高效液相色譜法測(cè)定呋塞米片的含量

朱葉青

(內(nèi)蒙古自治區(qū)呼和浩特食品藥品檢驗(yàn)所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020)

呋塞米片是常用的利尿藥，收載于2010年版《中國藥典》，原標(biāo)準(zhǔn)中呋塞米的含量測(cè)定采用分光光度法[1]。本試驗(yàn)中采用高效液相色譜(HPLC)法，結(jié)果證實(shí)，該方法準(zhǔn)確、高效、可行。

1 儀器與試藥

LC-2010A型高效液相色譜儀(日本島津公司)。呋塞米對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100544-200501);四氫呋喃供試品;乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:CAPCELL PAK C18MGⅡ柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:水-四氫呋喃-冰醋酸(60∶40∶0．8);柱溫:30℃;檢測(cè)波長:272 nm;進(jìn)樣量:20 μL。理論板數(shù)不低于4 000。在此條件下，色譜圖見圖1。

2．2 溶液制備

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于呋塞米10 mg)，置100 mL容量瓶中，加混合溶劑[冰醋酸22 mL，加乙腈-水(1∶1)至1 000 mL]適量，充分振搖使呋塞米溶解，并稀釋至刻度，搖勻，用0．45 μm的濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密稱取呋塞米對(duì)照品適量，同法制備對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

陰性干擾試驗(yàn):按處方比例制備不含呋塞米的空白片，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果該溶液在呋塞米峰對(duì)應(yīng)位置無干擾，見圖1。

線性關(guān)系考察:精密稱取呋塞米對(duì)照品10．66 mg，置100 mL容量瓶中，用混合溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣 2，10，20，30，40，50 μL，按擬訂色譜條件測(cè)定。以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程 Y=3．94×106X+8．45×104，r=0．999 9。結(jié) 果 表 明 ，呋 塞 米 進(jìn) 樣 量 在0．212 ～5．33 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一呋塞米對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果呋塞米平均峰面積為8 565 608，RSD為0．07%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，每間隔1 h進(jìn)樣，共進(jìn)樣6次。結(jié)果平均峰面積為8 566 783，RSD為0．18%(n=6)，表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批樣品，精密稱取5份，照樣品測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定。結(jié)果呋塞米的平均含量為97．46%，RSD為0．3%(n=5)，表明方法重復(fù)性良好。

圖1 高效液相色譜圖

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品9份，精密加入呋塞米對(duì)照品適量，按含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2．4 樣品含量測(cè)定

取 3 批(批號(hào)分別為 1101003，1101007，100701，分別由江蘇亞邦愛普森藥業(yè)有限公司、天津力生制藥股份有限公司、安徽云鵬制藥有限公司生產(chǎn))樣品，按2010年版《中國藥典(二部)》中方法測(cè)定其含量，3 批樣品含量分別為 99．2% ，95．7% ，92．3%;而用 HPLC 法測(cè)定，其含量分別為 97．4%，92．8%，92．7% 。

表1 呋塞米加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

3 討論

取呋塞米對(duì)照品溶液，在200～300 nm波長處進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果在272 nm波長處有最大吸收，故選擇272 nm為測(cè)定波長。曾采用不同比例的水-四氫呋喃-冰醋酸和甲醇-水-磷酸鹽系統(tǒng)作為流動(dòng)相進(jìn)行分離[2-3]，結(jié)果表明，采用水-四氫呋喃-冰醋酸(60∶40∶0．8)作為流動(dòng)相時(shí)，保留時(shí)間適宜，理論板數(shù)較高，分離效果好。

[1]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典(二部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:336．

[2]王 峰，陶巧鳳．HPLC法測(cè)定呋塞米注射液中的有關(guān)物質(zhì)及含量[J]．藥物分析，2012，32(6):1 081-1 084．

[3]陳慶偉，陳華鋒．高效液相色譜法測(cè)定呋塞米片的含量[J]．海峽藥學(xué)，2006，18(2):54．