轉(zhuǎn)錄因子在孟魯司特鈉治療類固醇激素抵抗型變應(yīng)性鼻炎中的作用

任剛+++徐玨+++羅旭東+等

[摘要] 目的 研究外周血單個(gè)核細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白-1（AP-1）及核因子-κB（NF-κB）在孟魯司特鈉治療類固醇激素抵抗型變應(yīng)性鼻炎（AR）中的作用。方法 篩選50例類固醇激素抵抗型AR患者，隨機(jī)分成兩組，分別口服孟魯司特鈉片（孟魯司特鈉組）或ATP片（安慰劑組）治療，治療21 d后，對(duì)兩組患者進(jìn)行癥狀和體征記分，應(yīng)用EMSA法測(cè)定外周血中AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性，ELISA法測(cè)定血清IL-4、IL-5及IL-10的表達(dá)水平。結(jié)果 治療21 d后，孟魯司特鈉組治療有效率顯著高于安慰劑組（P<0.01）；與安慰劑組比較，孟魯司特鈉組AP-1和NF-κB的DNA結(jié)合活性明顯降低（P<0.01）；孟魯司特鈉組癥狀與體征總積分下降指數(shù)（SRI）與AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），而安慰劑組兩者間無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系（P>0.05）；經(jīng)治療后孟魯司特鈉組患者血清IL-4、IL-5水平較安慰劑組顯著降低，而IL-10水平較安慰劑組顯著升高（P<0.01）。結(jié)論 孟魯司特鈉可能通過抑制外周血單個(gè)核細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子AP-1及NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子IL-4、IL-5及IL-10的表達(dá)，改善類固醇激素抵抗型AR患者病情，發(fā)揮抗炎作用。

[關(guān)鍵詞] 常年性變應(yīng)性鼻炎；類固醇抵抗；活化蛋白-1；核因子-κB；白介素-4；白介素-5；白介素-10

[中圖分類號(hào)] R765.21 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2014）26-0041-05

盡管鼻用類固醇激素在變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR）的治療中起核心作用[1]，然而，在臨床上有相當(dāng)一部分AR患者吸入類固醇激素治療后并不能有效緩解臨床癥狀，對(duì)類固醇治療無(wú)反應(yīng)，從廣義來(lái)說(shuō)稱之為類固醇激素抵抗型AR[2]。類固醇激素抵抗型病例的出現(xiàn)已成為AR臨床治療的難題，且長(zhǎng)期大劑量應(yīng)用激素常導(dǎo)致一系列嚴(yán)重的不良反應(yīng)，因此，人們?cè)诓粩鄬ふ倚碌挠行幬飦?lái)彌補(bǔ)激素治療的不足。大量研究表明[3，4]，口服白三烯受體拮抗劑能有效改善AR及類固醇激素抵抗型AR的癥狀及轉(zhuǎn)歸，但其具體作用機(jī)制尚不清楚。白三烯受體拮抗劑孟魯司特能通過降低核轉(zhuǎn)錄因子活化蛋白-1（activator protein-1，AP-1）和核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的轉(zhuǎn)錄活性，影響細(xì)胞因子IL-4、IL-5及IL-10的表達(dá)，可作為激素抵抗及激素依賴型哮喘患者的聯(lián)合用藥[5]。目前，國(guó)內(nèi)外尚無(wú)AP-1和NF-κB及相關(guān)細(xì)胞因子在類固醇激素抵抗型AR中表達(dá)及其意義的研究報(bào)道，本研究將采用孟魯司特鈉治療類固醇激素抵抗型AR，觀察其對(duì)AP-1和NF-κB轉(zhuǎn)錄活性及細(xì)胞因子IL-4、IL-5及IL-10的影響，深入認(rèn)識(shí)白三烯受體拮抗劑在類固醇激素抵抗型AR治療中的作用及其機(jī)制，從而為類固醇激素抵抗型AR的治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

篩選2011年1月～2012年12月于我院門診隨訪治療的類固醇抵抗性AR患者（符合類固醇激素抵抗型AR診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]）共50例，男28例，女22例，年齡18～56歲，中位年齡26歲，其診斷及病情分級(jí)均符合2009年武夷山標(biāo)準(zhǔn)[6]。采用單純隨機(jī)法將入選對(duì)象隨機(jī)分配入兩組：孟魯司特鈉組（口服孟魯司特鈉片）25例，男13例，女12例，年齡18～56歲，中位年齡26歲；安慰劑組（口服ATP片）25例，男15例，女10例，年齡18～54歲，中位年齡26歲。兩組研究對(duì)象在年齡、性別、病程、臨床癥狀記分、體征記分等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。所有患者簽署倫理委員會(huì)批準(zhǔn)的知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18～60歲；②符合類固醇抵抗型AR的診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]；③至少有3個(gè)鼻部癥狀（鼻癢、噴嚏、流涕或鼻塞）和體征記分在2分以上。排除標(biāo)準(zhǔn)：①患有哮喘等其他變態(tài)反應(yīng)性疾?。虎诨加衅渌粑兰膊?、嚴(yán)重的鼻中隔偏曲、鼻息肉及鼻竇炎；③妊娠或哺乳期婦女；④患有器質(zhì)性心臟病以及肝、腎功能不全者；⑤惡性腫瘤和其他可能影響正確評(píng)估療效者；⑥在入選前3個(gè)月，局部和（或）全身接受過糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑，3 d內(nèi)使用過抗組胺藥者。退出標(biāo)準(zhǔn)：①未能及時(shí)完成治療，治療依從性差，停藥超過3 d，連續(xù)服藥天數(shù)未達(dá)到3周：②用藥1周以上，癥狀、體征加重或不能有效緩解，導(dǎo)致無(wú)法堅(jiān)持治療；③出現(xiàn)不能耐受的副反應(yīng)或嚴(yán)重不良反應(yīng)。退出病例將被計(jì)為無(wú)效病例并進(jìn)行挽救性治療。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

Model 550酶標(biāo)儀、電泳槽及凝膠成像分析系統(tǒng)購(gòu)于美國(guó)Bio-Rad；DY-A型穩(wěn)壓電泳儀由中國(guó)西巴斯生物技術(shù)開發(fā)公司提供；SW41低溫高速離心機(jī)由美國(guó)Beckman提供。淋巴細(xì)胞分離液由天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司提供；溶血素由美國(guó)Beckman-Coulter公司提供；破膜液均美國(guó)BD公司提供；孟魯司特鈉片購(gòu)于美國(guó)默沙東公司；ATP片購(gòu)于廣州光華藥業(yè)股份有限公司；核蛋白提取試劑盒購(gòu)于南京凱基生物科技發(fā)展有限公司；電泳遷移率分析試劑盒、Biotin 3′End DNA Labeling Kit購(gòu)于美國(guó)Pierce公司；探針由上海生工生物工程有限公司合成；IL-4、IL-5及IL-10 ELISA試劑盒由法國(guó)DIACLON公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 研究對(duì)象藥物干預(yù)與隨訪 采用前瞻性隨機(jī)對(duì)照法，將患者隨機(jī)分為兩組：孟魯司特鈉組——口服孟魯司特鈉片（每天1次，每次10 mg，療程21 d）；安慰劑組——口服ATP片（每天1次，每次20 mg，療程21 d）?；颊咝柚鹑沼涗浧浒Y狀的變化，并于治療后的第7、14、21天進(jìn)行隨診，詢問用藥依從性；癥狀與體征是否加重，是否無(wú)法堅(jiān)持治療；是否存在副作用及不良反應(yīng)。按“AR診治原則和推薦方案”[7]，對(duì)臨床主要癥狀（噴嚏、清涕、鼻塞和鼻癢）和體征進(jìn)行評(píng)分，根據(jù)治療前后癥狀記分與體征記分之和，計(jì)算總記分下降指數(shù)（score reduce index，SRI），SRI=（1-治療后總記分/治療前總記分）×100%，根據(jù)SRI評(píng)價(jià)治療效果，若SRI≤25%為治療無(wú)效，若SRI>26%為治療有效。endprint

1.3.2 標(biāo)本的采集與處理 分別在入組當(dāng)天及治療后第21天抽取患者空腹外周靜脈血10 mL，用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝。取2 mL采用3000 r/min離心15 min后取血清，貯存于-20℃冰箱中，用于檢測(cè)血清中IL-4、IL-5及IL-10的濃度。另8 mL 制備PBMC懸液，用于檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性。

1.3.3 電泳遷移率分析法（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）測(cè)定AP-1和NF-κB的DNA結(jié)合活性 （1）收集單個(gè)核細(xì)胞，加入預(yù)冷的PBS，洗滌細(xì)胞2次，按照核蛋白提取試劑盒提取研究對(duì)象PBMCs中的核蛋白，采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃度，分裝并保存于-80℃，避免反復(fù)凍融。（2）EMSA檢測(cè)：①探針標(biāo)記及效率檢測(cè)：AP-1的探針序?yàn)?′-CGCTTGATG AGTCAGCCGGAA-3′、3′-GCGAACTACTCAGTCGGCCTT-5′；NF-κB的探針序列為：5′-AGTT GAGGGGACTTTCCCAGCC-3′、 3′-TCAACTCCCCTGAAAG GGTCCG-5′。運(yùn)用Biotin 3′End DNA Labeling Kit進(jìn)行3′末端標(biāo)記。經(jīng)90℃退火1 min，緩慢冷卻，室溫孵育30 min，合成雙鏈，-20℃保存，并進(jìn)行效率的檢測(cè)。②核蛋白結(jié)合反應(yīng)：5 μg核蛋白與結(jié)合緩沖液，2.5%甘油，5 mmol/L MgCl2，50 ng/μL poly（dI-dC），0.05%NP-40，50 nmol/L生物素標(biāo)記的DNA探針室溫孵育20 min。③非變性凝膠電泳：制備6%聚丙烯酰胺凝膠，上樣，100 V，電泳1 h，4℃，恒流 380 mA，將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移至尼龍膜上。④紫外交聯(lián)：將尼龍膜于254 nm紫外照射10 min進(jìn)行交聯(lián)，以便DNA固定于尼龍膜上。⑤化學(xué)發(fā)光檢測(cè)：將交聯(lián)后的尼龍膜放在干凈培養(yǎng)皿中，加入20 mL LighShiftTM Blocking Buffer，封閉15 min，與辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素溶液（1∶300稀釋）在搖床上孵育15 min，洗膜5 min/4次，然后用LighShiftTM底物平衡緩沖液平衡5 min，X膠片曝光后，常規(guī)顯影，定影。經(jīng)計(jì)算機(jī)圖像分析儀掃描成像，測(cè)定對(duì)應(yīng)條帶的灰度值，計(jì)算轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合比活性。

1.3.4 酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked immunoadsorbent assay，ELISA） 測(cè)定血漿白介素含量分別按ELISA試劑盒操作說(shuō)明檢測(cè)血清中IL-4、IL-5及IL-10的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。本研究資料為小樣本資料，計(jì)數(shù)資料采用四格表資料的Fisher確切概率法分析，數(shù)據(jù)以n（%）表示；計(jì)量資料經(jīng)檢驗(yàn)呈非正態(tài)分布且方差不齊，運(yùn)用Mann-Whitney U分析，數(shù)據(jù)以M（QR）表示；雙變量相關(guān)性利用Spearman秩相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 隨訪情況及臨床療效

50例患者治療期間無(wú)脫落、退出和中止者。在治療過程中依從性較好，無(wú)因癥狀或體征加重而導(dǎo)致不能堅(jiān)持治療，未發(fā)現(xiàn)不能耐受的副反應(yīng)或嚴(yán)重不良反應(yīng)。根據(jù)治療前后癥狀記分與體征記分之和計(jì)算SRI，評(píng)價(jià)治療效果。孟魯司特鈉組84.0%的患者對(duì)治療有效，而安慰劑組僅24%的患者對(duì)治療有效，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

2.2 孟魯司特鈉對(duì)NF-κB和AP-1轉(zhuǎn)錄活性的影響

兩組患者分別口服孟魯司特鈉片或ATP片治療21 d，抽取外周靜脈血，經(jīng)EMSA法檢測(cè)AP-1和NF-κB的DNA結(jié)合活性。通過經(jīng)Mann-Whitney U檢驗(yàn)表明，與安慰劑組比較，孟魯司特鈉組AP-1和NF-κB的DNA結(jié)合活性明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

2.3 癥狀與體征總積分下降指數(shù)（SRI）與轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性相關(guān)性

通過Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，孟魯司特鈉組SRI與轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB的DNA結(jié)合活性呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），而安慰劑組SRI與AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性間無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。

2.4 孟魯司特鈉對(duì)血清IL-4、IL-5及IL-10含量的影響

兩組患者分別口服孟魯司特鈉片或ATP片治療21 d，兩組患者血清IL-4、IL-5含量均下降，IL-10含量顯著升高，與安慰劑組比較，孟魯司特鈉組患者血清IL-4、IL-5及IL-10含量變化更加明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。

3 討論

類固醇激素是目前最有效的抗炎藥物，廣泛用于氣道慢性炎癥疾病，包括變應(yīng)性鼻炎、哮喘和慢性阻塞性肺疾病的治療。類固醇激素效應(yīng)產(chǎn)生的分子機(jī)制主要包括兩方面：①與轉(zhuǎn)位入核的糖皮質(zhì)激素受體結(jié)合形成二聚體，與靶基因5′端啟動(dòng)子區(qū)的糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件連接，調(diào)控靶基因的轉(zhuǎn)錄；②類固醇激素受體與AP-l和NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子相互作用，干擾作為炎癥增強(qiáng)因子的AP-l和NF-κB誘導(dǎo)炎癥基因轉(zhuǎn)錄的能力，下調(diào)細(xì)胞因子和炎癥遞質(zhì)的表達(dá)，達(dá)到抗炎的功效[8]。隨著其臨床應(yīng)用的日益廣泛，部分患者對(duì)類固醇激素的治療無(wú)反應(yīng)，表現(xiàn)為類固醇激素抵抗。事實(shí)上，許多疾病都存在類固醇抵抗現(xiàn)象，如哮喘、淋巴細(xì)胞性白血病、慢性鼻竇炎、潰瘍性結(jié)腸炎等[9]。

引起類固醇激素抵抗的機(jī)制異常復(fù)雜，目前尚不完全明確，多種機(jī)制可能參與激素抵抗，不同患者激素抵抗的機(jī)制也不盡相同。如上述，激素的抗炎作用主要是通過抑制轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB來(lái)實(shí)現(xiàn)，然而，過度表達(dá)的AP-1和NF-κB也可干擾糖皮質(zhì)激素受體的功能，抑制糖皮質(zhì)激素抗炎效應(yīng)的產(chǎn)生。激素抵抗患者外周血細(xì)胞AP-1增加，過多的AP-1改變了GR與DNA結(jié)合的能力，使核內(nèi)能夠和GRE結(jié)合的有活性的GR數(shù)量減少，導(dǎo)致激素治療效果降低[10]。另有研究發(fā)現(xiàn)GC抵抗性哮喘患者T細(xì)胞和單核細(xì)胞中有c-fos轉(zhuǎn)錄增加c-fos合成增加可能是AP-1表達(dá)增多和糖皮質(zhì)激素受體DNA結(jié)合能力降低的機(jī)制[11]。激素與受體結(jié)合后，通過招募HDAC2，能逆轉(zhuǎn)組蛋白的乙?；瑥亩P(guān)閉激活的炎癥基因。COPD患者吸煙等產(chǎn)生的氧化應(yīng)激損傷了HDAC2的活性，使組蛋白乙?；黾樱琋F-κB激活的炎癥反應(yīng)放大，從而導(dǎo)致激素抵抗[12]。已有體外實(shí)驗(yàn)研究表明，白三烯受體拮抗劑孟魯司特能有效降低激素抵抗型及激素敏感型哮喘患者PMMCs中AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性，從而為激素抵抗型患者的聯(lián)合治療帶來(lái)希望[5]。endprint

類固醇激素對(duì)白三烯的代謝無(wú)抑制作用，類固醇聯(lián)合白三烯拮抗劑治療有相加或協(xié)同作用[13]，口服孟魯司特鈉治療對(duì)AR及類固醇激素抵抗型AR轉(zhuǎn)歸、癥狀改善均有顯著療效，表明白三烯受體拮抗劑治療AR是安全有效的，對(duì)類固醇抵抗型和難治型AR均可能有益[3，4，13]。本研究也表明，與安慰劑相比較，經(jīng)孟魯司特鈉治療后，其癥狀記分及體征記分明顯下降，表明孟魯司特鈉能有效改善類固醇激素抵抗型AR患者的病情。

本研究進(jìn)一步采用EMSA法檢測(cè)了兩組患者轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB的DNA結(jié)合活性，通過比較發(fā)現(xiàn)，孟魯司特鈉組AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性較安慰劑組明顯降低，這與于欽鳳等[5]的研究一致。武玉清等[14]研究也發(fā)現(xiàn)，孟魯司特能夠抑制哮喘豚鼠氣道淋巴細(xì)胞NF-κB的激活，促進(jìn)其凋亡，從而減少氣道淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，緩解哮喘氣道炎癥。孟魯司特通過對(duì)NF-κB及MMP-9活性的抑制，從而抑制哮喘的氣道重塑[15]。我們的研究進(jìn)一步分析經(jīng)藥物治療后，SRI與轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合活性之間的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)孟魯司特鈉組SRI與AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性呈負(fù)相關(guān)，表明經(jīng)孟魯司特鈉治療后，其核因子AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性越低，癥狀與體征緩解越明顯，而安慰劑組SRI與AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性間無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系。

已有研究表明，AR患者外周血IL-4及IL-5的表達(dá)明顯高于健康人群[16]，而IL-10的水平明顯低于健康人群[17]。IL-5、IL-4、IL-10和腫瘤壞死因子-α等炎性細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)需要AP-1、NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子的參與[2]?；罨腁P-l作為一種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到反應(yīng)元件TRE，激活I(lǐng)L-4、IL-5和GM-CSF等在炎癥反應(yīng)中具有重要作用的多種因子的基因轉(zhuǎn)錄。活化的NF-κB參與細(xì)胞因子（如IL-2、IL-8、IL-l0、GM-CSF等）、黏附分子等免疫和炎癥反應(yīng)因子的表達(dá)，促進(jìn)炎癥、腫癌、凋亡等相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。為明確AP-1、NF-κB是否通過影響炎癥因子的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用，我們采用了ELISA法分析了兩種研究對(duì)象血清IL-4、IL-5及IL-10水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與安慰劑組比較，孟魯司特鈉組血清IL-4、IL-5明顯降低，而IL-10的水平明顯升高，與于欽鳳等[5]的研究一致。

綜上所述，孟魯司特鈉可能通過對(duì)AP-1及NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性的抑制，下調(diào)IL-4、IL-5的表達(dá)，上調(diào)IL-10的表達(dá)，改善類固醇激素抵抗型AR患者的病情，達(dá)到治療作用，是類固醇激素抵抗型AR聯(lián)合治療有效合理的途徑。

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（收稿日期：2013-12-03）endprint

類固醇激素對(duì)白三烯的代謝無(wú)抑制作用，類固醇聯(lián)合白三烯拮抗劑治療有相加或協(xié)同作用[13]，口服孟魯司特鈉治療對(duì)AR及類固醇激素抵抗型AR轉(zhuǎn)歸、癥狀改善均有顯著療效，表明白三烯受體拮抗劑治療AR是安全有效的，對(duì)類固醇抵抗型和難治型AR均可能有益[3，4，13]。本研究也表明，與安慰劑相比較，經(jīng)孟魯司特鈉治療后，其癥狀記分及體征記分明顯下降，表明孟魯司特鈉能有效改善類固醇激素抵抗型AR患者的病情。

本研究進(jìn)一步采用EMSA法檢測(cè)了兩組患者轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB的DNA結(jié)合活性，通過比較發(fā)現(xiàn)，孟魯司特鈉組AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性較安慰劑組明顯降低，這與于欽鳳等[5]的研究一致。武玉清等[14]研究也發(fā)現(xiàn)，孟魯司特能夠抑制哮喘豚鼠氣道淋巴細(xì)胞NF-κB的激活，促進(jìn)其凋亡，從而減少氣道淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，緩解哮喘氣道炎癥。孟魯司特通過對(duì)NF-κB及MMP-9活性的抑制，從而抑制哮喘的氣道重塑[15]。我們的研究進(jìn)一步分析經(jīng)藥物治療后，SRI與轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合活性之間的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)孟魯司特鈉組SRI與AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性呈負(fù)相關(guān)，表明經(jīng)孟魯司特鈉治療后，其核因子AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性越低，癥狀與體征緩解越明顯，而安慰劑組SRI與AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性間無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系。

已有研究表明，AR患者外周血IL-4及IL-5的表達(dá)明顯高于健康人群[16]，而IL-10的水平明顯低于健康人群[17]。IL-5、IL-4、IL-10和腫瘤壞死因子-α等炎性細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)需要AP-1、NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子的參與[2]?；罨腁P-l作為一種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到反應(yīng)元件TRE，激活I(lǐng)L-4、IL-5和GM-CSF等在炎癥反應(yīng)中具有重要作用的多種因子的基因轉(zhuǎn)錄?；罨腘F-κB參與細(xì)胞因子（如IL-2、IL-8、IL-l0、GM-CSF等）、黏附分子等免疫和炎癥反應(yīng)因子的表達(dá)，促進(jìn)炎癥、腫癌、凋亡等相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。為明確AP-1、NF-κB是否通過影響炎癥因子的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用，我們采用了ELISA法分析了兩種研究對(duì)象血清IL-4、IL-5及IL-10水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與安慰劑組比較，孟魯司特鈉組血清IL-4、IL-5明顯降低，而IL-10的水平明顯升高，與于欽鳳等[5]的研究一致。

綜上所述，孟魯司特鈉可能通過對(duì)AP-1及NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性的抑制，下調(diào)IL-4、IL-5的表達(dá)，上調(diào)IL-10的表達(dá)，改善類固醇激素抵抗型AR患者的病情，達(dá)到治療作用，是類固醇激素抵抗型AR聯(lián)合治療有效合理的途徑。

[參考文獻(xiàn)]

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類固醇激素對(duì)白三烯的代謝無(wú)抑制作用，類固醇聯(lián)合白三烯拮抗劑治療有相加或協(xié)同作用[13]，口服孟魯司特鈉治療對(duì)AR及類固醇激素抵抗型AR轉(zhuǎn)歸、癥狀改善均有顯著療效，表明白三烯受體拮抗劑治療AR是安全有效的，對(duì)類固醇抵抗型和難治型AR均可能有益[3，4，13]。本研究也表明，與安慰劑相比較，經(jīng)孟魯司特鈉治療后，其癥狀記分及體征記分明顯下降，表明孟魯司特鈉能有效改善類固醇激素抵抗型AR患者的病情。

本研究進(jìn)一步采用EMSA法檢測(cè)了兩組患者轉(zhuǎn)錄因子AP-1和NF-κB的DNA結(jié)合活性，通過比較發(fā)現(xiàn)，孟魯司特鈉組AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性較安慰劑組明顯降低，這與于欽鳳等[5]的研究一致。武玉清等[14]研究也發(fā)現(xiàn)，孟魯司特能夠抑制哮喘豚鼠氣道淋巴細(xì)胞NF-κB的激活，促進(jìn)其凋亡，從而減少氣道淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，緩解哮喘氣道炎癥。孟魯司特通過對(duì)NF-κB及MMP-9活性的抑制，從而抑制哮喘的氣道重塑[15]。我們的研究進(jìn)一步分析經(jīng)藥物治療后，SRI與轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合活性之間的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)孟魯司特鈉組SRI與AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性呈負(fù)相關(guān)，表明經(jīng)孟魯司特鈉治療后，其核因子AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性越低，癥狀與體征緩解越明顯，而安慰劑組SRI與AP-1及NF-κB的DNA結(jié)合活性間無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系。

已有研究表明，AR患者外周血IL-4及IL-5的表達(dá)明顯高于健康人群[16]，而IL-10的水平明顯低于健康人群[17]。IL-5、IL-4、IL-10和腫瘤壞死因子-α等炎性細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)需要AP-1、NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子的參與[2]?；罨腁P-l作為一種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到反應(yīng)元件TRE，激活I(lǐng)L-4、IL-5和GM-CSF等在炎癥反應(yīng)中具有重要作用的多種因子的基因轉(zhuǎn)錄。活化的NF-κB參與細(xì)胞因子（如IL-2、IL-8、IL-l0、GM-CSF等）、黏附分子等免疫和炎癥反應(yīng)因子的表達(dá)，促進(jìn)炎癥、腫癌、凋亡等相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。為明確AP-1、NF-κB是否通過影響炎癥因子的表達(dá)發(fā)揮抗炎作用，我們采用了ELISA法分析了兩種研究對(duì)象血清IL-4、IL-5及IL-10水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與安慰劑組比較，孟魯司特鈉組血清IL-4、IL-5明顯降低，而IL-10的水平明顯升高，與于欽鳳等[5]的研究一致。

綜上所述，孟魯司特鈉可能通過對(duì)AP-1及NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性的抑制，下調(diào)IL-4、IL-5的表達(dá)，上調(diào)IL-10的表達(dá)，改善類固醇激素抵抗型AR患者的病情，達(dá)到治療作用，是類固醇激素抵抗型AR聯(lián)合治療有效合理的途徑。

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[13] 申紅，李添應(yīng)，陳彥球，等. 白三烯受體拮抗劑和吸入性皮質(zhì)激素在變應(yīng)性鼻炎中的應(yīng)用[J]. 臨床耳鼻咽喉科雜志，2005，19（12）：557-559.

[14] 武玉清，周成華，張洪泉，等. 孟魯司特對(duì)哮喘豚鼠氣道淋巴細(xì)胞凋亡及核因子NF-κB活化的影響[J]. 中國(guó)新藥雜志，2005，14（1）：41-44.

[15] 崔佳麗，武紅旗，劉秀珍，等. 白三烯受體拮抗劑抑制哮喘大鼠氣道重塑的研究[J]. 臨床薈萃，2012，27（13）：1133-1136.

[16] 劉穎慧，成煒，蔣捍東. 變應(yīng)性鼻炎和哮喘患者血清IL-9、IL-4、IL-5變化及臨床意義[J]. 山東醫(yī)藥，2009， 49（5）：10-12.

[17] 王鑫，張燕，李淼，等. TNF-α、IL-10在變應(yīng)性鼻炎中的作用研究[J]. 國(guó)際免疫學(xué)雜志，2012，35（4）：317-319.

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