茯苓的脂溶性化學(xué)成分研究△

胡佳麗，徐煜彬，竇德強(qiáng)

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

茯苓的脂溶性化學(xué)成分研究△

胡佳麗，徐煜彬，竇德強(qiáng)*

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，遼寧 大連 116600)

目的對茯苓的脂溶性化學(xué)成分進(jìn)行研究，尋找具有重要生物活性及藥用前景的天然產(chǎn)物。方法將茯苓干燥粉末進(jìn)行水蒸氣回流提取，濃縮，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取。將石油醚及乙酸乙酯萃取物經(jīng)正相和反相硅膠柱、制備型HPLC等色譜方法進(jìn)行分離純化，并根據(jù)其理化性質(zhì)和譜學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析及確定。結(jié)果從茯苓的石油醚及乙酸乙酯萃取物中分離得到5個(gè)化合物，分別鑒定為：鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)酯(1)、鄰苯二甲酸二丁酯(2)、茯苓酸(3)、豬苓酸C(4)和去氫茯苓酸(5)。結(jié)論經(jīng)查閱文獻(xiàn)可知，化合物1，2為首次從該植物中分離得到。

茯苓；脂溶性化學(xué)成分；鄰苯二甲酸酯；三萜

茯苓為多孔菌科真菌Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，又名茯菟、茯靈、云苓、松苓等；味甘、淡、性平，歸心、肺、脾、腎經(jīng)；具有利水滲濕，健脾，寧心的功能。用于水腫尿少，痰飲眩悸，脾虛食少，便溏泄瀉，心神不安，驚悸失眠等[1]。茯苓始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]，列為上品。云：“茯苓味甘平，主胸脅逆氣，憂恚、驚邪、恐悸，心下結(jié)痛，寒熱煩滿，咳逆口焦舌干，利小便，久服安魂養(yǎng)神，不饑延年。一名茯菟?！庇醒芯勘砻鬈蜍咧械闹饕瘜W(xué)成分為茯苓多糖、三萜、甾體、樹膠、蛋白質(zhì)、氨基酸等[3-4]。前人主要研究的是茯苓中三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚萃取物中的化學(xué)成分[5-7]，很少有人對石油醚萃取物進(jìn)行研究。筆者對茯苓石油醚及乙酸乙酯萃取物進(jìn)行了更深入的研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BrukerAvanceDRX-500型超導(dǎo)核磁共振儀，HITACHI L-7100單泵高效液相色譜儀，UV L-7400檢測器，YMC C18液相色譜柱(ODS)(日本YMC公司，5 μm，9.4 mm，25 cm)，YB-1A型真空干燥箱，ZF1-Ⅱ型紫外分析儀，KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器。柱色譜用硅膠(100～200，200～300目)、薄層色譜用硅膠(G，GF254)(青島海洋化工廠)。

1.2 試藥

茯苓收集于云南騰沖縣(批號：20121101)，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)康廷國教授鑒定為多孔菌科真菌Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。

高效液相用試劑(色譜純，美國Oceanpak Alexative Chemical)，其他試劑(化學(xué)純，天津市登科化學(xué)試劑有限公司)。

2 提取分離

將干燥的茯苓藥材(8 kg)粉碎，過20目篩，以10倍量藥液比水蒸氣回流提取2次，每次2 h，提取液靜置，傾倒出上清液，底部混濁物進(jìn)行抽濾，合并提取液并濃縮至1倍量，以80%的乙醇在1～4 ℃下進(jìn)行醇沉，過夜，減壓回收溶劑至1倍量且無醇味，依次用石油醚和乙酸乙酯進(jìn)行1∶1藥液比萃取。石油醚萃取物經(jīng)過反復(fù)硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(100∶0，80∶1，50∶1)系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，得到流分，經(jīng)過制備型HPLC得到化合物1(16 mg)，2(195 mg)，乙酸乙酯部分經(jīng)過反復(fù)硅膠柱，以三氯甲烷-甲醇(100∶0，75∶1，50∶1)、石油醚-丙酮(20∶1，10∶1，5∶1)溶劑系統(tǒng)進(jìn)行梯度洗脫，得到的流分經(jīng)過制備型HPLC得到化合物3(300 mg)，4(30 mg)，5(50 mg)，見圖1。

圖1 化合物1～5的結(jié)構(gòu)式

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：淡黃色油狀液體，溶于三氯甲烷、乙醚和甲醇；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯紫色斑點(diǎn)。ESI-MSm/z：391.4[M+H]+。1H-NMR(500 Hz，CDCl3)δ：7.70(2 H，dd，J=5.6，3.3 Hz)、7.52(2 H，dd，J=5.6，3.3 Hz)、4.20(2 H，dd，J=10.9，6.2 Hz)、1.68(2 H，t，J=6.2 Hz)、1.26～1.45(4 H，m)、0.92(6 H，t，J=7.5 Hz)、1.26～1.45(12 H，m)、0.90(6 H，t，J=7.0 Hz)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：167.7(C-1)、132.5(C-2)、128.8(C-3)、130.9(C-4)、68.2(C-1′)、38.8(C-2′)、30.4(C-5′)、29.0(C-6′)、23.8(C-3′)、23.0(C-7′)、14.0(C-8′)、11.0(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)酯(phthalic acid bis-(2-ethylhexyl)ester)基本一致[8]，故確定化合物1為鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)酯，為首次從茯苓中分離得到。

化合物2：淡黃色油狀液體，易溶于三氯甲烷、二氯甲烷和甲醇；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯紫色斑點(diǎn)。ESI-MSm/z：279.0[M+H]+、277[M-H]-。1H-NMR(500 Hz，CDCl3)δ：7.72(2 H，dd，J=5.8，3.5 Hz)、7.52(2 H，dd，J=5.7，3.3 Hz)、4.31(4 H，t，J=6.7 Hz)、1.72(4 H，m)、1.44(4 H，m)、0.96(6 H，t，J=7.5 Hz)。13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：167.7(C-1)、132.4(C-2)、130.9(C-4)、128.9(C-3)、65.6(C-1′)、30.6(C-2′)、19.2(C-3′)、13.7(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate)基本一致[9]，故確定化合物2為鄰苯二甲酸二丁酯，為首次從茯苓中分離得到。

化合物3：白色針狀結(jié)晶，易溶于三氯甲烷、吡啶；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯紫色斑點(diǎn)，紫外燈365 nm下無熒光，254 nm下無暗斑，碘熏顯色。TLC[CH2Cl2-MeOH(10∶1)]，Rf值為0.6。ESI-MSm/z：527.0[M-H]-。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)δ：178.8(C-21)、170.6(CH3CO)、156.1(C-24)、135.0(C-8)、134.4(C-9)、107.0(C-31)、80.7(C-3)、76.7(C-16)、57.3(C-17)、50.7(C-5)、48.8(C-14)、48.7(C-20)、46.3(C-13)、43.7(C-15)、38.0(C-4)、37.2(C-10)、35.4(C-1)、33.3(C-23)、31.6(C-22)、29.7(C-12)、28.0(C-28)、26.8(C-7)、25.4(C-30)、24.5(C-2)、22.0(C-26)、21.9(C-27)、21.1(CH3CO)、20.9(C-11)、19.2(C-19)、18.4(C-6)、17.8(C-18)、16.8(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的茯苓酸(pachymic acid)基本一致[10]，故確定化合物3為茯苓酸。

化合物4：白色針狀結(jié)晶，易溶于三氯甲烷、吡啶，不溶于二氯甲烷、甲醇；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯色紫色斑點(diǎn)。ESI-MSm/z：482.0[M]+。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)δ：215.1(C-3)、178.6(C-21)、156.1(C-24)、144.8(C-9)、142.9(C-8)、120.7(C-7)、117.7(C-11)、107.1(C-31)、76.4(C-16)、57.6(C-17)、51.1(C-5)、49.4(C-14)、48.5(C-20)、47.5(C-4)、45.1(C-13)、44.4(C-15)、37.5(C-10)、36.8(C-1)、36.3(C-12)、34.9(C-2)、34.1(C-25)、33.2(C-23)、31.5(C-22)、26.4(C-30)、25.7(C-28)、23.9(C-6)、22.4(C-29)、22.0(C-26，19)、21.9(C-27)、17.6(C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的豬苓酸C(polyporenic acid C)基本一致[11]，故確定化合物4為豬苓酸C。

化合物5：白色針狀結(jié)晶。溶于三氯甲烷、吡啶，紫外燈365 nm下有熒光；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯紫色斑點(diǎn)。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)δ：178.1(C-21)、170.5(CH3CO)、156.1(C-24)、145.8(C-9)、142.8(C-8)、120.7(C-7)、117.0(C-11)、107.1(C-31)、80.6(C-3)、76.4(C-16)、57.6(C-17)、49.6(C-5)、49.4(C-14)、48.5(C-20)、45.1(C-13)、44.4(C-15)、37.9(C-4)、37.6(C-10)、36.3(C-12)、35.6(C-1)、34.1(C-25)、33.2(C-23)、31.5(C-22)、28.2(C-28)、26.6(C-30)、24.6(C-2)、23.1(C-6)、22.8(C-19)、22.0(C-26)、21.9(C-27)、21.1(CH3CO)、17.6(C-18)、17.1(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道的去氫茯苓酸(dehydropachymic acid)基本一致[12]，故確定化合物5為去氫茯苓酸。

4 討論

蔡明磊等[13]認(rèn)為鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)酯是實(shí)驗(yàn)材料在生產(chǎn)中的某些因素所引入的，本實(shí)驗(yàn)在提取時(shí)使用的是銅制桶而不是塑料桶，其后的萃取、分離操作中也均為玻璃器具，因此可以排除化合物1和2是由實(shí)驗(yàn)器材引入的可能性。古植物在深埋地下及化石形成過程中化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)可能會經(jīng)歷自身的氧化還原、降解和其他的化學(xué)反應(yīng)等，但也可能會被完好無損地保留下來。趙有興[14]采用白堊紀(jì)(約1.2億年)銀杏葉化石、150年前銀杏葉和現(xiàn)代銀杏葉樣品成分進(jìn)行GC-MS分析，發(fā)現(xiàn)鄰苯二甲酸二丁酯的含量分別為24.79%，2.82%和0.43%；鄰苯二甲酸二乙酯的含量分別為0.42%，1.16%，現(xiàn)代銀杏葉中含有微量鄰苯二甲酸二乙酯。綜合以上分析，可認(rèn)為本實(shí)驗(yàn)所分離得到的鄰苯二甲酸二丁酯和鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)是本身存在于茯苓植物體中。

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LiposolubleCompoundsfromPoriacocos

HUJiali，XUYubin，DOUDeqiang*

(PharmacyCollegeofLiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine，Dalian116600，China)

Objective：To study the chemical constituents of Yun-Fu Ling，aiming at searching for bioactive natural products.MethodsPoriacocosdry power was refluxed，and then the extraction was concentrated and extracted successively with petroleum ether and ethyl acetate.Various chromatographic methods including normal phase silica gel，reversed phase ODS，and HPLC methods were used to isolate the compounds and the structure was elucidated by physicochemical properties and spectral analysis.ResultsFive compounds were isolated from the petroleum ether and ethyl acetate extracts，which were characterized as phthalic acid bis-(2-ethylhexyl)ester(1)，dibutyl phthalate(2)，pachymic acid(3)，polyporenic acid C(4)，dehydropachymic acid(5).ConclusionThe compounds1and2were isolated fromPoriacocosfor the first time.

Poriacocos；Liposoluble compound；Phthalates；Triterpene

國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(2013CB531803)；2013遼寧省高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)課題(LT2013020)

*

竇德強(qiáng)，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥藥效(性)物質(zhì)基礎(chǔ)及新藥開發(fā)研究；Tel：(0411)87406497，E-mail：deqiangdou@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.03.004

2013-09-27)