五加生化緩釋片治療功能性子宮出血的研究

王雪+李鐵男+張寧+李建民+徐艷明+王業(yè)秋+王發(fā)善

[摘要] 目的 研究五加生化緩釋片對(duì)功能性子宮出血的作用及機(jī)制。 方法 選取40只雌性KM小鼠，隨機(jī)分成空白組、產(chǎn)復(fù)康顆粒組以及五加生化緩釋片低、中、高劑量組，每組8只，采用斷尾法和毛細(xì)管凝血法測(cè)定小鼠的出血及凝血時(shí)間。另取早孕SD大鼠30只，隨機(jī)分成模型組（造模方法：灌服米非司酮和米索前列醇造成不完全流產(chǎn)模型）、產(chǎn)復(fù)康顆粒組以及五加生化緩釋片低、中、高劑量組，每組6只，采用毛細(xì)玻璃管法測(cè)定出血時(shí)間，采用剪尾法測(cè)定凝血時(shí)間，采用酶標(biāo)儀對(duì)置入陰道棉球的血浸漬液進(jìn)行子宮出血量測(cè)定，觀察五加生化緩釋片對(duì)該模型大鼠出、凝血時(shí)間及子宮出血量的影響。 結(jié)果 與空白組比較，五加生化緩釋片高、中、低劑量組能明顯縮短小鼠的出血及凝血時(shí)間（P<0.01、P<0.05）；而與產(chǎn)復(fù)康顆粒組比較，五加生化緩釋片高、中劑量組能明顯縮短小鼠的出血及凝血時(shí)間（P<0.01）；與空白組比較，五加生化緩釋片高、中、低劑量組能明顯減少大鼠的子宮出血量（P<0.01、P<0.05）；與產(chǎn)婦康顆粒組比較，五加生化緩釋片高劑量組能明顯減少大鼠的子宮出血量（P<0.01）。 結(jié)論 五加生化緩釋片能顯著減少大鼠的子宮出血量。

[關(guān)鍵詞] 五加生化緩釋片；出血時(shí)間；凝血時(shí)間；子宮出血量

[中圖分類(lèi)號(hào)] R711.52 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）10（a）-0008-03

功能性子宮出血是指下丘腦-垂體-卵巢軸神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)制失常所致的子宮異常出血，此類(lèi)疾病的主要癥狀表現(xiàn)為月經(jīng)周期不規(guī)律、經(jīng)量過(guò)多、不規(guī)則出血等[1-2]，嚴(yán)重影響患者生活和工作質(zhì)量，本研究主要探討五加生化緩釋片對(duì)功能性子宮出血的作用及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，雌性，購(gòu)自中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；SD大鼠，雌鼠30只、雄鼠60只，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑

五加生化緩釋片由佳木斯多多藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；產(chǎn)婦康顆粒由深圳三順制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：110714；米非司酮由北京紫竹藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：110301；米索前列醇由北京紫竹藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)110121；NaOH由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20100114。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

玻片、秒表、毛細(xì)玻璃管，分析天平（上海精科），高速冷凍離心機(jī)（上海浦東天本離心機(jī)械有限公司），酶標(biāo)儀（美國(guó)BioTek公司）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 五加生化緩釋片對(duì)小鼠出血及凝血時(shí)間的影響[3] 取40只健康KM小鼠，體重17～22 g，按體重隨機(jī)分成5組，分別為空白組、產(chǎn)復(fù)欣顆粒組（陽(yáng)性對(duì)照組）以及五加生化緩釋片高、中、低劑量組。各劑量組每日灌胃給藥1次，空白組給予等體積的生理鹽水，連續(xù)給藥1周，最后一次給藥30 min后將小鼠固定，用量尺測(cè)量鼠尾長(zhǎng)度并標(biāo)記，用剪刀在小鼠尾部4 mm處剪斷，血液流出時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)，每隔半分鐘用濾紙吸取血滴1次，直至無(wú)血液流出計(jì)為小鼠尾部的出血時(shí)間。凝血時(shí)間的測(cè)定是末次給藥30 min后，將內(nèi)徑10 mm、長(zhǎng)10 cm的毛細(xì)玻管自眼內(nèi)眥插入，血液注滿后取出，毛細(xì)管中血液凝固所用的時(shí)間即為小鼠的凝血時(shí)間。

1.4.2 造模[4] 篩選發(fā)情期的大鼠，按雌雄比例1∶2合籠，第2天早晨檢查陰道涂片，以發(fā)現(xiàn)陰道有精子者為妊娠第1天。每組均在第7天灌胃給予米非司酮溶液8.3 mg/kg（8：00）和米索前列醇溶液100 μg/kg（18：00），造成大鼠不完全流產(chǎn)的模型。

取上述模型大鼠30只，隨機(jī)分成5組（每組6只），分別為模型組、產(chǎn)復(fù)欣顆粒組（陽(yáng)性對(duì)照組）以及五加生化緩釋片高、中、低劑量組。在每只大鼠陰道內(nèi)置入消毒棉球1個(gè)（棉球重75～90 mg），分別于次日8：00和18：00將棉球取出，同時(shí)更換新的棉球，將取出的棉球放入袋中密閉冷藏保存，連續(xù)上述操作14 d，每組大鼠每天均灌胃給藥1次，連續(xù)7 d。

大鼠子宮出血量的計(jì)算方法[4]：取大鼠靜脈血0.02 ml，加入0.05 mg/ml NaOH溶液4 ml中混勻。將每只大鼠的出血棉球放入燒杯內(nèi)，根據(jù)出血量加適量0.05 mg/ml NaOH浸泡擠壓搓洗棉球血漬，將浸提液倒入另一個(gè)燒杯內(nèi)保存，重復(fù)上述操作直至棉球無(wú)血漬為止。將先后所有浸提液混勻，記錄所用0.05 mg/ml NaOH的總量，取已過(guò)濾的浸提液，空白大鼠靜脈血的NaOH溶液各4 ml，以0.05 mg/ml NaOH溶液為空白對(duì)照，在546 nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度（OD）值。大鼠子宮出血量（ml）=尾靜脈血量0.02 ml×（子宮浸提液OD值×V2）/（尾靜脈血OD值×V1），其中V1=稀釋尾靜脈血所用NaOH溶液的量（ml）、V2=浸提子宮血所用NaOH溶液量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所得數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 五加生化緩釋片對(duì)小鼠出血及凝血時(shí)間的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，五加生化緩釋片高、中、低劑量組和產(chǎn)婦康顆粒組均能縮短小鼠的出血及凝血時(shí)間，與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且五加生化緩釋片高、中劑量組的小鼠出血時(shí)間明顯縮短（P<0.01）（表1）。

2.2 五加生化緩釋片對(duì)大鼠藥物流產(chǎn)模型子宮出血量的影響

五加生化緩釋片低、中、高劑量組及產(chǎn)復(fù)康顆粒組均能使大鼠子宮出血量減少，與空白組比較，五加生化緩釋片高、中、低劑量組均能明顯減少大鼠的子宮出血量（P<0.01、P<0.05）；與產(chǎn)婦康顆粒組比較，五加生化緩釋片高劑量組能明顯減少大鼠的子宮出血量（P<0.01）（表2）。

3 討論

五加生化膠囊是目前常用的劑型，主要由刺五加、當(dāng)歸、川芎、桃仁、甘草、炮姜等藥物組成，用于人工流產(chǎn)和藥物流產(chǎn)后不良刺激造成的機(jī)體失調(diào)狀態(tài)的改善，可以促進(jìn)機(jī)體康復(fù)[5-8]，但其作用機(jī)制不明確。本研究通過(guò)改變藥物劑型來(lái)探討五加生化緩釋片對(duì)功能性子宮出血的影響。

五加生化緩釋片是利用現(xiàn)代緩釋制劑技術(shù)開(kāi)發(fā)的緩釋制劑，其優(yōu)點(diǎn)是減少用藥劑量及給藥次數(shù)、減少藥物的不良反應(yīng)、提高生物利用度、適應(yīng)慢性病患者長(zhǎng)期用藥。其主要成分有阿魏酸、綠原酸和異嗪皮啶[9-12]。本研究結(jié)果表明，五加生化緩釋片能顯著縮短小鼠的出血及凝血時(shí)間，并且呈現(xiàn)劑量依賴性。五加生化緩釋片能顯著減少功能性子宮出血型大鼠的子宮出血量，其機(jī)制可能與五加生化緩釋片的止血作用有關(guān)，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 張國(guó)境，路欣，許晴，等.功能性子宮出血子宮內(nèi)膜血管變化的研究[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，26（2）：163-166.

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[4] 王曉東，趙軍寧，張白嘉，等.藥物致早孕大鼠子宮出血.模型的建立[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，1999，15（2）：182-183.

[5] 翟婷婷，孟昱瓊，丁麗仙.補(bǔ)腎活血方對(duì)大鼠藥物流產(chǎn)后陰道流血影響及動(dòng)情周期恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[J].山西醫(yī)藥雜志，2008，37（3）：240-242.

[6] 張鳳，董玉國(guó).五加生化膠囊藥理作用及臨床應(yīng)用[J].今日科苑，2009，13（8）：290-291.

[7] 張穎智，路娟，宋婷，等.五加生化膠囊對(duì)氣虛血瘀模型大鼠血液流變學(xué)和細(xì)胞內(nèi)皮因子的影響[J].中成藥，2013， 35（7）：1536-1539.

[8] 藥典委員會(huì).臨床用藥須知[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：553.

[9] 耿放，朱魁元，王發(fā)善，等.HPLC同時(shí)測(cè)定五加生化膠囊中3種有效成分的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012， 18（9）：109-111.

[10] 耿放，王發(fā)善，鄒韜博，等.五加生化膠囊UPLC-MS指紋圖譜研究[J].藥物分析雜志，2012，32（7）：1171-1175.

[11] 耿放，王發(fā)善，朱魁元，等.五加生化膠囊的GC-MS指紋圖譜研[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（16）：89-92.

[12] 耿放，朱魁元，王發(fā)善，等.五加生化膠囊的高效液相色譜指紋圖譜研究[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2012，28（3）：408-410.

（收稿日期：2014-07-28 本文編輯：林利利）

3 討論

五加生化膠囊是目前常用的劑型，主要由刺五加、當(dāng)歸、川芎、桃仁、甘草、炮姜等藥物組成，用于人工流產(chǎn)和藥物流產(chǎn)后不良刺激造成的機(jī)體失調(diào)狀態(tài)的改善，可以促進(jìn)機(jī)體康復(fù)[5-8]，但其作用機(jī)制不明確。本研究通過(guò)改變藥物劑型來(lái)探討五加生化緩釋片對(duì)功能性子宮出血的影響。

五加生化緩釋片是利用現(xiàn)代緩釋制劑技術(shù)開(kāi)發(fā)的緩釋制劑，其優(yōu)點(diǎn)是減少用藥劑量及給藥次數(shù)、減少藥物的不良反應(yīng)、提高生物利用度、適應(yīng)慢性病患者長(zhǎng)期用藥。其主要成分有阿魏酸、綠原酸和異嗪皮啶[9-12]。本研究結(jié)果表明，五加生化緩釋片能顯著縮短小鼠的出血及凝血時(shí)間，并且呈現(xiàn)劑量依賴性。五加生化緩釋片能顯著減少功能性子宮出血型大鼠的子宮出血量，其機(jī)制可能與五加生化緩釋片的止血作用有關(guān)，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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[9] 耿放，朱魁元，王發(fā)善，等.HPLC同時(shí)測(cè)定五加生化膠囊中3種有效成分的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012， 18（9）：109-111.

[10] 耿放，王發(fā)善，鄒韜博，等.五加生化膠囊UPLC-MS指紋圖譜研究[J].藥物分析雜志，2012，32（7）：1171-1175.

[11] 耿放，王發(fā)善，朱魁元，等.五加生化膠囊的GC-MS指紋圖譜研[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（16）：89-92.

[12] 耿放，朱魁元，王發(fā)善，等.五加生化膠囊的高效液相色譜指紋圖譜研究[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2012，28（3）：408-410.

（收稿日期：2014-07-28 本文編輯：林利利）

3 討論

五加生化膠囊是目前常用的劑型，主要由刺五加、當(dāng)歸、川芎、桃仁、甘草、炮姜等藥物組成，用于人工流產(chǎn)和藥物流產(chǎn)后不良刺激造成的機(jī)體失調(diào)狀態(tài)的改善，可以促進(jìn)機(jī)體康復(fù)[5-8]，但其作用機(jī)制不明確。本研究通過(guò)改變藥物劑型來(lái)探討五加生化緩釋片對(duì)功能性子宮出血的影響。

五加生化緩釋片是利用現(xiàn)代緩釋制劑技術(shù)開(kāi)發(fā)的緩釋制劑，其優(yōu)點(diǎn)是減少用藥劑量及給藥次數(shù)、減少藥物的不良反應(yīng)、提高生物利用度、適應(yīng)慢性病患者長(zhǎng)期用藥。其主要成分有阿魏酸、綠原酸和異嗪皮啶[9-12]。本研究結(jié)果表明，五加生化緩釋片能顯著縮短小鼠的出血及凝血時(shí)間，并且呈現(xiàn)劑量依賴性。五加生化緩釋片能顯著減少功能性子宮出血型大鼠的子宮出血量，其機(jī)制可能與五加生化緩釋片的止血作用有關(guān)，但具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

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[5] 翟婷婷，孟昱瓊，丁麗仙.補(bǔ)腎活血方對(duì)大鼠藥物流產(chǎn)后陰道流血影響及動(dòng)情周期恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[J].山西醫(yī)藥雜志，2008，37（3）：240-242.

[6] 張鳳，董玉國(guó).五加生化膠囊藥理作用及臨床應(yīng)用[J].今日科苑，2009，13（8）：290-291.

[7] 張穎智，路娟，宋婷，等.五加生化膠囊對(duì)氣虛血瘀模型大鼠血液流變學(xué)和細(xì)胞內(nèi)皮因子的影響[J].中成藥，2013， 35（7）：1536-1539.

[8] 藥典委員會(huì).臨床用藥須知[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：553.

[9] 耿放，朱魁元，王發(fā)善，等.HPLC同時(shí)測(cè)定五加生化膠囊中3種有效成分的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012， 18（9）：109-111.

[10] 耿放，王發(fā)善，鄒韜博，等.五加生化膠囊UPLC-MS指紋圖譜研究[J].藥物分析雜志，2012，32（7）：1171-1175.

[11] 耿放，王發(fā)善，朱魁元，等.五加生化膠囊的GC-MS指紋圖譜研[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（16）：89-92.

[12] 耿放，朱魁元，王發(fā)善，等.五加生化膠囊的高效液相色譜指紋圖譜研究[J].分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2012，28（3）：408-410.

（收稿日期：2014-07-28 本文編輯：林利利）