陳皮飲片的質(zhì)量控制

張科衛(wèi)，陳文星，薛丹丹

(南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇南京 210023)

陳皮為蕓香科植物橘Citrus reticulate Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮。藥材分“陳皮”與“廣陳皮”。產(chǎn)地加工時(shí)，采摘成熟果實(shí)，剝?nèi)」?，曬干或低溫干燥，即為陳皮藥材。臨床上以飲片入藥，將陳皮藥材除去雜質(zhì)，噴淋水，潤(rùn)透，切絲，干燥。即為陳皮飲片。

陳皮飲片苦、辛、溫，歸肺、脾經(jīng)。具有理氣健脾、燥濕化痰之功，臨床上主要用于腕腹脹滿(mǎn)、食少吐瀉、咳嗽痰多等癥［1］。

陳皮中主要含有揮發(fā)油及黃酮類(lèi)成分，其中黃酮類(lèi)成分是目前已知的具有廣泛的藥理作用的一類(lèi)物質(zhì)。研究表明，陳皮中含有的黃酮類(lèi)成分具有抗氧化、清除自由基［2-3］、抗炎［4］、抗癌［5-6］、預(yù)防心血管疾?。?］、抗誘變［8］等多種生理活性。

由于陳皮中所含有的黃酮類(lèi)成分在柑橘屬植物中廣泛存在，且目前市場(chǎng)上陳皮來(lái)源廣泛，產(chǎn)地和來(lái)源不同，其中所含有的黃酮類(lèi)成分差異顯著。《中國(guó)藥典》2010年版中僅以橙皮苷作為指標(biāo)來(lái)對(duì)陳皮飲片的質(zhì)量進(jìn)行控制，這對(duì)全面評(píng)價(jià)陳皮的質(zhì)量顯得有點(diǎn)欠缺。

經(jīng)市場(chǎng)調(diào)研，發(fā)現(xiàn)目前南京市場(chǎng)上的陳皮飲片主要是以“陳皮”為主，“廣陳皮”很少。因此，本次實(shí)驗(yàn)，以南京市場(chǎng)上收集到的陳皮飲片為研究對(duì)象，對(duì)其中的幾種黃酮類(lèi)成分進(jìn)行了測(cè)定。旨在為陳皮飲片的質(zhì)量控制做一些有益的探索。

1 儀器、藥品與試劑

Waters e2695型高效液相色譜儀，2998PDA檢測(cè)器，Millennium 32色譜管理系統(tǒng);Sartorius BP211D型電子天平。

橙皮苷對(duì)照品 (批號(hào) 110721-201115)，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;蕓香柚皮苷 (批號(hào)120319)、甜橙黃酮 (批號(hào)100914)、川陳皮素(批號(hào)110902)、橘皮素 (批號(hào)120524)，均購(gòu)自四川維克奇生物科技有限公司。所有對(duì)照品均經(jīng)HPLC檢測(cè)為單一成分，純度達(dá)到98%以上。

陳皮飲片10批，購(gòu)自南京各大藥店及中醫(yī)門(mén)診部，均經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室王春根教授鑒定分別為蕓香科植物橘Citrus reticulate Blanco及其栽培變種的干燥成熟果皮經(jīng)炮制加工而成。

乙腈為HPLC級(jí)，水為亞沸蒸餾水 (自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Agilent TC-C18(2)色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈 (A)-水(B)，梯度洗脫 (0～13 min，20% ～35%A;13～16 min，35% ～50%A;16～30 min，50%A;30～34 min，50% ～62%A;34～35 min，62% ～100%A;35～37 min，100% ～20%A;37～50 min，20%A)。體積流量1.0 mL/min;柱溫30℃。

2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 經(jīng)220～375 nm掃描發(fā)現(xiàn)，幾種黃酮類(lèi)成分的最大吸收波長(zhǎng)不同。蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素、橘皮素的最大吸收波長(zhǎng)分別為 283.0、284.2、330.7、334.3、324.7 nm。于是選擇在283 nm處測(cè)定蕓香柚皮苷和橙皮苷，在331 nm處測(cè)定甜橙黃酮和川陳皮素，在324 nm處測(cè)定橘皮素。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱(chēng)取干燥至恒重的蕓香柚皮苷299.80 mg、橙皮苷1.9888 g、甜橙黃酮1.58 mg、川陳皮素10.08 mg、橘皮素3.98 mg置于同一100 mL的量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得對(duì)照品貯備液。

2.3.2 供試品溶液的制備 稱(chēng)取陳皮飲片粉末(過(guò)四號(hào)篩)0.1 g，精密稱(chēng)定，精密加入甲醇10 mL，超聲處理 (功率250 W，頻率50 kHz)30 min，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀測(cè)試，蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素和橘皮素的保留時(shí)間分別為9.4、10.5、22.1、24.4、27.9 min。理論塔板數(shù)以次橙皮苷計(jì)不低于5000，所有對(duì)照品所對(duì)應(yīng)的色譜峰與相鄰色譜峰的分離度均不低于1.5。見(jiàn)圖1。

圖1 不同檢測(cè)波長(zhǎng)下的混合對(duì)照品及樣品 (廣西產(chǎn)，批號(hào)130111)的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of mixed reference substances and sample(from Guangxi region，Lot 130111)of various detected wavelengths

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備 精密吸取上述對(duì)照品貯備液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制得混合對(duì)照品溶液系列 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ)，取10 μL進(jìn)樣，測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)照品質(zhì)量濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得各組分的回歸方程及相關(guān)系數(shù)，見(jiàn)表1?？梢?jiàn)該方法在試驗(yàn)范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

表1 各組分線(xiàn)性關(guān)系測(cè)定結(jié)果Tab.1 Calibration data

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.5”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液Ⅲ10 μL進(jìn)樣，重復(fù)6次，以峰面積計(jì)算RSD，結(jié)果蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素，橘皮素RSD分別為1.4%、1.8%、1.9%、1.2%和2.0%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一產(chǎn)地的陳皮飲片粉末(廣西產(chǎn)，批號(hào)130111，過(guò)四號(hào)篩)6份，分別制成供試品溶液，測(cè)定，計(jì)算。結(jié)果蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素，橘皮素RSD分別為1.6%、1.3%、1.6%、1.4%和1.7%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取新配制的供試品溶液(廣西產(chǎn)，批號(hào)130111)，每隔2 h取10 μL進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素，橘皮素 RSD分別為1.6%、1.8%、1.0%、1.0%和1.7%。表明供試品溶液在12 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 配制含蕓香柚皮苷113.80 μg/mL、橙皮苷 799.80 mg/mL、甜橙黃酮 0.64 μg/mL、 川 陳 皮 素 3.80 μg/mL、 橘 皮 素1.50 μg/mL的混合對(duì)照品溶液，作為加樣回收對(duì)照品溶液。稱(chēng)取陳皮飲片粉末 (廣西產(chǎn)，批號(hào)130111，過(guò)四號(hào)篩)0.05 g，共6份，分別精密加入上述混合對(duì)照品溶液5.0 mL，照“2.3.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制成加樣回收樣品液，測(cè)定，計(jì)算平均加樣回收率，結(jié)果蕓香柚皮苷、橙皮苷、甜橙黃酮、川陳皮素，橘皮素平均加樣回收率分別為 99.91%、99.59%、100.22%、99.85% 和99.71%，RSD分別為 1.3%、1.2%、1.3%、1.3%和1.5%。

2.10 樣品測(cè)定 取南京市場(chǎng)上收購(gòu)到的陳皮飲片10批，照“2.2.2”項(xiàng)下操作，制成供試品溶液，取10 μL進(jìn)樣，以外標(biāo)法計(jì)算，每個(gè)批號(hào)平行3份，每份進(jìn)樣2次。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果 (n=6)Tab.2 Determination of flavonoids in samples from different growing regions in China(n=6)

3 討論

3.1 陳皮飲片中的黃酮類(lèi)成分比較多，從已有文獻(xiàn)看，有一些學(xué)者已經(jīng)嘗試著對(duì)其中的幾個(gè)成分進(jìn)行了測(cè)定。鄭國(guó)棟對(duì)“廣陳皮”進(jìn)行研究時(shí)，以283、330 nm兩個(gè)波長(zhǎng)對(duì)其中的橙皮苷、川陳皮素、3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮、橘皮素、5-羥基-6，7，8，3’，4’-五甲氧基黃酮進(jìn)行了檢測(cè)［9］;封宇飛在研究陳皮時(shí)，以300 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)對(duì)其中的柚皮蕓香苷、橙皮苷、川陳皮素、3，5，6，7，8，3’，4’-七甲氧基黃酮、紅橘素進(jìn)行測(cè)定［10］;肖建春研究陳皮時(shí)，以283 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，對(duì)其中的橙皮苷、柚皮苷、川陳皮素、橘紅素進(jìn)行檢測(cè)［11］。這些實(shí)驗(yàn)對(duì)陳皮的質(zhì)控方法進(jìn)行了有益的探索，但選擇的測(cè)定波長(zhǎng)并不是其中某些成分的最大吸收。本實(shí)驗(yàn)對(duì)目前南京市場(chǎng)上常見(jiàn)的“陳皮”飲片進(jìn)行研究，有針對(duì)性地對(duì)其中具有明顯生理活性的幾個(gè)黃酮類(lèi)成分進(jìn)行研究，在摸清其最大吸收波長(zhǎng)的基礎(chǔ)上，采用PDA檢測(cè)器逐個(gè)進(jìn)行定量分析。測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性和穩(wěn)定性都比較高。

3.2 這次收集到的主要是浙江和江西的飲片，只有一個(gè)批次的飲片來(lái)自于廣西。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看，其中所含的橙皮苷量均大于6.0%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于《中國(guó)藥典》2010年版所規(guī)定的不低于2.5%的標(biāo)準(zhǔn)［1］，也高于以往文獻(xiàn)記載的“廣陳皮”中橙皮苷量［9］;蕓香柚皮苷的量也明顯高于以往文獻(xiàn)記載的“陳皮”中的量［10］，差不多高了一倍左右;川陳皮素的量低于“廣陳皮”［9］，但與以往文獻(xiàn)記載的“陳皮”中量相一致［10］;橘皮素量低于以往文獻(xiàn)的記載［10］。甜橙黃酮的量為本實(shí)驗(yàn)首次測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)收集到的南京市場(chǎng)上陳皮飲片中所含的甜橙黃酮量非常低。

3.3 本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的均為陳皮中具有生理活性的黃酮類(lèi)成分，且以多甲氧基黃酮為主，此次測(cè)定的5種黃酮成分中，除蕓香柚皮苷外，其余4種均為甲氧基黃酮類(lèi)物質(zhì)。近年來(lái)研究表明，陳皮中的多甲氧基黃酮類(lèi)成分顯著抗腫瘤活性［12-13］，其中川陳皮素在體外試驗(yàn)中表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗腫瘤活性，能對(duì)抗多種腫瘤細(xì)胞的增殖［14-15］，還能有效刺激小鼠氣管黏膜下腺液體分泌速度［16］。

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