高效液相色譜法測(cè)定化妝品中煙酸、煙酰胺含量

姚春燕 李彩均

摘 要：采用高效液相色譜儀同時(shí)測(cè)定化妝品中煙酸、煙酰胺的含量。樣品經(jīng)甲醇：去離子水（3：7） 溶液萃取，HPLC測(cè)定，外標(biāo)法定量。加標(biāo)回收率在95.5%～102%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.11%～3.71%。本方法具有良好的靈敏度和重現(xiàn)性，可以滿足化妝品中煙酸、煙酰胺檢測(cè)的要求。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜儀 煙酸 煙酰胺 化妝品

中圖分類號(hào)：TQ658 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2014）02（a）-0138-02

煙酸也稱作維生素B3，或維生素PP，分子式：C6H5NO2，耐熱，能升華。煙酸又名尼克酸、抗癩皮病因子。在人體內(nèi)還包括其衍生物煙酰胺或尼克酰胺。它是人體必需的13種維生素之一，是一種水溶性維生素，屬于維生素B族。煙酸在人體內(nèi)轉(zhuǎn)化為煙酰胺，煙酰胺是輔酶Ⅰ和輔酶Ⅱ的組成部分，參與體內(nèi)脂質(zhì)代謝，組織呼吸的氧化過(guò)程和糖類無(wú)氧分解的過(guò)程。煙酸和煙酰胺都微溶于水，性質(zhì)穩(wěn)定，不易被酸、堿及高溫環(huán)境所破壞。維生素B3廣泛存于動(dòng)植物組織中。

煙酸有較強(qiáng)的擴(kuò)張周圍血管作用，臨床用于治療頭痛、偏頭痛、耳鳴、內(nèi)耳眩暈癥等。煙酸為維生素類藥物，與煙酰胺統(tǒng)稱維生素PP，用于抗糙皮病，亦可用作血擴(kuò)張藥，大量用作食品飼料的添加劑。作為醫(yī)藥中間體，用于異煙肼、煙酰胺、尼可剎及煙酸肌醇酯等的生產(chǎn)。

若其缺乏時(shí)，可產(chǎn)生糙皮病，表現(xiàn)為皮炎、舌炎、口咽、腹瀉及煩躁、失眠感覺(jué)異常等癥狀。煙酸是少數(shù)存在于食物中相對(duì)穩(wěn)定的維生素，即使經(jīng)烹調(diào)及儲(chǔ)存亦不會(huì)大量流失而影響其效力。煙酸、煙酰胺效用：促進(jìn)消化系統(tǒng)的健康，減輕胃腸障礙；使皮膚更健康；預(yù)防和緩解嚴(yán)重的偏頭痛；促進(jìn)血液循環(huán)，使血壓下降；減輕腹瀉現(xiàn)象。最受矚目的功效是抑制黑色素轉(zhuǎn)移，也就是美白的效果，被稱為護(hù)膚品的黃金10大成分之一。此外，對(duì)油性痘性肌膚的改善、肌膚炎癥的舒緩、膚質(zhì)的改善等，都有相當(dāng)?shù)膶W(xué)術(shù)文獻(xiàn)支持。更重要的是煙酸、煙酰胺安全性佳，對(duì)皮膚無(wú)刺激性，所以廣用在各種保養(yǎng)品中。由于煙酸、煙酰胺廣泛用于化妝品尤其是保養(yǎng)品中，但是當(dāng)前針對(duì)化妝品中煙酸、煙酰胺含量檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)或者文獻(xiàn)比較少，因此建立一個(gè)系統(tǒng)，方便具有良好的靈敏度和重現(xiàn)性的檢測(cè)方法非常有必要。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

Agilent 1200高效液相色譜儀附帶二極管陣列檢測(cè)器（DAD）；色譜柱：ZORBBAX Extend-C18高效液相色譜柱（Analytical 4.6×150 mm 5-Micron，美國(guó)Agilent 公司）或性能相當(dāng)者；圓周震蕩儀；0.22 m微孔濾膜；玻璃器皿（所用玻璃器皿洗凈后，用去離子水沖洗，烘干備用）。煙酸、煙酰胺采用AccuStandard品牌固體標(biāo)準(zhǔn)樣品，規(guī)格：1 g/支。甲醇（色譜純）、去離子水、異丙醇（色譜純）、庚烷磺酸鈉、冰乙酸、鹽酸。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱取0.1 g（精確到0.0001 g）煙酸、煙酰胺固體標(biāo)準(zhǔn)品于100 ml容量瓶中用甲醇﹕去離子水（3﹕7）溶液定容配制成1000 mg/L標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；然后準(zhǔn)確量取2 ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于50 ml容量瓶中用甲醇﹕去離子水（3∶7）溶液定容配制成40 mg/L中間液，臨用前配制。分別準(zhǔn)確量取煙酸、煙酰胺混合標(biāo)準(zhǔn)中間液0.0 ml、1.0 ml、2.0 ml、5.0 ml、10.0 ml至50 ml容量瓶中用甲醇：去離子水（3∶7）溶液定容，配制成0.00 mg/L、0.80 mg/L、1.60 mg/L、4.00 mg/L、8.00 mg/L標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

1.3 樣品的制備提取

準(zhǔn)確稱取化妝品試樣5.0 g，加入甲醇﹕去離子水（3∶7）溶液25.0 ml，于圓周震蕩儀上震蕩1 min，再置于超聲清洗機(jī)中超聲30 min，然后加入甲醇﹕去離子水（3∶7）溶液定容至50 ml，最后取上清液用0.22m微孔濾膜過(guò)濾后用HPLC上機(jī)分析?？瞻自囼?yàn)：實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑按上述方法處理后，進(jìn)行HPLC分析。

1.4 測(cè)定

1.4.1 參考色譜條件

色譜柱：ZORBBAX Extend-C18高效液相色譜柱（Analytical4.6×150mm5-Micron，美國(guó)Agilent 公司）或性能相當(dāng)色譜柱。

流動(dòng)相：異丙醇20 ml，庚烷磺酸鈉1.0 g，用去離子水溶解定容至1L，然后先用冰乙酸調(diào)pH值至3.0，再用0.1 mol/L鹽酸調(diào)pH值至2.1。上機(jī)操作采用甲醇為有機(jī)相，有機(jī)相和緩沖液比例為8∶92。

流速：1 ml/min；

檢測(cè)波長(zhǎng)：261 nm；

柱溫：35 ℃；

進(jìn)樣量：10L。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

采用二極管陣列（DAD）檢測(cè)器掃描煙酸、煙酰胺從190 nm至400 nm光譜圖，見(jiàn)圖1、圖2，從而確定此方法的檢測(cè)波長(zhǎng)。典型化妝品中煙酸、煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)樣品和空白樣品色譜圖見(jiàn)圖3、圖4。

2.2 定性確認(rèn)及定量分析

在上述儀器條件下掃描得到的色譜圖，根據(jù)試樣和標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間、對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)樣品光譜圖、峰純度等條件確認(rèn)定性目標(biāo)分析物。本方法采用外標(biāo)法定量，以煙酸、煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，各自定量色譜峰面積為縱坐標(biāo)，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，以試樣峰面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。

2.3 結(jié)果計(jì)算

試樣中煙酸、煙酰胺含量按式（1）進(jìn)行計(jì)算：

X= （1）

式中：

X為試樣中煙酸、煙酰胺含量，單位為mg/kg或者mg/L；

Ci為試樣中煙酸或煙酰胺的濃度，單位為mg/L；

Co為空白試樣中煙酸或煙酰胺的濃度，單位為mg/L；

V為試樣定容體積，單位為ml；

K為稀釋倍數(shù)；

m為試樣質(zhì)量，單位為g；

計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

3 結(jié)論

建立的高效液相色譜法測(cè)定化妝品中煙酸、煙酰胺含量的方法，具有操作簡(jiǎn)便、快捷、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。方法加標(biāo)回收率在95.5%～102%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.11%～3.71%，可以滿足化妝品產(chǎn)品中煙酸、煙酰胺含量檢測(cè)的要求。

參考文獻(xiàn)

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