、抑菌及提高免疫功能等作用[3-7]，復(fù)方六月雪還具有體外抗HBV作用和治療腎臟疾病的功能[8-9]。課題組已經(jīng)報(bào)道了六月雪水提取物的促凝血作用及機(jī)制[10]，現(xiàn)繼續(xù)報(bào)道關(guān)于其促凝血作用及機(jī)制的研究。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 六月雪水提取物的制備 取干燥六月雪0.3 kg，用適量雙蒸水（過(guò)液面2 cm）浸泡24 h，次日煮沸2次，30 min/次，過(guò)濾，合并濾液并濃縮至600 ml左右，冷卻后加3倍量95%的乙醇，混勻后放冰箱靜置過(guò)夜，次日減壓過(guò)濾，濾液繼續(xù)濃縮至300 ml，使藥液為相當(dāng)于生藥1.0 g/ml。調(diào)整pH為7.0，置冰箱中備用。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 健康成年SD大鼠（購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司）45只，體重300～400 g，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組5只。

1.1.3 藥品與試劑 水合氯醛（青島高昌益網(wǎng)絡(luò)科技有限公司德源化工，批號(hào)：20110407）；枸櫞酸鈉（1：9）真空采血管（江西富爾康實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20110903）。

1.1.4 儀器 凝血因子分析儀（美國(guó)海倫娜）、KDC-2046低速冷凍離心機(jī)、日本日立7600-020+1SE全自動(dòng)生化分析儀，LG-PABER血小板聚集器凝血因子分析儀等。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 大鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、低劑量六月雪水提取物組（1.5 g/kg）、高劑量六月雪水提取物組（3.0 g/kg）。高、低劑量組每天以相應(yīng)量的藥物灌胃，鹽水對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)5 d。

1.2.2 方法[11-12] 末次給藥后1 h，從大鼠心臟取血，分離血漿，置離心管中，56℃加熱10 min，然后3000 r/min離心10 min，參照LG-PABER凝血因子分析儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定，記錄血漿纖維蛋白原水平。

從大鼠心臟取血，置入含3.8%枸櫞酸鈉的離心管中，混勻后以3000 r/min的速度離心10 min，離心后用微量進(jìn)樣器分別取所需血漿量，參照LG-PABER凝血因子分析儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定，記錄活化部分凝血活酶時(shí)間。

取待測(cè)血漿0.1 ml，37℃水浴孵育3 min，加0.2 ml凝血活酶，混勻，用秒表記錄凝固時(shí)間，即為PT值（s）。每個(gè)樣品重復(fù)實(shí)驗(yàn)5次，取其平均值。然后按公式INR=（PTtest/PTnormal）ISI（其中ISI為國(guó)際敏感指數(shù)）計(jì)算凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 六月雪水提取物對(duì)血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時(shí)間的影響

1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物均能顯著升高大鼠血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時(shí)間，且有一定的劑量依賴性（表1）。

表1 六月雪水提取物對(duì)血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時(shí)間的影響（x±s，n=5）

與生理鹽水組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.2 六月雪水提取物對(duì)凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值的影響

1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物能顯著降低凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值，且有一定的劑量依賴性（圖1）。

圖1 六月雪水提取物對(duì)凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值的影響

與生理鹽水組比較，*P<0.05，**P<0.01，n=5

3 討論

凝血過(guò)程可由“內(nèi)源途徑”和“外源途徑”引發(fā)，是一個(gè)多因子參與的復(fù)雜過(guò)程，同時(shí)凝血時(shí)間和凝血酶原時(shí)間可分別反映”內(nèi)源途徑”和”外源途徑”的功能狀況，纖維蛋白降解也是體內(nèi)重要的抗凝血過(guò)程之一。

六月雪為茜草科六月雪屬植物，是民間常用草藥。課題組已對(duì)六月雪水提取物進(jìn)行了促凝血作用及機(jī)制的研究，前期研究顯示，六月雪水提取物能明顯縮短體外凝血時(shí)間、血漿凝血酶時(shí)間，還可以減小凝血酶原時(shí)間，延長(zhǎng)優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間[10]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上繼續(xù)深入研究其對(duì)血液凝固的影響，結(jié)果顯示六月雪水提取物具有明顯的促進(jìn)血液凝固作用。

本研究結(jié)果顯示，六月雪水提取物能明顯升高血漿纖維蛋白原，顯著降低活化部分凝血活酶時(shí)間和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值，提示六月雪水提取物既能影響內(nèi)源性凝血途徑，又能作用于外源性凝血途徑，其作用機(jī)制可能與上述因素有關(guān)。六月雪促凝血作用的有效成分還有待進(jìn)一步的研究。

致謝：感謝贛南醫(yī)學(xué)院曾靖教授對(duì)論文的指導(dǎo)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 謝宗萬(wàn).全國(guó)中草藥匯編[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：207.

[2] 韋萬(wàn)興，黃美艷.六月雪化學(xué)成分研究[J].廣西大學(xué)學(xué)報(bào)·自然科學(xué)版，2008，33（2）：148-150.

[3] 劉敏，鄧兆群，屈雪菊，等.六月雪的抑菌作用[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)·醫(yī)學(xué)版，2002，23（2）：167-168.

[4] 范小娜，李洪亮，肖海，等.二味中草藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃黏膜損傷的保護(hù)作用[J].遼寧中醫(yī)雜志，2007，34（11）：1648-1649.

[5] 李洪亮，程齊來(lái)，范小娜，等.六月雪水提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃黏膜損傷的修復(fù)作用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（2）：333-334.

[6] 王紅愛(ài)，黃位耀，張?jiān)?，?六月雪不同組分提取物的抗菌解熱作用研究[J].臨床合理用藥雜志，2011，4（29）：3-5.

[7] 朱秋萍，李洪亮，范小娜，等.六月雪提取物對(duì)小鼠免疫作用的影響[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，27（1）：11-12.

[8] 楊霞芳，張士軍，黃春喜，等.復(fù)方六月雪體外抗HBV的實(shí)驗(yàn)研究[J].內(nèi)科，2007，2（3）：317-319.

[9] 孫響波，于妮娜.六月雪治療腎臟疾病探源[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013（10）：127-128.

[10] 鐘海利，鄭志燕，廖細(xì)平，等.六月雪水提取物促凝血作用及機(jī)制的研究（Ⅰ）[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2014，21（15）：11-13.

[11] 趙欣宇，宋鑒清，張麗霞，等.標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)凝血酶原時(shí)間和活化的部分凝血活酶時(shí)間檢測(cè)結(jié)果的影響[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，41（7）：656-658.

[12] 蔣義，郁施青，安邦權(quán)，等.4種凝血機(jī)制抗凝管抗凝效果對(duì)比研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（9）：1150-1151.

（收稿日期：2014-06-11 本文編輯：祁海文）

[摘要] 目的 研究六月雪水提取物促凝血作用及機(jī)制的影響。 方法 將清潔級(jí)SD大鼠45只，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、低劑量六月雪水提取物組（1.5 g/kg）、高劑量六月雪水提取物組（3.0 g/kg）。采用凝血因子分析儀測(cè)定血漿纖維蛋白原、活化部分凝血活酶時(shí)間和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值。 結(jié)果 與生理鹽水對(duì)照組比較，低、高劑量六月雪水提取物能顯著升高血漿纖維蛋白原水平（P<0.05，P<0.01），且顯著縮短活化部分凝血活酶時(shí)間（P<0.05，P<0.01）和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值（P<0.05，P<0.01）。 結(jié)論 六月雪水提取物具有明顯的促進(jìn)血液凝固作用，其作用機(jī)制可能與血漿纖維蛋白原升高、活化部分凝血活酶時(shí)間降低和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值降低有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 六月雪水提取物；血漿纖維蛋白原；凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值；活化部分凝血活酶時(shí)間

[中圖分類號(hào)] R965.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）10（b）-0012-03

六月雪為民間常用草藥，一直用于治療病毒性肝炎及肝硬化，為茜草科六月雪屬植物六月雪[Serissa serissoides （DC.）Druce（SSD）][1]。研究顯示，六月雪含有多種丙烯苯并呋喃類化合物以及β-谷甾醇和豆甾醇[2]。有研究顯示，六月雪對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃黏膜損傷具有明顯的保護(hù)、抑菌及提高免疫功能等作用[3-7]，復(fù)方六月雪還具有體外抗HBV作用和治療腎臟疾病的功能[8-9]。課題組已經(jīng)報(bào)道了六月雪水提取物的促凝血作用及機(jī)制[10]，現(xiàn)繼續(xù)報(bào)道關(guān)于其促凝血作用及機(jī)制的研究。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 六月雪水提取物的制備 取干燥六月雪0.3 kg，用適量雙蒸水（過(guò)液面2 cm）浸泡24 h，次日煮沸2次，30 min/次，過(guò)濾，合并濾液并濃縮至600 ml左右，冷卻后加3倍量95%的乙醇，混勻后放冰箱靜置過(guò)夜，次日減壓過(guò)濾，濾液繼續(xù)濃縮至300 ml，使藥液為相當(dāng)于生藥1.0 g/ml。調(diào)整pH為7.0，置冰箱中備用。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 健康成年SD大鼠（購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司）45只，體重300～400 g，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組5只。

1.1.3 藥品與試劑 水合氯醛（青島高昌益網(wǎng)絡(luò)科技有限公司德源化工，批號(hào)：20110407）；枸櫞酸鈉（1：9）真空采血管（江西富爾康實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20110903）。

1.1.4 儀器 凝血因子分析儀（美國(guó)海倫娜）、KDC-2046低速冷凍離心機(jī)、日本日立7600-020+1SE全自動(dòng)生化分析儀，LG-PABER血小板聚集器凝血因子分析儀等。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 大鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、低劑量六月雪水提取物組（1.5 g/kg）、高劑量六月雪水提取物組（3.0 g/kg）。高、低劑量組每天以相應(yīng)量的藥物灌胃，鹽水對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)5 d。

1.2.2 方法[11-12] 末次給藥后1 h，從大鼠心臟取血，分離血漿，置離心管中，56℃加熱10 min，然后3000 r/min離心10 min，參照LG-PABER凝血因子分析儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定，記錄血漿纖維蛋白原水平。

從大鼠心臟取血，置入含3.8%枸櫞酸鈉的離心管中，混勻后以3000 r/min的速度離心10 min，離心后用微量進(jìn)樣器分別取所需血漿量，參照LG-PABER凝血因子分析儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定，記錄活化部分凝血活酶時(shí)間。

取待測(cè)血漿0.1 ml，37℃水浴孵育3 min，加0.2 ml凝血活酶，混勻，用秒表記錄凝固時(shí)間，即為PT值（s）。每個(gè)樣品重復(fù)實(shí)驗(yàn)5次，取其平均值。然后按公式INR=（PTtest/PTnormal）ISI（其中ISI為國(guó)際敏感指數(shù)）計(jì)算凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 六月雪水提取物對(duì)血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時(shí)間的影響

1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物均能顯著升高大鼠血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時(shí)間，且有一定的劑量依賴性（表1）。

表1 六月雪水提取物對(duì)血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時(shí)間的影響（x±s，n=5）

與生理鹽水組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.2 六月雪水提取物對(duì)凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值的影響

1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物能顯著降低凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值，且有一定的劑量依賴性（圖1）。

圖1 六月雪水提取物對(duì)凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值的影響

與生理鹽水組比較，*P<0.05，**P<0.01，n=5

3 討論

凝血過(guò)程可由“內(nèi)源途徑”和“外源途徑”引發(fā)，是一個(gè)多因子參與的復(fù)雜過(guò)程，同時(shí)凝血時(shí)間和凝血酶原時(shí)間可分別反映”內(nèi)源途徑”和”外源途徑”的功能狀況，纖維蛋白降解也是體內(nèi)重要的抗凝血過(guò)程之一。

六月雪為茜草科六月雪屬植物，是民間常用草藥。課題組已對(duì)六月雪水提取物進(jìn)行了促凝血作用及機(jī)制的研究，前期研究顯示，六月雪水提取物能明顯縮短體外凝血時(shí)間、血漿凝血酶時(shí)間，還可以減小凝血酶原時(shí)間，延長(zhǎng)優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間[10]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上繼續(xù)深入研究其對(duì)血液凝固的影響，結(jié)果顯示六月雪水提取物具有明顯的促進(jìn)血液凝固作用。

本研究結(jié)果顯示，六月雪水提取物能明顯升高血漿纖維蛋白原，顯著降低活化部分凝血活酶時(shí)間和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值，提示六月雪水提取物既能影響內(nèi)源性凝血途徑，又能作用于外源性凝血途徑，其作用機(jī)制可能與上述因素有關(guān)。六月雪促凝血作用的有效成分還有待進(jìn)一步的研究。

致謝：感謝贛南醫(yī)學(xué)院曾靖教授對(duì)論文的指導(dǎo)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 謝宗萬(wàn).全國(guó)中草藥匯編[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：207.

[2] 韋萬(wàn)興，黃美艷.六月雪化學(xué)成分研究[J].廣西大學(xué)學(xué)報(bào)·自然科學(xué)版，2008，33（2）：148-150.

[3] 劉敏，鄧兆群，屈雪菊，等.六月雪的抑菌作用[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)·醫(yī)學(xué)版，2002，23（2）：167-168.

[4] 范小娜，李洪亮，肖海，等.二味中草藥對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃黏膜損傷的保護(hù)作用[J].遼寧中醫(yī)雜志，2007，34（11）：1648-1649.

[5] 李洪亮，程齊來(lái)，范小娜，等.六月雪水提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃黏膜損傷的修復(fù)作用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（2）：333-334.

[6] 王紅愛(ài)，黃位耀，張?jiān)?，?六月雪不同組分提取物的抗菌解熱作用研究[J].臨床合理用藥雜志，2011，4（29）：3-5.

[7] 朱秋萍，李洪亮，范小娜，等.六月雪提取物對(duì)小鼠免疫作用的影響[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，27（1）：11-12.

[8] 楊霞芳，張士軍，黃春喜，等.復(fù)方六月雪體外抗HBV的實(shí)驗(yàn)研究[J].內(nèi)科，2007，2（3）：317-319.

[9] 孫響波，于妮娜.六月雪治療腎臟疾病探源[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013（10）：127-128.

[10] 鐘海利，鄭志燕，廖細(xì)平，等.六月雪水提取物促凝血作用及機(jī)制的研究（Ⅰ）[J].中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2014，21（15）：11-13.

[11] 趙欣宇，宋鑒清，張麗霞，等.標(biāo)本放置時(shí)間對(duì)凝血酶原時(shí)間和活化的部分凝血活酶時(shí)間檢測(cè)結(jié)果的影響[J].中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，41（7）：656-658.

[12] 蔣義，郁施青，安邦權(quán)，等.4種凝血機(jī)制抗凝管抗凝效果對(duì)比研究[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（9）：1150-1151.

（收稿日期：2014-06-11 本文編輯：祁海文）

[摘要] 目的 研究六月雪水提取物促凝血作用及機(jī)制的影響。 方法 將清潔級(jí)SD大鼠45只，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、低劑量六月雪水提取物組（1.5 g/kg）、高劑量六月雪水提取物組（3.0 g/kg）。采用凝血因子分析儀測(cè)定血漿纖維蛋白原、活化部分凝血活酶時(shí)間和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值。 結(jié)果 與生理鹽水對(duì)照組比較，低、高劑量六月雪水提取物能顯著升高血漿纖維蛋白原水平（P<0.05，P<0.01），且顯著縮短活化部分凝血活酶時(shí)間（P<0.05，P<0.01）和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值（P<0.05，P<0.01）。 結(jié)論 六月雪水提取物具有明顯的促進(jìn)血液凝固作用，其作用機(jī)制可能與血漿纖維蛋白原升高、活化部分凝血活酶時(shí)間降低和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值降低有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 六月雪水提取物；血漿纖維蛋白原；凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值；活化部分凝血活酶時(shí)間

[中圖分類號(hào)] R965.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）10（b）-0012-03

六月雪為民間常用草藥，一直用于治療病毒性肝炎及肝硬化，為茜草科六月雪屬植物六月雪[Serissa serissoides （DC.）Druce（SSD）][1]。研究顯示，六月雪含有多種丙烯苯并呋喃類化合物以及β-谷甾醇和豆甾醇[2]。有研究顯示，六月雪對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃黏膜損傷具有明顯的保護(hù)、抑菌及提高免疫功能等作用[3-7]，復(fù)方六月雪還具有體外抗HBV作用和治療腎臟疾病的功能[8-9]。課題組已經(jīng)報(bào)道了六月雪水提取物的促凝血作用及機(jī)制[10]，現(xiàn)繼續(xù)報(bào)道關(guān)于其促凝血作用及機(jī)制的研究。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 六月雪水提取物的制備 取干燥六月雪0.3 kg，用適量雙蒸水（過(guò)液面2 cm）浸泡24 h，次日煮沸2次，30 min/次，過(guò)濾，合并濾液并濃縮至600 ml左右，冷卻后加3倍量95%的乙醇，混勻后放冰箱靜置過(guò)夜，次日減壓過(guò)濾，濾液繼續(xù)濃縮至300 ml，使藥液為相當(dāng)于生藥1.0 g/ml。調(diào)整pH為7.0，置冰箱中備用。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物 健康成年SD大鼠（購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司）45只，體重300～400 g，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組5只。

1.1.3 藥品與試劑 水合氯醛（青島高昌益網(wǎng)絡(luò)科技有限公司德源化工，批號(hào)：20110407）；枸櫞酸鈉（1：9）真空采血管（江西富爾康實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20110903）。

1.1.4 儀器 凝血因子分析儀（美國(guó)海倫娜）、KDC-2046低速冷凍離心機(jī)、日本日立7600-020+1SE全自動(dòng)生化分析儀，LG-PABER血小板聚集器凝血因子分析儀等。

1.2 方法

1.2.1 分組及給藥 大鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、低劑量六月雪水提取物組（1.5 g/kg）、高劑量六月雪水提取物組（3.0 g/kg）。高、低劑量組每天以相應(yīng)量的藥物灌胃，鹽水對(duì)照組給予等量生理鹽水灌胃，1次/d，連續(xù)5 d。

1.2.2 方法[11-12] 末次給藥后1 h，從大鼠心臟取血，分離血漿，置離心管中，56℃加熱10 min，然后3000 r/min離心10 min，參照LG-PABER凝血因子分析儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定，記錄血漿纖維蛋白原水平。

從大鼠心臟取血，置入含3.8%枸櫞酸鈉的離心管中，混勻后以3000 r/min的速度離心10 min，離心后用微量進(jìn)樣器分別取所需血漿量，參照LG-PABER凝血因子分析儀操作規(guī)程進(jìn)行測(cè)定，記錄活化部分凝血活酶時(shí)間。

取待測(cè)血漿0.1 ml，37℃水浴孵育3 min，加0.2 ml凝血活酶，混勻，用秒表記錄凝固時(shí)間，即為PT值（s）。每個(gè)樣品重復(fù)實(shí)驗(yàn)5次，取其平均值。然后按公式INR=（PTtest/PTnormal）ISI（其中ISI為國(guó)際敏感指數(shù)）計(jì)算凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 六月雪水提取物對(duì)血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時(shí)間的影響

1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物均能顯著升高大鼠血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時(shí)間，且有一定的劑量依賴性（表1）。

表1 六月雪水提取物對(duì)血漿纖維蛋白原水平和活化部分凝血活酶時(shí)間的影響（x±s，n=5）

與生理鹽水組比較，*P<0.05，**P<0.01

2.2 六月雪水提取物對(duì)凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值的影響

1.5、3.0 g/kg的六月雪水提取物能顯著降低凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值，且有一定的劑量依賴性（圖1）。

圖1 六月雪水提取物對(duì)凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值的影響

與生理鹽水組比較，*P<0.05，**P<0.01，n=5

3 討論

凝血過(guò)程可由“內(nèi)源途徑”和“外源途徑”引發(fā)，是一個(gè)多因子參與的復(fù)雜過(guò)程，同時(shí)凝血時(shí)間和凝血酶原時(shí)間可分別反映”內(nèi)源途徑”和”外源途徑”的功能狀況，纖維蛋白降解也是體內(nèi)重要的抗凝血過(guò)程之一。

六月雪為茜草科六月雪屬植物，是民間常用草藥。課題組已對(duì)六月雪水提取物進(jìn)行了促凝血作用及機(jī)制的研究，前期研究顯示，六月雪水提取物能明顯縮短體外凝血時(shí)間、血漿凝血酶時(shí)間，還可以減小凝血酶原時(shí)間，延長(zhǎng)優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間[10]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上繼續(xù)深入研究其對(duì)血液凝固的影響，結(jié)果顯示六月雪水提取物具有明顯的促進(jìn)血液凝固作用。

本研究結(jié)果顯示，六月雪水提取物能明顯升高血漿纖維蛋白原，顯著降低活化部分凝血活酶時(shí)間和凝血酶原時(shí)間國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)比值，提示六月雪水提取物既能影響內(nèi)源性凝血途徑，又能作用于外源性凝血途徑，其作用機(jī)制可能與上述因素有關(guān)。六月雪促凝血作用的有效成分還有待進(jìn)一步的研究。

致謝：感謝贛南醫(yī)學(xué)院曾靖教授對(duì)論文的指導(dǎo)。

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（收稿日期：2014-06-11 本文編輯：祁海文）