益氣生津活血方對鏈脲霉素引發(fā)糖尿病大鼠模型的心肌微血管損傷防護作用

宋欽蘭，林海青

(山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，山東濟南250011)

糖尿病被稱為冠心病的等危癥，70% ～80%的患者存在心血管系統(tǒng)并發(fā)癥，主要為心肌彌漫性小血管病變，使心肌硬度增加，彈性降低。益氣生津活血方主要由肉桂、三七、紅花、川芎等中藥組成，具有活血、益氣、生津的功效，能顯著改善糖尿病病人的冠心病癥狀。本實驗通過觀察益氣生津活血方藥對糖尿病大鼠動物模型的影響，考察益氣生津活血方治療糖尿病大鼠并發(fā)冠心病的作用機制，為臨床有效防治糖尿病并發(fā)冠心病提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 動物及分組 SD雄性大鼠(120±15)g 80只，購于山東中醫(yī)藥大學動物中心，合格證號:SCX(魯)2011003。以上大鼠分組，分別為益氣生津活血方低劑量組、益氣生津活血方高劑量組、二甲雙胍組、模型對照組、空白對照組、益氣生津活血方預防組。

1.2 藥品及試劑 白介素－1(IL－1)酶聯(lián)免疫試劑盒，細胞間粘附分子(SICAM－1)酶聯(lián)免疫試劑盒，內皮素－1(ET－1)放射免疫試劑盒(試劑盒均為進口分裝，由迪耐商貿有限公司提供)。益氣生津活血方水煎液:益氣生津活血方中各味中藥由山東中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院提供，處方劑量混合后按常規(guī)中藥煎煮方法煎煮并濃縮至1 g·mL－1備用。

1.3 儀器 勻漿機(IKA)，酶標儀(BIOTEK)，全自動放射免疫R計數(shù)器(SN－695，上海)，DD－5冷凍離心機(JOUAN)，血糖儀(強生)。

2 試驗方法

2.1 造模 高脂飼料+STZ法，按分組大鼠適應環(huán)境飼養(yǎng)7天，空白對照組大鼠用普通飼料。其他5組喂養(yǎng)高脂飼料，同時預防組灌胃益氣生津活血方(9.09 g·kg－1)水煎液，90 d 后一次性腹腔注射STZ 15 mg·kg－1，然后繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料 20 d，然后空腹測體重和血糖，把不符合糖尿病體征大鼠剔除，每組10只。

2.2 試驗方法 除空白對照組外，其余各組灌胃給藥，高、低劑量(36.36、18.18 g·kg－1)分別按臨床用量 2、4 倍量(計算公式為 d大鼠=0.71 k人/0.11)，空白對照組用同體積蒸餾水灌胃，同時預防組繼續(xù)灌胃益氣生津活血方水煎液，連續(xù)灌胃12周，每7 d稱一次體重，按新體重調整灌胃劑量，灌胃結束后禁食不禁水12 h，用戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，腹腔靜脈取血，測血糖，然后3 000 rpm離心20 min，血清－80℃保存?zhèn)溆?。然后取大鼠心臟，一部分用冰生理鹽水沖洗，在冰上沿左心室方向解剖左心室，4%多聚甲醛固定，HE染色，做病理切片。另一部分精確稱重，以5 mL·g－1冰生理鹽水勻漿，制備20%心肌組織漿液，然后于低溫離心機上3 000 rpm離心20 min，取上清液4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3 實驗結果

3.1 取以上待測液，分別按 SICAM－1、IL－1、ET－1試劑盒說明書測定，所得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計處理結果見表1、2。

表1 益氣生津活血方對血糖的影響(±s，n=10)

表1 益氣生津活血方對血糖的影響(±s，n=10)

注:與空白對照模型組比較，*P＜0.05;與模型對照組比較，#P＜0.05

組別 動物數(shù) 造模前血糖 造模后血糖 用藥后血糖空白對照組10 5.31 ±0.56 5.47 ±0.56 5.21 ±1.02低劑量組 10 5.42 ±0.59 8.17 ±1.02# 6.24 ±1.11#高劑量組 10 5.71 ±0.11 8.23 ±1.60# 6.08 ±0.93#預防組 10 5.23 ±0.61 8.30 ±2.11# 5.89 ±1.57#二甲雙胍組 10 4.98 ±1.11 8.86 ±1.64# 5.77 ±1.14#模型對照組 10 6.05 ±1.32 8.11 ±1.25* 9.01 ±2.33*

表2 益氣生津活血方對SICAM－1、IL－1、ET－1的影響(±s，n=10)

表2 益氣生津活血方對SICAM－1、IL－1、ET－1的影響(±s，n=10)

注:與模型對照組比較，*P＜0.05;模型組與空白對照模型組比較，#P＜0.05

組別 動物數(shù) SICAM－1(ng·mL －1)IL－1(pg·mL －1)ET－1(pg·mL －1)10 369.1 ±31.2 60.6 ±14.1 109.3 ±39.7預防組 10 377.4 ±21.6* 61.7 ±11.3* 112.6 ±29.5*低劑量組 10 382.3 ±27.5* 66.7 ±15.6* 127.3 ±39.3*高劑量組 10 379.1 ±31.5* 61.8 ±16.4* 119.5 ±26.7*二甲雙胍組 10 379.8 ±31.7* 73.2 ±21.3* 139.6 ±21.5*模型對照組 10 495.7 ±51.1# 95.2 ±11.8# 157.7 ±26.1空白對照組#

3.2 HE染色后顯微鏡下觀察 模型對照組可見部分心肌纖維呈灶性肥大，且有多個小空泡，細胞變寬變大，細胞核不在中間位置，偏向一側，有的心肌橫紋消失，心肌間質有纖維結締組織樣增生，二甲雙胍組顯微鏡下觀察其心肌細胞與模型對照組形狀相似，但程度明顯減輕，預防組與二甲雙胍組顯微鏡下觀察形狀相近，程度也相近。益氣生津活血方組顯微鏡下觀察心肌細胞與模型對照組相似，程度介于模型對照組與二甲雙胍組和預防組之間。各組心肌細胞顯微鏡下觀察見圖1。

4 討論

有學者［1］認為，糖尿病早期即可出現(xiàn)微血管內皮功能損傷和活性物質分泌異常，其中Nishikawa T等［2］認為，高血糖可增強細胞氧化應激性，這種氧化應激能激活有關的信號傳導通道，通過激活核因子(NF－KB)來上調細胞間黏附分子及炎性因子(SICAM－1、IL－1、ET－1)基因轉錄，通過一系列生物反應，心肌微血管內皮細胞則出現(xiàn)炎癥反應，導致微循環(huán)障礙發(fā)生，因此糖尿病與微血管病變存在必然聯(lián)系。

祖國醫(yī)學認為，陰虛為糖尿病發(fā)生的實質，氣虛是糖尿病不愈之癥結，血瘀是糖尿病并發(fā)癥的關鍵，陰陽兩虛是糖尿病發(fā)病的趨勢［3］，李賽美等［4］臨床研究顯示，中醫(yī)益氣養(yǎng)陰、活血化瘀對糖尿病心肌缺血有一定的效果，且活血效果更佳。吳勇等［5］研究表明，黃芪多糖可降低糖尿病大鼠血糖水平，對早期糖尿病大鼠內皮細胞具有良好的保護作用。

圖1 各組心肌細胞顯微鏡下觀察照片

益氣生津活血方主要由肉桂、黃芪、桂枝、仙靈脾、三七、紅花、川芎、黃連、川牛膝組成，其各組分含量比是經(jīng)過正交試驗獲得，具有活血、溫養(yǎng)、補中益氣之功效。本實驗通過高脂飼料+STZ法成功造成符合臨床Ⅱ糖尿病模型，給模型動物灌胃益氣生津活血方，且通過實驗數(shù)據(jù)分析得知，益氣生津活血方能顯著降低糖尿病大鼠心肌漿液SICAM－1、IL－1、ET－1含量;鏡下觀察，能顯著降低心肌橫紋消失，心肌間質纖維結締組織樣增生，顯著降低心肌纖維肥大和脂肪細胞堆積。實驗證明，益氣生津活血方對鏈脲霉素引發(fā)糖尿病心肌微血管損傷具有保護作用。

［1］Suwaidi JA，Hamasaki S，Higano ST，et al.Long － term follow－up of patients with mild coronary artery disease endothelial dysfunction［J］.Circulation，2000，101(9):948－954.

［2］Nishikawa T，Edelstein D，Du XL，et al.Normalizing mitochondrial superoxide production blocks three pathways of hyperglycaemic damage［J］.Nature，2000，404(6779):787－790.

［3］周魯，周曉芳，付超，等.271首治療糖尿病中藥復方用藥規(guī)律研究［J］.新中醫(yī)，2004，36(11):40 －41.

［4］李賽美，熊曼琪，林安鐘，等.中醫(yī)不同治法對糖尿病大鼠冠狀動脈結扎致心肌缺血預防作用的對比觀察［J］.中國中西醫(yī)結合雜志，2000，20(6):438 －440.

［5］吳勇，歐陽靜萍，涂淑珍，等.黃芪多糖對糖尿病大鼠血管內皮細胞的影響［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2002，29(1):22－23.