淫羊藿通絡(luò)丸薄層色譜鑒別方法的研究

吳世福，王 紅

(1.山東省醫(yī)療器械產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，山東濟(jì)南250101;2.濟(jì)寧市第一人民醫(yī)院西院區(qū)，山東濟(jì)寧271000)

淫羊藿通絡(luò)丸由炙淫羊藿、桂枝、炒白術(shù)、茯苓、人參等7味中藥組成，具有溫補(bǔ)脾腎、祛濕通絡(luò)的功效，用于糖尿病周圍神經(jīng)病變之脾腎陽虛、濕瘀阻絡(luò)證。本文通過對樣品處理方法、展開劑的考察，建立了專屬性強(qiáng)、簡便可行的薄層色譜鑒別方法，可有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥安全有效。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 十萬分之一電子分析天平(密特勒－托利多儀器有限公司);萬分之一電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司);數(shù)顯恒溫水浴鍋(金坊市醫(yī)療儀器廠);智能電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上?，樮帉?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲波有限公司);硅膠G(青島海洋化工廠);定量毛細(xì)管(日本島津)，MERCK薄層層析板(批號:OB678541)。

1.2 試藥 淫羊藿苷(批號:110737－200415)、人參皂苷Rb1對照品(批號:110704－200921)、人參皂苷Re對照品(批號:110754－200822)、人參皂苷Rg1對照品(批號:110703－201128)、川芎對照藥材(批號:120918－201110)、芍藥苷對照品(批號:110736－201136)、白術(shù)對照藥材(批號:120925－201109)桂枝對照藥材(批號:121191－201103)、人參對照藥材(批號:120917－200609)，均由中國藥品生物制品檢定所提供;淫羊藿通絡(luò)丸(批號為120801、120403、120902，由濟(jì)寧市中醫(yī)院提供);陰性樣品(自制):按處方工藝分別制備不同藥材相應(yīng)的陰性樣品;試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 炙淫羊藿 取本品14 g，研細(xì)，加乙醇80 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，水溶液備用;合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。取不含炙淫羊藿的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法［《中國藥典》2010年版(一部)附錄Ⅵ B］試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各6 μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠 G薄層板，以乙酸乙酯 － 丁酮 － 甲酸 － 水(10∶1∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，加熱至斑點(diǎn)清晰，置紫外光燈(365 nm)下檢視供試品色譜中，在對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性樣品無干擾，見圖1。

圖1 淫羊藿薄層色譜圖

圖2 人參薄層色譜圖

圖3 人參薄層色譜圖

2.2 人參 取“2.1”項(xiàng)下的水溶液，加水飽和正丁醇振搖提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，依次用濃氨試液25 mL、正丁醇飽和的水25 mL各洗滌2次，分取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)铀?0 mL使溶解，通過D101大孔樹脂柱(內(nèi)徑為1.5 cm，柱高為12 cm)，依次用水50 mL、20%乙醇50 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用80%乙醇80 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液。取不含人參的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。另取人參對照藥材1 g，加乙醇30 mL，超聲處理30 min，濾過，殘?jiān)铀?0 mL溶解，用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，棄去乙酸乙酯液，自“水溶液加水飽和正丁醇振搖提取”起，同法制成對照藥材溶液。再取人參皂苷Rb1對照品、人參皂苷Re對照品及人參皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法［《中國藥典》2010年版(一部)附錄ⅥB］試驗(yàn)，吸取供試品溶液、陰性樣品溶液和對照藥材溶液各10 μL、對照品溶液4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水(65∶35∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應(yīng)位置上，分別顯相同顏色的斑點(diǎn);紫外光燈(365 nm)下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性樣品無干擾，見圖2～3。

2.3 川芎 取本品粉末14 g，加乙醚40 mL，超聲處理30 min，濾過，藥渣備用;濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品溶液。取不含川芎的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。另取川芎對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法［《中國藥典》2010年版(一部)附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯(9∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜圖中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性樣品無干擾，見圖4。

2.4 炒白芍 取“2.3”項(xiàng)下的藥渣，加甲醇50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 mL使溶解，加水飽和正丁醇振搖提取3次，每次40 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取不含炒白芍的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法［《中國藥典》2010年版(一部)附錄Ⅵ B］試驗(yàn)，吸取供試品溶液、陰性樣品溶液各6 μL及對照品溶液4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－乙酸乙酯－濃氨試液(50∶20∶10∶2.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性樣品無干擾，見圖5。

圖4 川芎薄層色譜圖

圖5 炒白芍薄層色譜圖

2.5 炒白術(shù) 取本品粉末14 g，置燒瓶中，加水200 mL，照揮發(fā)油測定法［《中國藥典》2010年版(一部)附錄ⅩD］試驗(yàn)，自冷凝管上端加石油醚(60～90℃)1.5 mL，加熱至沸并保持微沸2 h，分取石油醚液，作為供試品溶液。取不含炒白術(shù)的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。另取白術(shù)對照藥材2 g，同法制備對照藥材溶液。照薄層色譜法［《中國藥典》2010年版(一部)附錄ⅥB］試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4～6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一桃紅色主斑點(diǎn)。陰性樣品無干擾，見圖6。

圖6 炒白術(shù)薄層色譜圖

2.6 桂枝 取桂枝對照藥材2 g，置燒瓶中，加水200 mL，照揮發(fā)油測定法［《中國藥典》2010年版(一部)附錄ⅩD］試驗(yàn)，自冷凝管上端加石油醚(60～90℃)1.5 mL，加熱至沸并保持微沸2 h，分取石油醚液，作為對照藥材溶液。取不含桂枝的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。照薄層色譜法［《中國藥典》2010年版(一部)附錄ⅥB］試驗(yàn)，吸取陰性樣品溶液、“2.5”項(xiàng)下的供試品溶液4～8 μL及上述對照藥材溶液4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。置紫外光燈(365 nm)下檢視，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。陰性樣品無干擾，見圖7～8。

圖7 桂枝薄層色譜圖

3 討論

3.1 本品為中藥復(fù)方制劑，參考有關(guān)文獻(xiàn)［1～6］，采用薄層色譜鑒別方法對方中的主要藥味均進(jìn)行了鑒別，并進(jìn)行了陰性對照試驗(yàn)，結(jié)果其方法簡便且專屬性強(qiáng)，可有效控制本品的質(zhì)量。

圖8 桂枝薄層色譜圖

3.2 提取方法的選擇 分別以乙醚、正己烷為溶劑，采用超聲波提取法及提取揮發(fā)油方法制備供試品溶液，對白術(shù)和桂枝進(jìn)行薄層鑒別，結(jié)果以提取揮發(fā)油法效果較好，薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性樣品無干擾。

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