胃癌患者手術前后血清胸苷激酶1水平變化的臨床研究

林琳等

[摘要] 目的 探討檢測血清胸苷激酶（TK1）水平對胃癌診斷及手術效果評估的意義。方法 采用免疫印跡-增強化學發(fā)光法檢測35例健康查體者和68例胃癌患者血清TK1水平，比較43例胃癌患者根治術前后血清TK1水平。結果胃癌患者血清TK1水平明顯高于正常對照組 （P<0.01）；血清TK1水平與胃癌患者性別、年齡無相關，與胃癌患者臨床分期、細胞分化程度相關；Ⅳ期明顯高于Ⅲ期、Ⅲ期明顯高于Ⅱ期、Ⅱ期明顯高于Ⅰ期、Ⅰ期明顯高于正常對照組，兩兩比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01～0.05），腫瘤細胞分化程度較差胃癌患者血清TK1水平明顯高于分化程度較好胃癌患者；術后胃癌患者血清TK1水平明顯低于術前（P<0.01）。結論 檢測血清TK1水平對胃癌診斷、預測病情進展、療效等有較大的臨床價值。

[關鍵詞] 胸苷激酶1； 胃癌； 手術治療

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）27-0151-03

[Abstract] Objective To evaluate the use of Thymidine Kinase 1（TK1） in serum as proliferating tumor marker for gastric carcinoma and monitoring marker for the response to operation. Methods Serum level of TK1 expression were detected with sensitive chemiluminescence dot- blot assay in were available to detect the level of serum TK1 in 35 cases of normal healthy subject and 68 cases of patients with gastric carcinoma， compared with 43 cases of patients with gastric carcinoma pre-and post-operation. Results The level of serum TK1 were elevated in all subgroups of patients with gastric carcinoma compared to the normal healthy subject （P<0.01）， serum TK1 was correlated with TNM stage and histological grade， and not with sex and age； the serum TK1 level in stage Ⅳwas higher in comparison with stage Ⅲ， in stage Ⅲit was higher than that in stage Ⅱ， in stage Ⅱit was higher than that in stage Ⅰ， and in stage Ⅰit was higher than that in normal healthy subject （P<0.01-0.05）； Being lower in the well differentiated and moderately differentiated than the poorly differentiated （P<0.01-0.05）， the level of serum TK1 was higher in the cases of poorly differentiated adenocarcinoma， signet ring cell carcinoma and mucoid adenocarcinoma than those in the cases of well differentiated and moderately differentiated adenocarcinoma （P<0.05）， the serum TK1 levels remarkably reduced in patients with gastric carcinoma after operation （P<0.01）. Conclusion Detection the level of serum TK1 may be larger clinical value for cancer diagnosis， predict disease progression and the curative effect in patients with gastric carcinoma.

[Key words] Thymidine Kinase 1； Gastric carcinoma； Operation

胃癌在世界癌癥死亡率中位居第2位，全球范圍內(nèi)胃癌呈逐漸上升的趨勢，其發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉移機制尚未完全清楚[1，2]；腫瘤細胞的增殖、黏附能力與惡性腫瘤患者的預后密切相關[3，4]，胸苷激酶1 （thymidine kinase 1， TK1）是一種與細胞增殖密切相關并在細胞質(zhì)中表達活性的激酶，TK1的檢測可以準確測定腫瘤細胞的異常增殖情況，可用于惡性腫瘤患者進行病情、治療效果監(jiān)視和預后評估[5-7]；本研究采用免疫印跡-增強化學發(fā)光法檢測35例正常健康查體者和68例胃癌患者血清TK1水平，比較43例胃癌患者根治性手術前后血清TK1水平，分析血清TK1水平與胃癌臨床病理特征的關系，探討其在胃癌病情變化、手術效果評估及預后判斷中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1臨床資料endprint

正常對照組35例為廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院健康查體者，男23例，女12例，年齡21～64歲，中位年齡 42歲。胃癌組68例為2009～2012年在廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院住院患者，按國際抗癌聯(lián)盟（UICC）制定的胃癌最新分期標準進行分期，術前均未行放化療，其中男42例，女26例，年齡20～63歲，中位年齡40歲；Ⅰ期14例，Ⅱ期20例，Ⅲ期18例，Ⅳ期16例；68例胃癌按病理類型分為：高分化腺癌15例，中分化腺癌18例，低分化腺癌16例，印戒細胞癌10例，黏液腺癌9例。本研究中將腫瘤細分成兩個組織學亞型：分化程度較好包括高分化腺癌和中分化腺癌，分化程度較差包括低分化腺癌、印戒細胞癌和黏液腺癌。

1.2實驗方法

晨起空腹抽取靜脈血2 mL，室溫下靜置3 h，4000 г/min離心15 min，分離出血清，置于1.5 mL聚丙二醇脂試管內(nèi)，放入-20°C冰箱保存，按編號分裝于2個離心管（分別用于初次檢測和復檢），成批采用免疫印跡-增強化學發(fā)光法檢測血清TK1水平，由專人嚴格按說明書要求進行實驗操作，檢測試劑盒和儀器由深圳華瑞同康生物技術有限公司提供；健康對照組及胃癌患者于術前檢測血清TK1水平，其中43例胃癌患者分別于根治性手術前及手術后（60±7） d檢測血清TK1 水平。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，各組間差異進行方差分析或t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3討論

人類TK1基因是分子質(zhì)量為25KD的蛋白質(zhì)，并且是胸腺嘧啶核苷合成DNA的關鍵酶，可將胸苷轉化為磷酸胸苷，參與調(diào)控細胞周期，與細胞分裂增生關系密切，正常人機體中血清TK1含量極微，甚至檢測不出，但是在細胞過度增生期，細胞內(nèi)TK1合成顯著增加，而且隨著腫瘤的快速生長、壞死，TK1釋放到外周血的機率成倍增加，TK1水平迅速升高，可超過正常水平的2～100倍[8，9]；Topolcan等[10]報道血清TK1水平可提示腫瘤生長速度；Chen等[11]研究表明87% TK1陽性患者存在惡性腫瘤相關疾病，而且與疾病病情的輕重程度相關，提示血清TK1有望成為一種新的潛在且有用的腫瘤標記物用于監(jiān)測惡性腫瘤增殖及療效判斷。

本文結果顯示胃癌患者血清TK1水平明顯高于健康對照組，不同病期的胃癌患者血清TK1水平有差異，Ⅳ期胃癌患者血清TK1水平明顯高于Ⅲ期，Ⅲ期高于Ⅱ期、Ⅱ期高于Ⅰ期，說明胃癌患者與正常健康人之間血清TK1水平有一定差異。血清TK1水平與胃癌患者臨床分期相關，提示TK1水平在胃癌的發(fā)生、發(fā)展、轉移過程中發(fā)揮重要作用，TK1有可能作為胃癌的一種新的腫瘤標記物；研究發(fā)現(xiàn)血清TK1水平與胃癌患者年齡和細胞分化程度無相關，進一步研究發(fā)現(xiàn)根治性手術后胃癌患者血清TK1水平較手術前減低，而且追蹤發(fā)現(xiàn)根治性手術后胃癌患者血清TK1水平較高者復發(fā)機會較高，提示血清TK1水平可反映胃癌患者機體腫瘤負荷程度、預測胃癌患者病情進展、監(jiān)測胃癌治療效果、評估胃癌患者預后[12]。

檢測血清TK1水平不需要組織標本，操作簡便、無創(chuàng)傷、可重復性強，易于在臨床實踐中推廣應用，進一步研究血清TK1水平在胃癌中的意義，具有重要的臨床參考價值。

[參考文獻]

[1] 韓玉龍. 影響胃癌預后的相關因素研究[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51（23）：57-61.

[2] Liang QL，Wang BR，Li ZY，et al. Effect of TSLC1 gene on growth and apoptosis in human esophageal carcinoma Eca109 cells[J]. Arch Med Sci，2012，8（6）：987-992.

[3] 梁啟廉，李志東，吳斌華，等. 抗CD105單克隆抗體對大腸癌生長的抑制作用[J]. 中華實驗外科雜志，2009，26（2）：165-166.

[4] Liang QL，Li ZY，Zhou Y，et al. Construction of a recombinant eukaryotic expression vector containing PHD3 gene and its expression in HepG2 cells[J]. J Exp Clin Cancer Res， 2012， 31：64.

[5] Kiran Kumar J，Sharif H，Westberg S，et al. High levels of inactive thymidine kinase 1 polypeptide detected in sera from dogs with solid tumours by immunoaffinity methods：Implications for in vitro diagnostics[J]. Vet J，2013，197（3）：854-860.

[6] Agarwal HK，McElroy CA，Sjuvarsson E，et al. Synthesis of N3-substituted carboranyl thymidine bioconjugates and their evaluation as substrates of recombinant human thymidine kinase 1[J]. Eur J Med Chem，2013，60：456-468.

[7] Liu QL，Liang QL，Li ZY，et al. Function and expression of prolyl hydroxylase 3 in cancers[J]. Arch Med Sci，2013，9（4）：589-593.

[8] Bolayirli M，Papila C，Korkmaz GG，et al. Serum thymidine kinase 1 activity in solid tumor （breast and colorectal cancer） patients treated with adjuvant chemotherapy [J]. J Clin Lab Anal，2013，27（3）：220-226.

[9] Mutahir Z，Clausen AR，Andersson KM，et al. Thymidine kinase 1 regulatory fine-tuning through tetramer formation[J]. FEBS J，2013，280（6）：1531-1541.

[10] Topolcan O，Holubec L Jr. The role of thymidine kinase in cancer diseases[J]. Expert Opin Med Diagn，2008，2（2）：129-141.

[11] Chen Z，Zhou H，Li S，et al. Serological thymidine kinase 1（STK1） indicates an elevated risk for the development of malignant tumours[J]. Anticancer Res，2008，28（6B）：3897-3907.

[12] 毛建軍，王韌，劉建平. 42例青年胃癌治療結果分析[J]. 實用中西醫(yī)結合臨床，2011，11（2）：53-54.

（收稿日期：2014-02-10）endprint

正常對照組35例為廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院健康查體者，男23例，女12例，年齡21～64歲，中位年齡 42歲。胃癌組68例為2009～2012年在廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院住院患者，按國際抗癌聯(lián)盟（UICC）制定的胃癌最新分期標準進行分期，術前均未行放化療，其中男42例，女26例，年齡20～63歲，中位年齡40歲；Ⅰ期14例，Ⅱ期20例，Ⅲ期18例，Ⅳ期16例；68例胃癌按病理類型分為：高分化腺癌15例，中分化腺癌18例，低分化腺癌16例，印戒細胞癌10例，黏液腺癌9例。本研究中將腫瘤細分成兩個組織學亞型：分化程度較好包括高分化腺癌和中分化腺癌，分化程度較差包括低分化腺癌、印戒細胞癌和黏液腺癌。

1.2實驗方法

晨起空腹抽取靜脈血2 mL，室溫下靜置3 h，4000 г/min離心15 min，分離出血清，置于1.5 mL聚丙二醇脂試管內(nèi)，放入-20°C冰箱保存，按編號分裝于2個離心管（分別用于初次檢測和復檢），成批采用免疫印跡-增強化學發(fā)光法檢測血清TK1水平，由專人嚴格按說明書要求進行實驗操作，檢測試劑盒和儀器由深圳華瑞同康生物技術有限公司提供；健康對照組及胃癌患者于術前檢測血清TK1水平，其中43例胃癌患者分別于根治性手術前及手術后（60±7） d檢測血清TK1 水平。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，各組間差異進行方差分析或t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3討論

人類TK1基因是分子質(zhì)量為25KD的蛋白質(zhì)，并且是胸腺嘧啶核苷合成DNA的關鍵酶，可將胸苷轉化為磷酸胸苷，參與調(diào)控細胞周期，與細胞分裂增生關系密切，正常人機體中血清TK1含量極微，甚至檢測不出，但是在細胞過度增生期，細胞內(nèi)TK1合成顯著增加，而且隨著腫瘤的快速生長、壞死，TK1釋放到外周血的機率成倍增加，TK1水平迅速升高，可超過正常水平的2～100倍[8，9]；Topolcan等[10]報道血清TK1水平可提示腫瘤生長速度；Chen等[11]研究表明87% TK1陽性患者存在惡性腫瘤相關疾病，而且與疾病病情的輕重程度相關，提示血清TK1有望成為一種新的潛在且有用的腫瘤標記物用于監(jiān)測惡性腫瘤增殖及療效判斷。

本文結果顯示胃癌患者血清TK1水平明顯高于健康對照組，不同病期的胃癌患者血清TK1水平有差異，Ⅳ期胃癌患者血清TK1水平明顯高于Ⅲ期，Ⅲ期高于Ⅱ期、Ⅱ期高于Ⅰ期，說明胃癌患者與正常健康人之間血清TK1水平有一定差異。血清TK1水平與胃癌患者臨床分期相關，提示TK1水平在胃癌的發(fā)生、發(fā)展、轉移過程中發(fā)揮重要作用，TK1有可能作為胃癌的一種新的腫瘤標記物；研究發(fā)現(xiàn)血清TK1水平與胃癌患者年齡和細胞分化程度無相關，進一步研究發(fā)現(xiàn)根治性手術后胃癌患者血清TK1水平較手術前減低，而且追蹤發(fā)現(xiàn)根治性手術后胃癌患者血清TK1水平較高者復發(fā)機會較高，提示血清TK1水平可反映胃癌患者機體腫瘤負荷程度、預測胃癌患者病情進展、監(jiān)測胃癌治療效果、評估胃癌患者預后[12]。

檢測血清TK1水平不需要組織標本，操作簡便、無創(chuàng)傷、可重復性強，易于在臨床實踐中推廣應用，進一步研究血清TK1水平在胃癌中的意義，具有重要的臨床參考價值。

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[12] 毛建軍，王韌，劉建平. 42例青年胃癌治療結果分析[J]. 實用中西醫(yī)結合臨床，2011，11（2）：53-54.

（收稿日期：2014-02-10）endprint

正常對照組35例為廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院健康查體者，男23例，女12例，年齡21～64歲，中位年齡 42歲。胃癌組68例為2009～2012年在廣東醫(yī)學院附屬醫(yī)院住院患者，按國際抗癌聯(lián)盟（UICC）制定的胃癌最新分期標準進行分期，術前均未行放化療，其中男42例，女26例，年齡20～63歲，中位年齡40歲；Ⅰ期14例，Ⅱ期20例，Ⅲ期18例，Ⅳ期16例；68例胃癌按病理類型分為：高分化腺癌15例，中分化腺癌18例，低分化腺癌16例，印戒細胞癌10例，黏液腺癌9例。本研究中將腫瘤細分成兩個組織學亞型：分化程度較好包括高分化腺癌和中分化腺癌，分化程度較差包括低分化腺癌、印戒細胞癌和黏液腺癌。

1.2實驗方法

晨起空腹抽取靜脈血2 mL，室溫下靜置3 h，4000 г/min離心15 min，分離出血清，置于1.5 mL聚丙二醇脂試管內(nèi)，放入-20°C冰箱保存，按編號分裝于2個離心管（分別用于初次檢測和復檢），成批采用免疫印跡-增強化學發(fā)光法檢測血清TK1水平，由專人嚴格按說明書要求進行實驗操作，檢測試劑盒和儀器由深圳華瑞同康生物技術有限公司提供；健康對照組及胃癌患者于術前檢測血清TK1水平，其中43例胃癌患者分別于根治性手術前及手術后（60±7） d檢測血清TK1 水平。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，各組間差異進行方差分析或t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

3討論

人類TK1基因是分子質(zhì)量為25KD的蛋白質(zhì)，并且是胸腺嘧啶核苷合成DNA的關鍵酶，可將胸苷轉化為磷酸胸苷，參與調(diào)控細胞周期，與細胞分裂增生關系密切，正常人機體中血清TK1含量極微，甚至檢測不出，但是在細胞過度增生期，細胞內(nèi)TK1合成顯著增加，而且隨著腫瘤的快速生長、壞死，TK1釋放到外周血的機率成倍增加，TK1水平迅速升高，可超過正常水平的2～100倍[8，9]；Topolcan等[10]報道血清TK1水平可提示腫瘤生長速度；Chen等[11]研究表明87% TK1陽性患者存在惡性腫瘤相關疾病，而且與疾病病情的輕重程度相關，提示血清TK1有望成為一種新的潛在且有用的腫瘤標記物用于監(jiān)測惡性腫瘤增殖及療效判斷。

本文結果顯示胃癌患者血清TK1水平明顯高于健康對照組，不同病期的胃癌患者血清TK1水平有差異，Ⅳ期胃癌患者血清TK1水平明顯高于Ⅲ期，Ⅲ期高于Ⅱ期、Ⅱ期高于Ⅰ期，說明胃癌患者與正常健康人之間血清TK1水平有一定差異。血清TK1水平與胃癌患者臨床分期相關，提示TK1水平在胃癌的發(fā)生、發(fā)展、轉移過程中發(fā)揮重要作用，TK1有可能作為胃癌的一種新的腫瘤標記物；研究發(fā)現(xiàn)血清TK1水平與胃癌患者年齡和細胞分化程度無相關，進一步研究發(fā)現(xiàn)根治性手術后胃癌患者血清TK1水平較手術前減低，而且追蹤發(fā)現(xiàn)根治性手術后胃癌患者血清TK1水平較高者復發(fā)機會較高，提示血清TK1水平可反映胃癌患者機體腫瘤負荷程度、預測胃癌患者病情進展、監(jiān)測胃癌治療效果、評估胃癌患者預后[12]。

檢測血清TK1水平不需要組織標本，操作簡便、無創(chuàng)傷、可重復性強，易于在臨床實踐中推廣應用，進一步研究血清TK1水平在胃癌中的意義，具有重要的臨床參考價值。

[參考文獻]

[1] 韓玉龍. 影響胃癌預后的相關因素研究[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51（23）：57-61.

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[4] Liang QL，Li ZY，Zhou Y，et al. Construction of a recombinant eukaryotic expression vector containing PHD3 gene and its expression in HepG2 cells[J]. J Exp Clin Cancer Res， 2012， 31：64.

[5] Kiran Kumar J，Sharif H，Westberg S，et al. High levels of inactive thymidine kinase 1 polypeptide detected in sera from dogs with solid tumours by immunoaffinity methods：Implications for in vitro diagnostics[J]. Vet J，2013，197（3）：854-860.

[6] Agarwal HK，McElroy CA，Sjuvarsson E，et al. Synthesis of N3-substituted carboranyl thymidine bioconjugates and their evaluation as substrates of recombinant human thymidine kinase 1[J]. Eur J Med Chem，2013，60：456-468.

[7] Liu QL，Liang QL，Li ZY，et al. Function and expression of prolyl hydroxylase 3 in cancers[J]. Arch Med Sci，2013，9（4）：589-593.

[8] Bolayirli M，Papila C，Korkmaz GG，et al. Serum thymidine kinase 1 activity in solid tumor （breast and colorectal cancer） patients treated with adjuvant chemotherapy [J]. J Clin Lab Anal，2013，27（3）：220-226.

[9] Mutahir Z，Clausen AR，Andersson KM，et al. Thymidine kinase 1 regulatory fine-tuning through tetramer formation[J]. FEBS J，2013，280（6）：1531-1541.

[10] Topolcan O，Holubec L Jr. The role of thymidine kinase in cancer diseases[J]. Expert Opin Med Diagn，2008，2（2）：129-141.

[11] Chen Z，Zhou H，Li S，et al. Serological thymidine kinase 1（STK1） indicates an elevated risk for the development of malignant tumours[J]. Anticancer Res，2008，28（6B）：3897-3907.

[12] 毛建軍，王韌，劉建平. 42例青年胃癌治療結果分析[J]. 實用中西醫(yī)結合臨床，2011，11（2）：53-54.

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