醋酸阿托西班注射液的處方工藝開發(fā)

姚志勇+李新宇+支欽

[摘要] 目的 改進醋酸阿托西班注射液處方并優(yōu)化生產(chǎn)工藝，以增加醋酸阿托西班注射液的穩(wěn)定性。 方法 以市售處方工藝為基礎(chǔ)，在其中分別加入不同種類的抗氧劑，得到醋酸阿托西班注射液樣品，將注射液樣品分別置于以下條件下：溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%和溫度（25±2）℃、相對濕度（60±5）%，進行加速試驗，分別在0、1、2、3、6個月取樣檢驗，通過測量外觀色澤、pH值、溶液澄清度、有關(guān)物質(zhì)、含量等指標和局部安全性考察，從而優(yōu)選出穩(wěn)定性較市售產(chǎn)品更好、使用安全的醋酸阿托西班注射液。 結(jié)果 經(jīng)加速試驗考察6個月，抗氧劑為0.1 g/100 ml亞硫酸氫鈉時，制備的醋酸阿托西班注射液與已上市的醋酸阿托西班注射液比較，外觀色澤、酸度、溶液澄清度指標相當，有關(guān)物質(zhì)與含量明顯優(yōu)于已上市產(chǎn)品，可于室溫下保存，穩(wěn)定性明顯增加。通過局部安全性試驗表明此注射劑無刺激性、致敏性和溶解性。 結(jié)論 該注射劑處方合理，制備工藝可行，產(chǎn)品安全，穩(wěn)定性高。

[關(guān)鍵詞] 醋酸阿托西班注射液；抗氧劑；制備工藝；穩(wěn)定性；安全性

[中圖分類號] R965.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）10（a）-0004-04

醋酸阿托西班是一種催產(chǎn)素類似物，為人工合成的環(huán)狀多肽，是子宮內(nèi)蛻膜、胎膜上受體的催產(chǎn)素競爭性拮抗劑，在臨床上被用于治療早產(chǎn)。醋酸阿托西班可劑量相關(guān)性地抑制宮縮，并使環(huán)狀肽催產(chǎn)素介導的前列腺素分泌減少，達到保胎的目的[1]。有研究報道，對13例早產(chǎn)婦女（28～36周孕齡）使用阿托西班治療，以10～100 μg/min的速率輸注1～10 h，在宮縮描記圖上觀察到有6例早產(chǎn)婦女子宮收縮顯著減少，阿托西班對母親或胎兒的心率以及母親的血壓無不良反應(yīng)[2]。另一報道對12例早產(chǎn)婦女（27～36周孕齡）使用阿托西班治療，以25～100 μg/min的速率輸注1.5～13.0 h，有6例患者取得了徹底安胎，阿托西班對母親和胎兒無不良反應(yīng)[3]。

已上市的醋酸阿托西班注射液只可于2～8℃保存，針對該問題，本研究加入抗氧劑以提高制劑的穩(wěn)定性，可在室溫下保存。因此，本研究對醋酸阿托西班注射液的處方及制備工藝進行了篩選，對其穩(wěn)定性進行了研究與評價，另外對優(yōu)化后的處方進行了動物局部安全性評價實驗。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫）；BT 125D型十萬分之一天平（上海精密科學儀器有限公司）；X0001SDP藥品穩(wěn)定性實驗箱（上海錫為科學儀器有限公司）。

醋酸阿托西班注射液（輝凌藥業(yè)，批號：AC0089G，規(guī)格：7.5 mg/ml∶5 ml），亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉均為分析純；醋酸阿托西班（自制）。

新西蘭兔，普通級，雌雄各半，體重2.0～2.5 kg（廣東省醫(yī)學實驗動物中心）；SD大鼠，普通級，雌雄各半，體重180～220 g（廣東省醫(yī)學實驗動物中心）。

2 方法與結(jié)果

2.1 醋酸阿托西班注射液的制備工藝初定

已上市的醋酸阿托西班注射液（生產(chǎn)廠家：Ferring Gmbh）的處方包含有7.5 mg/ml醋酸阿托西班，50 mg/ml甘露醇，用1 mol/L鹽酸調(diào)至pH 4.5，需于2～8℃保存，本研究針對該問題加入抗氧劑以提高制劑的穩(wěn)定性，使其質(zhì)量更穩(wěn)定，可在室溫下保存。經(jīng)過多次實驗優(yōu)化，初定的制備工藝：稱量市售制劑處方量的阿托西班、甘露醇、0.1 g/100 ml抗氧劑，用處方量80%注射用水室溫下攪拌至完全溶解，用鹽酸調(diào)pH至4.5，加注射用水定容至全量，攪拌均勻。注射液中加入0.05%活性炭，攪拌下吸附熱原30 min，脫炭過濾。濾液經(jīng)1 μm鈦棒過濾器過濾，再經(jīng)0.22 μm微孔濾膜除菌過濾，灌裝于7 ml滅菌西林瓶內(nèi)（5 ml/瓶），無菌條件下壓塞扎蓋。

2.2 醋酸阿托西班注射液的處方篩選

2.2.1 抗氧劑的選擇

為選擇合適的抗氧劑種類及濃度，進行了進一步的探討研究，經(jīng)過多次分析驗證[4-5]，抗氧劑選自0.1 g/100 ml亞硫酸氫鈉、0.1 g/100 ml焦亞硫酸鈉。

在已上市的醋酸阿托西班注射液中于無菌室分別加入不同種類的抗氧劑，得到醋酸阿托西班注射液樣品。

參照相關(guān)文獻[6]進行加速實驗，條件：①溫度（40±2）℃、相對濕度（75±5）%；②溫度（25±2）℃、相對濕度（60±5）%。分別在0、1、2、3、6個月取樣檢驗，通過測量外觀色澤、pH值、溶液澄清度、有關(guān)物質(zhì)、含量指標來考察已上市醋酸阿托西班注射液和自制的醋酸阿托西班注射液樣品的穩(wěn)定性，結(jié)果見圖1、圖2。

2.2.2 含量測定方法[7-9]

流動相A：25 mmol/L的磷酸二氫鉀，用30%三氟乙酸溶液調(diào)pH值至3.5；流動相B：乙腈∶甲醇=50∶50；梯度洗脫程序：B在15 min內(nèi)由40變至60；色譜柱：C18（5 μm，250 mm×4.6 mm）；波長220 nm，流速1.0 ml/min，柱溫：室溫；樣品配制：加注射用水配制成0.75 mg/ml的溶液；含量：每毫升含阿托西班應(yīng)為6.8～8.0 mg。

2.2.3 有關(guān)物質(zhì)測定方法[10]

用STPAK C18-ES色譜柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）或相當柱；以磷酸二氫鉀溶液（25 mmol/L磷酸二氫鉀溶液，用30%三氟乙酸溶液調(diào)pH值至3.5）作為流動相A；以乙腈∶甲醇（60∶40）作為流動相B；檢測波長為220 nm；流速為1.0 ml/min；柱溫為室溫；按表1進行梯度洗脫。理論塔板數(shù)按阿托西班峰計算應(yīng)>5000，阿托西班峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求，阿托西班峰的拖尾因子應(yīng)<2。

測定方法：取本品適量，加水稀釋制成每毫升中含阿托西班0.75 mg的溶液作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1 ml置于100 ml容量瓶中，加水定量稀釋至刻度作為對照品溶液。分別精密量取上述兩種溶液20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。按面積歸一化法計算，阿托西班有關(guān)物質(zhì)單雜不得>0.5%，其他雜質(zhì)總量不得>1.5%。

結(jié)果表明，經(jīng)加速試驗考察6個月，抗氧劑為0.1 g/100 ml亞硫酸氫鈉時，制備的醋酸阿托西班注射液與已上市的醋酸阿托西班注射液比較，外觀色澤、酸度、溶液澄清度指標相當，有關(guān)物質(zhì)與含量明顯好于已上市產(chǎn)品，可于室溫下保存，穩(wěn)定性明顯增加。抗氧劑為0.1 g/100 ml焦亞硫酸鈉，與已上市的醋酸阿托西班注射液比較，外觀色澤、酸度、溶液澄清度、有關(guān)物質(zhì)、含量與已上市的供試品相比，穩(wěn)定性沒有得到改善。

因此，最終抗氧劑選擇0.1 g/100 ml亞硫酸氫鈉，按照“2.1”項制備工藝制得醋酸阿托西班注射液，進行以下試驗。

2.3 醋酸阿托西班注射液的局部安全性考察

進行局部給藥毒性試驗，包括肌內(nèi)注射刺激性試驗、過敏性試驗及溶血性試驗[11-13]。

2.3.1 肌內(nèi)注射局部刺激反應(yīng)試驗

2.3.1.1 方法 取新西蘭兔6只，體重2.0～2.5 kg，分別于新西蘭兔左側(cè)股四頭肌處注射本品1 ml，右側(cè)注射同體積生理鹽水。于末次給藥48 h后取4只動物，用20%烏拉坦，劑量為5 ml/kg靜脈麻醉，解剖股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉的刺激反應(yīng)，余下2只動物于末次給藥后14 d再按上述方法進些剖解觀察。

2.3.1.2 結(jié)果 根據(jù)刺激反應(yīng)癥狀和評分標準，新西蘭兔肌內(nèi)注射醋酸阿托西班48 h后，給藥部位僅有輕度充血（直徑<0.5 cm），無明顯刺激反應(yīng)，其平均刺激反應(yīng)分值均<2.0，停藥后14 d，給藥部位亦無明顯刺激反應(yīng)，表明本研究制備的醋酸阿托西班注射液樣品無刺激性。

病理切片結(jié)果：給藥及停藥后，受試給藥組與對照組鏡下見細胞完整，橫紋清晰，未見細胞出現(xiàn)變性或壞死變化，間質(zhì)未見水腫及炎癥細胞浸潤，表明本研究制備的醋酸阿托西班注射液樣品肌內(nèi)注射無刺激性。

2.3.2 全身被動過敏試驗

2.3.2.1 方法 ①致敏：選取健康SD大鼠16只，體重180～220 g，隨機分成受試藥（批號：110301，規(guī)格：7.5 mg/ml∶5 ml，南京星銀藥業(yè)集團有限公司）低劑量組（6.6 mg/ml，0.5 ml/只）、受試藥高劑量組（13.2 mg/ml，0.5 ml/只）、生理鹽水陰性對照組和卵蛋白（Sigma產(chǎn)品，臨用前生理鹽水配制成10 mg/ml混懸液備用）陽性對照組（10 mg/ml，0.5 ml/只），每組4只。每組每只大鼠隔日腹腔注射完全氟式佐劑（規(guī)格：10 ml/瓶，批號：90007-81-2，Sigma化學試劑有限公司）（0.5 ml/只）及相應(yīng)的藥液一次，共注射5次。②抗血清制備：致敏末次注射后第10天眼眶取血，離心10 min，3000 r/min，分離血清，-20℃保存，2周內(nèi)備用。③觀察指標：被動致敏48 h后進行抗原攻擊，各組靜脈注射與致敏劑量相同的激發(fā)抗原加等量的0.5%伊文思染料進行激發(fā)30 min后，將動物處死，剪取背部皮膚，測量皮膚內(nèi)層的藍色斑點大小，直徑>5 mm者判定為陽性。

2.3.2.2 結(jié)果 陰性對照組、高劑量組、低劑量組均未見藍斑，陽性對照卵蛋白組藍斑直徑>5 mm，表明本研究制備的醋酸阿托西班注射液樣品不會引起大鼠被動皮膚過敏。

2.3.3 溶血性試驗

制備2%新西蘭兔紅細胞懸液。取試管7支，按表2加入各種液體。將各試管輕輕搖勻，置37℃恒溫水浴中孵育，觀察0.5、1、2、3、6 h的結(jié)果。

結(jié)果顯示，蒸餾水對照管在0.5 h完全溶血。生理鹽水和各醋酸阿托西班注射液在6 h內(nèi)均無溶血現(xiàn)象。輕輕振搖，生理鹽水和各濃度醋酸阿托西班注射液管底沉積的紅細胞均能完全分散，表明本研究制備的醋酸阿托西班注射液樣品無紅細胞凝集反應(yīng)。

肌肉刺激性、過敏性及體外溶血性實驗表明，本研究制備的醋酸阿托西班注射液樣品無明顯的刺激性、過敏性，也不會引起溶血反應(yīng)，表明本研究制備的醋酸阿托西班注射液樣品安全性好，可供臨床靜脈注射與肌內(nèi)注射應(yīng)用。

3 討論

醋酸阿托西班注射液是由Ferring GmbH研制的一種由9個氨基酸組成的二硫鍵型的環(huán)肽多肽，是一種抗早產(chǎn)藥，為歐洲醫(yī)藥學會推薦的一線用藥，其是一種催產(chǎn)素的競爭性抑制劑，通過結(jié)合在子宮肌層和蛻膜的催產(chǎn)素受體上，阻止催產(chǎn)素在靶細胞上發(fā)揮作用，從而達到預防早產(chǎn)的目的[14-16]。

注射劑中常用的抗氧劑包括焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、硫脲和抗壞血酸等，其中亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉的水溶液pH在4.0～5.5，適合在酸性溶液中應(yīng)用。由于本注射劑為酸性注射劑，其pH為4.5，因此選擇此兩種抗氧劑來進行處方優(yōu)化。

本研究在醋酸阿托西班注射液原處方的基礎(chǔ)上，添加抗氧劑，以外觀、pH值、溶液澄清度、有關(guān)物質(zhì)、含量為指標，進行加速穩(wěn)定性考察，結(jié)果顯示，添加0.1%亞硫酸氫鈉可顯著提高醋酸阿托西班注射液的穩(wěn)定性，同時改善原制劑的儲存條件，使之可在室溫下保存，方便運輸和儲存。按照優(yōu)化后處方和生產(chǎn)工藝制備的產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，局部用藥安全，可確定為最優(yōu)處方和生產(chǎn)工藝。

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（收稿日期：2014-08-15 本文編輯：林利利）

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（收稿日期：2014-08-15 本文編輯：林利利）