測(cè)定新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁的含量

熱薩萊提·伊敏+買(mǎi)買(mǎi)提·吐?tīng)栠d+塔伊爾·麥孜尼

【摘 要】 目的：建立采用超聲波提取，高效液相色譜法測(cè)定新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁的含量的方法。方法：色譜柱：安捷倫HC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相體積比50∶50的甲醇-0.4%磷酸溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm；柱溫為30℃；流速為1.0ml/min低壓梯度洗脫。結(jié)果：綠原酸和蘆丁分別在12.5～150μg/ml（r=0.9998）和12.5～150μg/ml（r=0.9998）濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為101.08% （RSD=1.38%，n=5）和99.56%（RSD=1.17%，n=5）。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便快速、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確可靠，適用于新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁的含量測(cè)定。

【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法；二極管陣列檢測(cè)器；新疆闊克阿木提果皮；綠原酸；蘆丁

【中圖分類號(hào)】R284.2 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2014）18-0007-02

HPLC-PAD determination of Chlorogenic acid and Rutin contents in Xinjiang Kvk Amut peel

Resalat EMIN，Mamat TURSON，Tahir Mazin

Department of chemistry and environmental science，Kashigar Teachers College，Kashigar 844007，China

Abstract：Objective The content of Chlorogenic acid and Rutin contents in Xinjiang Kvk Amut peel was determined.Methods RP-HPLC with Agilent HC-C18 column（250mm×4.6mm.，5μm）.The mobile phase was CH3OH-0.4%H3PO4（50∶50，v/v） with flow rate of 1.0ml·min-1，the detection wavelength was 360nm.Results There was a linear correlation between the concentration of chlorogenic acid（12.5（150μg/mL，r=0.9998）and rutin（12.5 150μg/mL，r=0.9998）.The average recovery of chlorogenic acid and rutin were 101.08%（RSD=1.38%，n=5）and 99.56%（RSD=1.17%，n=5）.Conclusion The method is simple，rapid，reproducible，accurate and reliable，It could be used to identify and evaluate the quantitative determination of chlorogenic acid and rutin content of Xinjiang Kvk Amut peel.

Keywords：HPLC-PAD；Xinjiang Kvk Amut peel；Chlorogenic acid ； Rutin

新疆闊克阿木提，主要生長(zhǎng)在南疆。果實(shí)扁圓形，熟時(shí)味酸、青色、有點(diǎn)淡淡的甜味，耐儲(chǔ)運(yùn)，堆積放一段時(shí)間后果實(shí)變黃、變軟、變甜，酸味降低，口感變好。如放在溫度較高的地方則會(huì)出現(xiàn)黑色斑點(diǎn)，顏色較差，因此比較適合低溫儲(chǔ)存。新疆闊克阿木提由于生長(zhǎng)在日光照射強(qiáng)烈，照射時(shí)間長(zhǎng)的地方，所以蛋白質(zhì)、脂肪、糖、粗纖維、礦物質(zhì)、維生素等物質(zhì)比較豐富，尤其是含鐵量很高，在維醫(yī)中有不可替代的作用。新疆闊克阿木提具有提高免疫力、止咳潤(rùn)肺的功效，咳嗽痰稠或無(wú)痰、咽喉發(fā)癢干疼，慢性支氣管炎、肺結(jié)核等患者可將新疆闊克阿木提埋在火爐里，等涼食用。目前新疆闊克阿木提果皮綠原酸和蘆丁的提取和測(cè)定未見(jiàn)任何報(bào)道，本文研究了新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁的不同提取方法，并利用高效液相色譜（HPLC）測(cè)定其含量。為新疆闊克阿木提資源的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究利用藥用價(jià)值的深入研究以及質(zhì)量評(píng)價(jià)等提供可靠的參考依可靠的依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 島津LC-20AT高效液相色譜儀（配有SPD-M20A 二極管陣列檢測(cè)器， DGU-20A5 在線脫氣機(jī)，LC-solution 工作站）；KQ3200DE 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；XA-1型多功能粉碎機(jī)（江蘇姜堰市分析儀器廠）；ZK-82B 真空干燥箱（上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠）；賽多利斯 BS224S 型電子天平（德國(guó)）。

1.2 材料 綠原酸（批號(hào)：0753-200111）、蘆?。ㄅ?hào)：0080-970）對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；甲醇、乙腈為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。新疆闊克阿木提采集于當(dāng)?shù)剞r(nóng)村，將采集的新疆闊克阿木提用蒸餾水洗凈，削皮陰干，藥材粉碎機(jī)粉碎， 過(guò)60目篩，裝試劑瓶備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：安捷倫HC-C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.4% 磷酸（50∶50，v/v）；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL 。

2.2 溶液的配制

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 分別準(zhǔn)確稱取干燥至恒重的綠原酸及蘆丁對(duì)照品各5.0mg于50ml容量瓶中，用甲醇完全溶解并定容至刻度，搖勻，得100μg/ml綠原酸和蘆丁對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別準(zhǔn)確吸取不同體積的綠原酸（12.5、25.0、50、100、150、200ml）及蘆?。?2.5、25.0、50、100、150、200ml）標(biāo)準(zhǔn)液于6個(gè)10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，在冰箱里保存（7℃）。

2.2.2 樣品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取干燥并粉碎的新疆闊克阿木提粉果皮末2.0g （過(guò)60目篩），加75%甲醇（50ml），超聲提取20min 浸泡1h超聲20min，過(guò)濾除渣，50℃減壓濃縮濾液，放至室溫，用甲醇定容至25ml，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液置于冰箱備用。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 從二極管陣列檢測(cè)器采集的樣品三維圖譜中提取紫外光譜和不同波長(zhǎng)的色譜進(jìn)行對(duì)比，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm時(shí)色譜峰的峰形對(duì)稱，達(dá)到定量分析要求，并根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[1-3]確定360nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 方法線性關(guān)系考察 分別取對(duì)照品溶液12.5、25、50、100、150、200mg/μl，重復(fù)進(jìn)樣（n=6），按“2.1”下的色譜條件進(jìn)行，記錄峰面積。分別以對(duì)照品的濃度C（μg/ml） 為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，綠原酸的回歸方程：A=5065.8c+6473.7，r=0.9998，線性范圍為12.5～150μg/ml；蘆丁的回歸方程：A = 16432.8c-8250.8，r=0.9998，線性范圍12.5～150μg/ml。

2.5 精密度試驗(yàn)和重復(fù)性試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，在“2.1”的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定綠原酸和蘆丁峰面積的RSD分別為1.55%和1.18%（n=5）。精密稱取同一新疆闊克阿木提果皮樣品5份，每份約2.0g，按“2.2”的方法制備樣品溶液，計(jì)算所得到的樣品（新疆闊克阿木提果皮）中綠原酸與蘆丁含量的平均值分別為1.98%和0.43%，RSD分別為1.95%和1.83%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品溶液，分別放置0、3、6、9、12、15h后，在“2.1”的色譜條件下進(jìn)樣進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)計(jì)算所得到的綠原酸峰面積的RSD為1.76%和蘆丁峰面積的RSD為1.99%。試驗(yàn)結(jié)果表明樣品溶液在15h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取已知綠原酸、蘆丁含量的新疆闊克阿木提果皮樣品5份，每份約1g，分別添加不同量的綠原酸、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“2.2”制備加標(biāo)樣品溶液，按“2.1”的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。其平均回收率為綠原酸101.08% 、蘆丁99.56%；RSD分別為1.38%，1.17%。

2.8 樣品含量測(cè)定結(jié)果 精密吸取少花龍葵樣品溶液10μl進(jìn)樣，并按“2.1”的色譜條件進(jìn)行平行5次測(cè)定，計(jì)算樣品中綠原酸的含量。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 提取溶劑及提取方法的選擇 考察了75%甲醇回流法、75%甲醇超聲波提取法、75%甲醇過(guò)夜浸泡法。結(jié)果表明，用75%甲醇超聲提取20min，浸泡1h，再超聲提取20min的方法，綠原酸和蘆丁的提取率最高，而且超聲提取具有操作簡(jiǎn)單、能耗低、易于實(shí)現(xiàn)，快速高效、不破壞有效成分的特點(diǎn)。故選擇超聲提取20min，浸泡1h，再超聲提取20min作為提取時(shí)間。

3.2 流動(dòng)相的選擇 考察了不同比例的甲醇/乙酸，甲醇/0.1%磷酸，甲醇/0.4%磷酸，乙腈/磷酸，溶液為流動(dòng)相時(shí)[4、5]，樣品的分離情況，當(dāng)體積比例為50∶50的甲醇/0.4%磷酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)，綠原酸、蘆丁峰形良好能達(dá)到基線分離，并且與其他雜質(zhì)峰得到了良好的分離，峰形良好。因此，確定甲醇-0.4%磷酸（50∶50，v/v）為流動(dòng)相。

本實(shí)驗(yàn)建立了以75%甲醇為提取劑超聲波提取，提取液經(jīng)有機(jī)微孔濾膜（0.45μm）HPLC法同時(shí)測(cè)定新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁含量的定量分析方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，綠原酸和蘆丁分別在12.5～150 μg/ml（r=0.9998）和12.5～150μg/ml（r=0.9998）濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為101.08%（RSD=1.38%，n=5）和99.56%（RSD=1.17%，n=5）。該方法簡(jiǎn)便快速、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確可靠、適用于同時(shí)測(cè)定新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁的含量。為新疆闊克阿木提資源的深度開(kāi)發(fā)利用，藥用價(jià)值研究以及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了可靠的參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾分冊(cè)[S].新疆：新疆科技衛(wèi)生出版社，1999：175.

[2]張雪，褚文靜，黃喜茹，等.反相高效液相色譜二極管陣列檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定丹參飲片中5種水溶性成分[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)，2010，46（11）：1323-1325.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1081.

[4]郭炬亮，李新霞，支玲.HPLC測(cè)定糙枝金絲桃中綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、槲皮素和山奈酚[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013（19）：75-78.

[5]張曉明，趙二勞，胡芳馨.反相高效液相色譜法測(cè)定玉米須中綠原酸和蘆丁的含量[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（6）：90-92.

（收稿日期：2014.07.04）

2.2.2 樣品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取干燥并粉碎的新疆闊克阿木提粉果皮末2.0g （過(guò)60目篩），加75%甲醇（50ml），超聲提取20min 浸泡1h超聲20min，過(guò)濾除渣，50℃減壓濃縮濾液，放至室溫，用甲醇定容至25ml，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液置于冰箱備用。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 從二極管陣列檢測(cè)器采集的樣品三維圖譜中提取紫外光譜和不同波長(zhǎng)的色譜進(jìn)行對(duì)比，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm時(shí)色譜峰的峰形對(duì)稱，達(dá)到定量分析要求，并根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[1-3]確定360nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 方法線性關(guān)系考察 分別取對(duì)照品溶液12.5、25、50、100、150、200mg/μl，重復(fù)進(jìn)樣（n=6），按“2.1”下的色譜條件進(jìn)行，記錄峰面積。分別以對(duì)照品的濃度C（μg/ml） 為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，綠原酸的回歸方程：A=5065.8c+6473.7，r=0.9998，線性范圍為12.5～150μg/ml；蘆丁的回歸方程：A = 16432.8c-8250.8，r=0.9998，線性范圍12.5～150μg/ml。

2.5 精密度試驗(yàn)和重復(fù)性試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，在“2.1”的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定綠原酸和蘆丁峰面積的RSD分別為1.55%和1.18%（n=5）。精密稱取同一新疆闊克阿木提果皮樣品5份，每份約2.0g，按“2.2”的方法制備樣品溶液，計(jì)算所得到的樣品（新疆闊克阿木提果皮）中綠原酸與蘆丁含量的平均值分別為1.98%和0.43%，RSD分別為1.95%和1.83%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品溶液，分別放置0、3、6、9、12、15h后，在“2.1”的色譜條件下進(jìn)樣進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)計(jì)算所得到的綠原酸峰面積的RSD為1.76%和蘆丁峰面積的RSD為1.99%。試驗(yàn)結(jié)果表明樣品溶液在15h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取已知綠原酸、蘆丁含量的新疆闊克阿木提果皮樣品5份，每份約1g，分別添加不同量的綠原酸、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“2.2”制備加標(biāo)樣品溶液，按“2.1”的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。其平均回收率為綠原酸101.08% 、蘆丁99.56%；RSD分別為1.38%，1.17%。

2.8 樣品含量測(cè)定結(jié)果 精密吸取少花龍葵樣品溶液10μl進(jìn)樣，并按“2.1”的色譜條件進(jìn)行平行5次測(cè)定，計(jì)算樣品中綠原酸的含量。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 提取溶劑及提取方法的選擇 考察了75%甲醇回流法、75%甲醇超聲波提取法、75%甲醇過(guò)夜浸泡法。結(jié)果表明，用75%甲醇超聲提取20min，浸泡1h，再超聲提取20min的方法，綠原酸和蘆丁的提取率最高，而且超聲提取具有操作簡(jiǎn)單、能耗低、易于實(shí)現(xiàn)，快速高效、不破壞有效成分的特點(diǎn)。故選擇超聲提取20min，浸泡1h，再超聲提取20min作為提取時(shí)間。

3.2 流動(dòng)相的選擇 考察了不同比例的甲醇/乙酸，甲醇/0.1%磷酸，甲醇/0.4%磷酸，乙腈/磷酸，溶液為流動(dòng)相時(shí)[4、5]，樣品的分離情況，當(dāng)體積比例為50∶50的甲醇/0.4%磷酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)，綠原酸、蘆丁峰形良好能達(dá)到基線分離，并且與其他雜質(zhì)峰得到了良好的分離，峰形良好。因此，確定甲醇-0.4%磷酸（50∶50，v/v）為流動(dòng)相。

本實(shí)驗(yàn)建立了以75%甲醇為提取劑超聲波提取，提取液經(jīng)有機(jī)微孔濾膜（0.45μm）HPLC法同時(shí)測(cè)定新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁含量的定量分析方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，綠原酸和蘆丁分別在12.5～150 μg/ml（r=0.9998）和12.5～150μg/ml（r=0.9998）濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為101.08%（RSD=1.38%，n=5）和99.56%（RSD=1.17%，n=5）。該方法簡(jiǎn)便快速、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確可靠、適用于同時(shí)測(cè)定新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁的含量。為新疆闊克阿木提資源的深度開(kāi)發(fā)利用，藥用價(jià)值研究以及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了可靠的參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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[2]張雪，褚文靜，黃喜茹，等.反相高效液相色譜二極管陣列檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定丹參飲片中5種水溶性成分[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊(cè)，2010，46（11）：1323-1325.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1081.

[4]郭炬亮，李新霞，支玲.HPLC測(cè)定糙枝金絲桃中綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、槲皮素和山奈酚[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013（19）：75-78.

[5]張曉明，趙二勞，胡芳馨.反相高效液相色譜法測(cè)定玉米須中綠原酸和蘆丁的含量[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（6）：90-92.

（收稿日期：2014.07.04）

2.2.2 樣品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取干燥并粉碎的新疆闊克阿木提粉果皮末2.0g （過(guò)60目篩），加75%甲醇（50ml），超聲提取20min 浸泡1h超聲20min，過(guò)濾除渣，50℃減壓濃縮濾液，放至室溫，用甲醇定容至25ml，搖勻，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液置于冰箱備用。

2.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定 從二極管陣列檢測(cè)器采集的樣品三維圖譜中提取紫外光譜和不同波長(zhǎng)的色譜進(jìn)行對(duì)比，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm時(shí)色譜峰的峰形對(duì)稱，達(dá)到定量分析要求，并根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[1-3]確定360nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.4 方法線性關(guān)系考察 分別取對(duì)照品溶液12.5、25、50、100、150、200mg/μl，重復(fù)進(jìn)樣（n=6），按“2.1”下的色譜條件進(jìn)行，記錄峰面積。分別以對(duì)照品的濃度C（μg/ml） 為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，綠原酸的回歸方程：A=5065.8c+6473.7，r=0.9998，線性范圍為12.5～150μg/ml；蘆丁的回歸方程：A = 16432.8c-8250.8，r=0.9998，線性范圍12.5～150μg/ml。

2.5 精密度試驗(yàn)和重復(fù)性試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，在“2.1”的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定綠原酸和蘆丁峰面積的RSD分別為1.55%和1.18%（n=5）。精密稱取同一新疆闊克阿木提果皮樣品5份，每份約2.0g，按“2.2”的方法制備樣品溶液，計(jì)算所得到的樣品（新疆闊克阿木提果皮）中綠原酸與蘆丁含量的平均值分別為1.98%和0.43%，RSD分別為1.95%和1.83%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品溶液，分別放置0、3、6、9、12、15h后，在“2.1”的色譜條件下進(jìn)樣進(jìn)行檢測(cè)。通過(guò)計(jì)算所得到的綠原酸峰面積的RSD為1.76%和蘆丁峰面積的RSD為1.99%。試驗(yàn)結(jié)果表明樣品溶液在15h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn) 準(zhǔn)確稱取已知綠原酸、蘆丁含量的新疆闊克阿木提果皮樣品5份，每份約1g，分別添加不同量的綠原酸、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照“2.2”制備加標(biāo)樣品溶液，按“2.1”的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。其平均回收率為綠原酸101.08% 、蘆丁99.56%；RSD分別為1.38%，1.17%。

2.8 樣品含量測(cè)定結(jié)果 精密吸取少花龍葵樣品溶液10μl進(jìn)樣，并按“2.1”的色譜條件進(jìn)行平行5次測(cè)定，計(jì)算樣品中綠原酸的含量。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 提取溶劑及提取方法的選擇 考察了75%甲醇回流法、75%甲醇超聲波提取法、75%甲醇過(guò)夜浸泡法。結(jié)果表明，用75%甲醇超聲提取20min，浸泡1h，再超聲提取20min的方法，綠原酸和蘆丁的提取率最高，而且超聲提取具有操作簡(jiǎn)單、能耗低、易于實(shí)現(xiàn)，快速高效、不破壞有效成分的特點(diǎn)。故選擇超聲提取20min，浸泡1h，再超聲提取20min作為提取時(shí)間。

3.2 流動(dòng)相的選擇 考察了不同比例的甲醇/乙酸，甲醇/0.1%磷酸，甲醇/0.4%磷酸，乙腈/磷酸，溶液為流動(dòng)相時(shí)[4、5]，樣品的分離情況，當(dāng)體積比例為50∶50的甲醇/0.4%磷酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)，綠原酸、蘆丁峰形良好能達(dá)到基線分離，并且與其他雜質(zhì)峰得到了良好的分離，峰形良好。因此，確定甲醇-0.4%磷酸（50∶50，v/v）為流動(dòng)相。

本實(shí)驗(yàn)建立了以75%甲醇為提取劑超聲波提取，提取液經(jīng)有機(jī)微孔濾膜（0.45μm）HPLC法同時(shí)測(cè)定新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁含量的定量分析方法。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，綠原酸和蘆丁分別在12.5～150 μg/ml（r=0.9998）和12.5～150μg/ml（r=0.9998）濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率分別為101.08%（RSD=1.38%，n=5）和99.56%（RSD=1.17%，n=5）。該方法簡(jiǎn)便快速、重現(xiàn)性好、準(zhǔn)確可靠、適用于同時(shí)測(cè)定新疆闊克阿木提果皮中綠原酸和蘆丁的含量。為新疆闊克阿木提資源的深度開(kāi)發(fā)利用，藥用價(jià)值研究以及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了可靠的參考依據(jù)。

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（收稿日期：2014.07.04）