咽炎寧含片制備工藝的優(yōu)選方法

孫 昕，楊雪萍，張 強，谷媛媛，呂泰省，劉 衛(wèi)

咽炎寧含片是在筆者所在醫(yī)院協(xié)定處方元參甘橘湯的基礎上添加木蝴蝶精制而成。原處方經多年臨床驗證，在陰虛火旺，虛火上浮，口鼻干燥，咽喉腫痛等癥的治療中取得了顯著的療效。添加木蝴蝶可增強清肺、利咽、止咳作用，減少對胃腸道的刺激。咽炎寧含片使用方便，生物利用度高，可克服原制劑的劑量不準確、口感欠佳、生物利用度低等缺點。本研究采用單因素考察、正交優(yōu)化法，以哈巴苷、哈巴俄苷為指標性成分，對提取、濃縮；以崩解時限、含片口感為指標對成型工藝進行考察。優(yōu)化了咽炎寧含片的制備工藝。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀（安捷倫1200，四元泵，自動進樣），電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司 BT124S），超聲儀（HS3120），轉籃式壓片機（山東青州市精誠機械有限制造公司 THP-4T），真空泵（鞏義市英峪予華儀器廠），2B-1B智能崩解儀（天津大學精密儀器廠）。

1.2 材料和試劑 哈巴苷、哈巴俄苷（中國藥品生物制品檢定所，化學對照品），甲醇（色譜純，天津市四通化工廠），乙腈（色譜純，天津市四通化工廠），醋酸（分析純，天津市巴斯夫化工有限公司）。

2 方法與結果

2.1 哈巴苷、哈巴俄苷的含量測定方法的建立［1］

2.1.1 色譜條件 色譜柱 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相由乙腈和0.03%磷酸溶液組成，梯度洗脫（乙腈的體積變化為 0～7 min，3→10%；10～20 min，10→33%；20～25 min，33→50%；25～30 min，50→80%；30～35 min，80%；35～37 min，80→3%；流速 1.0 ml／min；檢測波長為 210 nm；進樣量 10 μl。

2.1.2 對照品溶液制備 取哈巴苷對照品、哈巴俄苷對照品適量，精密稱定，加 30%甲醇制成含哈巴苷 60 μg／ml，哈巴俄苷 20 μg／ml的混合溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液制備 取樣品約2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，密塞，稱重，超聲（500 w，40 kHz）處理45 min，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。如圖1。

2.1.5 線性關系考察 取哈巴苷、哈巴俄苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成含哈巴苷0.12 mg／ml、哈巴俄苷0.04 mg／ml的溶液。分別精密吸取對照品溶液 1、2、4、6、8、10 ml至10 ml量瓶，加甲醇至刻度搖勻。分別精密吸取上述溶液10 μl，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值，計算回歸方程。哈巴苷 Y=8.0589X-1.1283，r=0.9999，在 12～120 μg／ml范圍內線性良好；哈巴俄苷Y=49.7304X-3.8475，r=0.9999，在4～40 μg／ml范圍內線性良好。

圖1 哈巴苷、哈巴俄苷及樣品高效液相色譜圖

2.1.6 精密度試驗 吸取哈巴苷、哈巴俄苷對照品溶液，連續(xù)進樣6次，記錄峰面積積分值，結果哈巴苷RSD為1.074%，哈巴俄苷RSD為1.261%。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗 取樣品溶液， 分別在0、2、4、8、12、24 h測定，測得哈巴苷、哈巴俄苷峰面積積分值，哈巴苷RSD為1.374%，哈巴俄苷RSD為1.823%。

2.1.8 重復性試驗 精密稱取同一批次樣品6份，按供試品溶液制備方法制備。按色譜條件測定哈巴苷、哈巴俄苷的含量，計算RSD分別為哈巴苷1.508%、哈巴俄苷1.669%。

2.1.9 加樣回收率試驗 分別精密稱取已知含量的樣品6份，各1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入哈巴苷（1.1 mg／ml）、哈巴俄苷（0.38 mg／ml）的對照品溶液 4 ml，按供試品溶液制備法制備，按擬定方法測定哈巴苷、哈巴俄苷含量，計算回收率，哈巴苷平均回收率為99.54，RSD為1.62%；哈巴俄苷平均回收率為98.71，RSD為1.85%。

2.2 提取工藝考察

2.2.1 提取物中哈巴苷、哈巴俄苷含量測定 稱取干燥后的各試驗號提取物2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇 50 ml，密塞，稱重，超聲（500 w，40 kHz）處理 45 min，再稱重，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，按上述色譜條件測定。

2.2.2 正交試驗設計 采用正交試驗設計對提取工藝進行優(yōu)化，考察提取次數(shù)、提取時間、溶劑倍量、浸泡時間對提取工藝的影響。以哈巴苷、哈巴俄苷的提取量為指標，建立L9（34）正交試驗表，因素與水平見表1，正交試驗結果見表2。

2.2.3 結果 以上試驗結果進行方差分析后發(fā)現(xiàn)，A因素的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），B、C、D因素的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），各因素對咽炎寧含片藥材提取工藝的影響程度為：A>C>B>D，即因素A對提取工藝影響最大，因素C次之，因素D影響最小。因素D的極差最小，數(shù)據(jù)處理時作為最小誤差項。雖然加10倍量水提取得率較高，但與加8倍量水提取相差不大，為了節(jié)省能源，將提取加水倍量定位8倍。最佳工藝為條件為A3B1C2D2，即加8倍量水，浸泡1.5 h，提取次數(shù)3次，提取時間1 h／次。

表1 提取工藝因素和水平

表2 正交試驗結果

2.3 成型工藝考察 根據(jù)預試驗結果，確定主藥投料量為50%；選取糊精、甜菊苷、薄荷腦、硬脂酸鎂為輔料［2］。

2.3.1 潤滑劑選擇及用量的考察 咽炎寧含片主藥為中藥提取物，壓片前顆粒流動性不好。為增加顆粒的流動性，減少與?？妆诘哪Σ粒乐拐硾_，保證含片表面光滑美觀，需在顆粒中添加一定潤滑劑。硬脂酸鎂為常用的潤滑劑，具有質地輕，比表面積大，易與顆?；靹?，用量較少（其常規(guī)劑量為0.3%～1.0%）等優(yōu)點。故選擇硬脂酸鎂為含片的潤滑劑，并設計試驗，考察不同用量硬脂酸鎂對顆粒流動性、壓片時粘沖情況及片劑質量的影響。結果見表3。

表3 硬脂酸鎂用量對制劑工藝的影響

以上結果表明，1%的硬脂酸鎂制得片劑各項指標均較優(yōu)。

2.3.2 正交試驗設計 以糊精、薄荷腦、甜菊苷為考察因素，每個因素選取3個水平，采用正交試驗考察處方中糊精、薄荷腦、甜菊苷的用量對含片口感的影響。因素水平見表4。

表4 制備工藝因素與水平

以口感為指標，確定評分標準。0分為口感過苦或過甜，清涼感過重；1～6分為甜度適中，清涼感差或甜度差，清涼感適中；7～10分為甜度適中，清涼感適中。按以上標準分別進行評分，正交試驗結果見表5。

表5 制備工藝正交試驗結果

以上試驗結果進行方差分析后發(fā)現(xiàn)，C因素的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），A、B、D因素的差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），各因素對咽炎寧含片口感的影響程度為：C>B>A>D，即因素C對口感影響最大，因素B次之，因素D影響最小。因素D的極差最小，數(shù)據(jù)處理時作為最小誤差項。由此確定輔料的最佳組合為：C3B2A2，即糊精用量為0.7 g，薄荷腦用量0.01 g，甜菊苷用量 0.03 g。

3 討 論

3.1 提取工藝 提取溶劑用量對咽炎寧含片的提取有一定的影響。加10倍量水提取哈巴苷、哈巴俄苷的量稍高，但與加8倍量水相差不大。為了節(jié)省能源，將溶劑倍量定為8倍量。正交試驗結果表明，最佳工藝為條件為A3B1C2D2，即加8倍量水，浸泡1.5 h，提取次數(shù)3次，提取時間1 h／次。

3.2 制備工藝 在處方篩選中，曾對輔料的選用進行了考察，以甜菊苷代替葡萄糖進行試驗，發(fā)現(xiàn)甜度和黏度較合適，具有高甜度、低熱量、口味好、防齲齒等特點，對糖尿病和高脂血癥也同樣適用，是一種較為理想的甜味劑。

口含片對口感要求較高，因此對這個指標進行重點考察。此外，還對該含片的片重差異進行的考察，結果按該工藝條件所制得的含片各項指標均符合要求。且其制備工藝簡單，適合于工業(yè)化大生產，具有良好的開發(fā)應用前景。

3.3 含量測定方法 咽炎寧含片以玄參為君藥，而玄參中哈巴苷、哈巴俄苷為其指標成分，故以哈巴苷、哈巴俄苷的含量作為控制制劑質量的指標。樣品處理方法簡單，精密度高、重現(xiàn)性好。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［2］劉石林，向建南，呂守本.從甜菊葉中提取和精制甜菊苷的方法［J］. 蚌埠醫(yī)學院雜志，1995，20（6）：425.