不同提取方法對三種茶中黃酮含量測定的比較

張浩+婁向弟+周坤+葉嘉

摘要：采用超聲波提取法和常壓提取法分別對綠茶（江西婺源）、紅茶（河南信陽）、絞股藍茶（神農(nóng)架）中黃酮在不同條件梯度下進行提取。結(jié)果表明，3種茶葉黃酮提取的最佳條件為綠茶，常壓下70%乙醇、60 ℃、40 min；紅茶為常壓下40%乙醇、80 ℃、40 min；絞股藍茶為超聲波70%乙醇、60 ℃、60 min。3種茶葉在最佳提取條件下進行黃酮含量的比較，絞股藍茶中黃酮含量>紅茶中黃酮含量>綠茶中黃酮含量。

關鍵詞：超聲波提??；常壓提?。唤g股藍茶；綠茶；紅茶

中圖分類號：S571.1；Q819 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）17-4151-03

Effects of Different Extraction Methods on the Flavonoids Content

in Three Kinds of Tea

ZHANG Hao，LOU Xiang-di，ZHOU Kun，YE Jia

（ Department of Biology Science， Handan College， Handan 056005， Hebei， China ）

Abstract：The flavonoids of green tea（Wuyuan， Jiangxi）， black tea （Xinyang， Henan）， gynostemma tea（Shennongjia） were extracted by ultrasonic extraction and atmospheric extraction under different gradient conditions. The results showed that the optimal method of extraction of three kinds of tea were ordinary pressure 70% alcohol， 60 ℃， 40 min for the green tea； ordinary pressure 40% alcohol， 80 ℃，40 min for the black tea and ultrasonic extraction 70% alcohol， 60 ℃， 60 min for the gynostemma tea. Under these condition， the flavonoids in the three kinds of tea were in order of gynostemma tea> black tea> green tea.

Key words：ultrasonic extraction；atmospheric extraction；gynostemma tea；green tea；black tea

黃酮類化合物泛指以C6-C3-C6為基本碳架的一系列化合物[1]，在植物中分布廣泛，其在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷類，小部分以游離態(tài)（苷元）的形式存在[2]。黃酮類化合物是一種重要的生理活性物質(zhì)，具有較強的生物活性和藥理活性[3]，在各種中草藥中含量比較豐富，因此備受關注。

我國茶區(qū)遼闊，茶產(chǎn)量逐年增加且品種繁多[4]。茶葉中含有大量的生物活性物質(zhì)，黃酮醇及一些苷類物質(zhì)是茶葉中重要的活性成分，具有提神醒腦、清熱解暑、消食化痰、生津止渴、降火明目、止痢除濕等功效[5]，此外長期喝茶對抗輻射、抗心腦血管疾病和抗癌等具有一定的作用。目前，對于茶葉中黃酮類化合物的研究比較多，但大多集中在單一茶葉中黃酮類物質(zhì)的提取方法的工藝研究上，對于其含量的測定及不同品種黃酮類化合物含量的比較鮮有報道。本研究采用超聲波提取法和常壓提取法分別對綠茶（江西婺源）、紅茶（河南信陽）、絞股藍茶（神農(nóng)架）在不同條件下進行黃酮提取，研究這3種茶葉中黃酮最佳提取方式并對其黃酮含量進行比較，以期為茶葉研究提取黃酮類化合物及購買茶葉提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2010年收集江西婺源產(chǎn)綠茶（N 25°15′，E 117°50′）、河南信陽產(chǎn)紅茶（N 31°46′，E 114°01′）和神農(nóng)架產(chǎn)絞股藍茶（N 31°46′，E 110°39′）進行試驗。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線的繪制 稱取2.8 mg蘆丁標準品（購于中國藥品生物制品檢定所）定容至25 mL容量瓶中，配制成濃度為0.102 7 mg/mL蘆丁標準溶液，分別量取蘆丁標準溶液 0、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0 mL于 10 mL容量瓶中，用0.05 mol/L三氯化鋁-乙醇溶液（1.33 g三氯化鋁溶于無水乙醇中，定容至1.00 mL）定容至10 mL，混勻，靜置10 min。以三氯化鋁-乙醇溶液為空白于400 nm波長處測定吸光度值。以蘆丁濃度為橫坐標，OD400 nm值為縱坐標，繪制標準曲線。

1.2.2 總黃酮提取方法 采用超聲波提取法和常壓提取法提取總黃酮。稱取0.5 g不同品種茶葉于50 mL錐形瓶中，加入10 mL不同濃度乙醇，封口，分別置于恒溫水浴鍋和超聲波清洗儀一定時間后取出，離心后過濾，濾液用蒸餾水定容至25 mL，取1 mL提取液，加AlCl3顯色劑定容至10 mL，搖勻，靜置10 min后，于400 nm波長處測定吸光度值，根據(jù)標準曲線換算出各茶葉中黃酮的含量。以上試驗均重復2次。

提取過程中采用不同體積分數(shù)乙醇、提取溫度、提取時間進行組合（表1），以茶葉中黃酮含量為考察指標，分析最適宜的提取方法。

1.3 數(shù)據(jù)分析

采用DPS分析軟件進行最小差異法分析。endprint

2 結(jié)果與分析

2.1 超聲波不同提取條件下茶葉中黃酮含量的比較

由表1可以看出，在超聲波方法下提取綠茶中黃酮的較適宜條件為70%乙醇、60 ℃、60 min和70%乙醇、60 ℃、80 min，這2種條件下得到的綠茶中黃酮的含量分別為4.133 8、4.152 4 mg/g，二者差異不顯著，因而確定超聲波條件下綠茶中黃酮的最佳提取條件為70%乙醇、60 ℃、60 min。在不添加乙醇、80 ℃、40 min條件下提取的綠茶中黃酮含量最低，為2.573 0 mg/g。且在不添加乙醇的條件下，提取的綠茶中黃酮含量均較低。

由表1可知，在超聲波方法下提取的紅茶中黃酮的最佳條件為40%乙醇、70 ℃、80 min，得到的黃酮含量為5.493 3 mg/g。但此條件下的黃酮含量與40%乙醇、70 ℃、60 min條件下的黃酮含量差異不顯著，因此，選定超聲波提取紅茶中黃酮的最佳條件為40%乙醇、70 ℃、60 min。在不添加乙醇、60 ℃、40 min條件下提取的黃酮含量最低，為2.591 5 mg/g。

由表1可知，絞股藍茶中黃酮在超聲波方法下提取的較適宜條件為70%乙醇、60 ℃、80 min和70%乙醇、70 ℃、80 min，得到的黃酮含量分別為6.349 2、6.403 0 mg/g。但這2個條件下提取的黃酮含量與70%乙醇60 ℃ 60 min、70%乙醇70 ℃ 60 min、70%乙醇80 ℃ 40 min、70%乙醇70 ℃ 40 min、70%乙醇80 ℃ 80 min條件下提取的黃酮含量差異不顯著，與其他條件差異顯著。由此選擇超聲波絞股藍茶中黃酮的最佳提取條件為70%乙醇、60 ℃、60 min。在不添加乙醇、60 ℃條件下，3個時間梯度對黃酮含量的影響差異均不顯著，提取得到的黃酮含量較低，分別為3.137 4、3.163 9、3.328 2 mg/g。

2.2 常壓方法不同提取條件下茶葉中黃酮含量的比較

由表2可以看出，在常壓方法下提取綠茶中黃酮，在70%乙醇，溫度60、70 ℃，時間40、60、80 min條件6個不同組合下提取得到的綠茶中黃酮含量差異不顯著，但與其他條件差異顯著，由此選定常壓下提取綠茶中黃酮的最佳條件為70%乙醇、60 ℃、40 min，此條件下得到的黃酮含量為4.168 3 mg/g。

由表2可知，紅茶在常壓方法下提取黃酮的最佳條件是40%乙醇、80 ℃、40 min，得到的黃酮含量為4.948 5 mg/g，但此條件下的黃酮含量與70%乙醇、70 ℃、60 min條件下的黃酮含量差異不顯著，與其他條件差異顯著，因此選擇常壓下提取紅茶中黃酮的最佳條件為40%乙醇、80 ℃、40 min。

由表2可知，絞股藍茶在常壓方法下提取黃酮的最佳條件是70%乙醇、70 ℃、80 min，得到的黃酮含量為5.705 8 mg/g，但此條件下的黃酮含量與70%乙醇70 ℃ 60 min、70%乙醇70 ℃ 40 min、70%乙醇60 ℃ 40 min、70%乙醇60 ℃ 60 min條件下的黃酮含量差異不顯著，與其他條件差異顯著，由此選擇常壓下提取絞股藍茶黃酮的最佳條件為70%乙醇、60 ℃、40 min。在不添加乙醇、60 ℃、80 min條件下提取的絞股藍茶中黃酮含量最低，為2.303 2 mg/g。

2.3 兩種提取方法的比較

圖1為3種茶葉中黃酮提取的最佳條件下，采用超聲波和常壓兩種方法進行比較的結(jié)果。由圖1可知，對于綠茶和紅茶來說，采用超聲波法提取和常壓法提取的黃酮含量差異不顯著，所以一般采用常壓提取法，得到的黃酮含量分別為綠茶4.168 3 mg/g，紅茶4.948 5 mg/g。對于絞股藍茶，采用兩種方法提取的黃酮含量差異顯著，采用超聲波提取的效果好于采用常壓提取法，因而對于絞股藍茶要達到最佳提取效果，需采用超聲波提取法，得到的黃酮含量為6.275 0 mg/g。

2.4 3種茶葉最佳提取條件下黃酮含量的比較

由以上試驗得到3種茶葉黃酮的最佳提取條件為：綠茶，常壓下70%乙醇、60 ℃、40 min；紅茶，常壓下40%乙醇、80 ℃、40 min；絞股藍茶，超聲波70%乙醇、60 ℃、60 min。圖2為3種茶葉最佳提取條件下黃酮含量的比較。從圖2中可以看出，綠茶、紅茶和絞股藍茶中黃酮含量的差異顯著。絞股藍茶中黃酮的含量顯著高于綠茶和紅茶中的黃酮含量，而紅茶中的黃酮含量也顯著高于綠茶中黃酮含量。

3 小結(jié)

本試驗結(jié)果表明，3種茶葉黃酮提取的最佳條件為：綠茶，常壓下70%乙醇、60 ℃、40 min；紅茶，常壓下40%乙醇、80 ℃、40 min；絞股藍茶，超聲波70%乙醇、60 ℃、60 min。3種茶葉在最佳提取條件下進行黃酮含量的比較，結(jié)果表明，絞股藍茶中黃酮含量>紅茶中黃酮含量>綠茶中黃酮含量，而且二者之間差異顯著。

參考文獻：

[1] 宛曉春，黃繼珍，沈生榮.茶葉生物化學[M].第三版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003.

[2] 王在貴，王 磊，高麗萍，等.茶葉總黃酮的提取工藝研究[J].飼料工業(yè)，2009，30（24）：42-44.

[3] 李 葉，唐浩國，劉建學.黃酮類化合物抑菌作用的研究進展[J]. 農(nóng)場品加工·學刊，2008（12）：53-55.

[4] 何書美，劉敬蘭.茶葉中總黃酮含量測定方法的研究[J].分析化學，2007，35（9）：1365-1368.

[5] 王 慧.黃酮類化合物生物活性的研究進展[J].食品與藥品，2010，12（9）：347-350.endprint

2 結(jié)果與分析

2.1 超聲波不同提取條件下茶葉中黃酮含量的比較

由表1可以看出，在超聲波方法下提取綠茶中黃酮的較適宜條件為70%乙醇、60 ℃、60 min和70%乙醇、60 ℃、80 min，這2種條件下得到的綠茶中黃酮的含量分別為4.133 8、4.152 4 mg/g，二者差異不顯著，因而確定超聲波條件下綠茶中黃酮的最佳提取條件為70%乙醇、60 ℃、60 min。在不添加乙醇、80 ℃、40 min條件下提取的綠茶中黃酮含量最低，為2.573 0 mg/g。且在不添加乙醇的條件下，提取的綠茶中黃酮含量均較低。

由表1可知，在超聲波方法下提取的紅茶中黃酮的最佳條件為40%乙醇、70 ℃、80 min，得到的黃酮含量為5.493 3 mg/g。但此條件下的黃酮含量與40%乙醇、70 ℃、60 min條件下的黃酮含量差異不顯著，因此，選定超聲波提取紅茶中黃酮的最佳條件為40%乙醇、70 ℃、60 min。在不添加乙醇、60 ℃、40 min條件下提取的黃酮含量最低，為2.591 5 mg/g。

由表1可知，絞股藍茶中黃酮在超聲波方法下提取的較適宜條件為70%乙醇、60 ℃、80 min和70%乙醇、70 ℃、80 min，得到的黃酮含量分別為6.349 2、6.403 0 mg/g。但這2個條件下提取的黃酮含量與70%乙醇60 ℃ 60 min、70%乙醇70 ℃ 60 min、70%乙醇80 ℃ 40 min、70%乙醇70 ℃ 40 min、70%乙醇80 ℃ 80 min條件下提取的黃酮含量差異不顯著，與其他條件差異顯著。由此選擇超聲波絞股藍茶中黃酮的最佳提取條件為70%乙醇、60 ℃、60 min。在不添加乙醇、60 ℃條件下，3個時間梯度對黃酮含量的影響差異均不顯著，提取得到的黃酮含量較低，分別為3.137 4、3.163 9、3.328 2 mg/g。

2.2 常壓方法不同提取條件下茶葉中黃酮含量的比較

由表2可以看出，在常壓方法下提取綠茶中黃酮，在70%乙醇，溫度60、70 ℃，時間40、60、80 min條件6個不同組合下提取得到的綠茶中黃酮含量差異不顯著，但與其他條件差異顯著，由此選定常壓下提取綠茶中黃酮的最佳條件為70%乙醇、60 ℃、40 min，此條件下得到的黃酮含量為4.168 3 mg/g。

由表2可知，紅茶在常壓方法下提取黃酮的最佳條件是40%乙醇、80 ℃、40 min，得到的黃酮含量為4.948 5 mg/g，但此條件下的黃酮含量與70%乙醇、70 ℃、60 min條件下的黃酮含量差異不顯著，與其他條件差異顯著，因此選擇常壓下提取紅茶中黃酮的最佳條件為40%乙醇、80 ℃、40 min。

由表2可知，絞股藍茶在常壓方法下提取黃酮的最佳條件是70%乙醇、70 ℃、80 min，得到的黃酮含量為5.705 8 mg/g，但此條件下的黃酮含量與70%乙醇70 ℃ 60 min、70%乙醇70 ℃ 40 min、70%乙醇60 ℃ 40 min、70%乙醇60 ℃ 60 min條件下的黃酮含量差異不顯著，與其他條件差異顯著，由此選擇常壓下提取絞股藍茶黃酮的最佳條件為70%乙醇、60 ℃、40 min。在不添加乙醇、60 ℃、80 min條件下提取的絞股藍茶中黃酮含量最低，為2.303 2 mg/g。

2.3 兩種提取方法的比較

圖1為3種茶葉中黃酮提取的最佳條件下，采用超聲波和常壓兩種方法進行比較的結(jié)果。由圖1可知，對于綠茶和紅茶來說，采用超聲波法提取和常壓法提取的黃酮含量差異不顯著，所以一般采用常壓提取法，得到的黃酮含量分別為綠茶4.168 3 mg/g，紅茶4.948 5 mg/g。對于絞股藍茶，采用兩種方法提取的黃酮含量差異顯著，采用超聲波提取的效果好于采用常壓提取法，因而對于絞股藍茶要達到最佳提取效果，需采用超聲波提取法，得到的黃酮含量為6.275 0 mg/g。

2.4 3種茶葉最佳提取條件下黃酮含量的比較

由以上試驗得到3種茶葉黃酮的最佳提取條件為：綠茶，常壓下70%乙醇、60 ℃、40 min；紅茶，常壓下40%乙醇、80 ℃、40 min；絞股藍茶，超聲波70%乙醇、60 ℃、60 min。圖2為3種茶葉最佳提取條件下黃酮含量的比較。從圖2中可以看出，綠茶、紅茶和絞股藍茶中黃酮含量的差異顯著。絞股藍茶中黃酮的含量顯著高于綠茶和紅茶中的黃酮含量，而紅茶中的黃酮含量也顯著高于綠茶中黃酮含量。

3 小結(jié)

本試驗結(jié)果表明，3種茶葉黃酮提取的最佳條件為：綠茶，常壓下70%乙醇、60 ℃、40 min；紅茶，常壓下40%乙醇、80 ℃、40 min；絞股藍茶，超聲波70%乙醇、60 ℃、60 min。3種茶葉在最佳提取條件下進行黃酮含量的比較，結(jié)果表明，絞股藍茶中黃酮含量>紅茶中黃酮含量>綠茶中黃酮含量，而且二者之間差異顯著。

參考文獻：

[1] 宛曉春，黃繼珍，沈生榮.茶葉生物化學[M].第三版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003.

[2] 王在貴，王 磊，高麗萍，等.茶葉總黃酮的提取工藝研究[J].飼料工業(yè)，2009，30（24）：42-44.

[3] 李 葉，唐浩國，劉建學.黃酮類化合物抑菌作用的研究進展[J]. 農(nóng)場品加工·學刊，2008（12）：53-55.

[4] 何書美，劉敬蘭.茶葉中總黃酮含量測定方法的研究[J].分析化學，2007，35（9）：1365-1368.

[5] 王 慧.黃酮類化合物生物活性的研究進展[J].食品與藥品，2010，12（9）：347-350.endprint

2 結(jié)果與分析

2.1 超聲波不同提取條件下茶葉中黃酮含量的比較

由表1可以看出，在超聲波方法下提取綠茶中黃酮的較適宜條件為70%乙醇、60 ℃、60 min和70%乙醇、60 ℃、80 min，這2種條件下得到的綠茶中黃酮的含量分別為4.133 8、4.152 4 mg/g，二者差異不顯著，因而確定超聲波條件下綠茶中黃酮的最佳提取條件為70%乙醇、60 ℃、60 min。在不添加乙醇、80 ℃、40 min條件下提取的綠茶中黃酮含量最低，為2.573 0 mg/g。且在不添加乙醇的條件下，提取的綠茶中黃酮含量均較低。

由表1可知，在超聲波方法下提取的紅茶中黃酮的最佳條件為40%乙醇、70 ℃、80 min，得到的黃酮含量為5.493 3 mg/g。但此條件下的黃酮含量與40%乙醇、70 ℃、60 min條件下的黃酮含量差異不顯著，因此，選定超聲波提取紅茶中黃酮的最佳條件為40%乙醇、70 ℃、60 min。在不添加乙醇、60 ℃、40 min條件下提取的黃酮含量最低，為2.591 5 mg/g。

由表1可知，絞股藍茶中黃酮在超聲波方法下提取的較適宜條件為70%乙醇、60 ℃、80 min和70%乙醇、70 ℃、80 min，得到的黃酮含量分別為6.349 2、6.403 0 mg/g。但這2個條件下提取的黃酮含量與70%乙醇60 ℃ 60 min、70%乙醇70 ℃ 60 min、70%乙醇80 ℃ 40 min、70%乙醇70 ℃ 40 min、70%乙醇80 ℃ 80 min條件下提取的黃酮含量差異不顯著，與其他條件差異顯著。由此選擇超聲波絞股藍茶中黃酮的最佳提取條件為70%乙醇、60 ℃、60 min。在不添加乙醇、60 ℃條件下，3個時間梯度對黃酮含量的影響差異均不顯著，提取得到的黃酮含量較低，分別為3.137 4、3.163 9、3.328 2 mg/g。

2.2 常壓方法不同提取條件下茶葉中黃酮含量的比較

由表2可以看出，在常壓方法下提取綠茶中黃酮，在70%乙醇，溫度60、70 ℃，時間40、60、80 min條件6個不同組合下提取得到的綠茶中黃酮含量差異不顯著，但與其他條件差異顯著，由此選定常壓下提取綠茶中黃酮的最佳條件為70%乙醇、60 ℃、40 min，此條件下得到的黃酮含量為4.168 3 mg/g。

由表2可知，紅茶在常壓方法下提取黃酮的最佳條件是40%乙醇、80 ℃、40 min，得到的黃酮含量為4.948 5 mg/g，但此條件下的黃酮含量與70%乙醇、70 ℃、60 min條件下的黃酮含量差異不顯著，與其他條件差異顯著，因此選擇常壓下提取紅茶中黃酮的最佳條件為40%乙醇、80 ℃、40 min。

由表2可知，絞股藍茶在常壓方法下提取黃酮的最佳條件是70%乙醇、70 ℃、80 min，得到的黃酮含量為5.705 8 mg/g，但此條件下的黃酮含量與70%乙醇70 ℃ 60 min、70%乙醇70 ℃ 40 min、70%乙醇60 ℃ 40 min、70%乙醇60 ℃ 60 min條件下的黃酮含量差異不顯著，與其他條件差異顯著，由此選擇常壓下提取絞股藍茶黃酮的最佳條件為70%乙醇、60 ℃、40 min。在不添加乙醇、60 ℃、80 min條件下提取的絞股藍茶中黃酮含量最低，為2.303 2 mg/g。

2.3 兩種提取方法的比較

圖1為3種茶葉中黃酮提取的最佳條件下，采用超聲波和常壓兩種方法進行比較的結(jié)果。由圖1可知，對于綠茶和紅茶來說，采用超聲波法提取和常壓法提取的黃酮含量差異不顯著，所以一般采用常壓提取法，得到的黃酮含量分別為綠茶4.168 3 mg/g，紅茶4.948 5 mg/g。對于絞股藍茶，采用兩種方法提取的黃酮含量差異顯著，采用超聲波提取的效果好于采用常壓提取法，因而對于絞股藍茶要達到最佳提取效果，需采用超聲波提取法，得到的黃酮含量為6.275 0 mg/g。

2.4 3種茶葉最佳提取條件下黃酮含量的比較

由以上試驗得到3種茶葉黃酮的最佳提取條件為：綠茶，常壓下70%乙醇、60 ℃、40 min；紅茶，常壓下40%乙醇、80 ℃、40 min；絞股藍茶，超聲波70%乙醇、60 ℃、60 min。圖2為3種茶葉最佳提取條件下黃酮含量的比較。從圖2中可以看出，綠茶、紅茶和絞股藍茶中黃酮含量的差異顯著。絞股藍茶中黃酮的含量顯著高于綠茶和紅茶中的黃酮含量，而紅茶中的黃酮含量也顯著高于綠茶中黃酮含量。

3 小結(jié)

本試驗結(jié)果表明，3種茶葉黃酮提取的最佳條件為：綠茶，常壓下70%乙醇、60 ℃、40 min；紅茶，常壓下40%乙醇、80 ℃、40 min；絞股藍茶，超聲波70%乙醇、60 ℃、60 min。3種茶葉在最佳提取條件下進行黃酮含量的比較，結(jié)果表明，絞股藍茶中黃酮含量>紅茶中黃酮含量>綠茶中黃酮含量，而且二者之間差異顯著。

參考文獻：

[1] 宛曉春，黃繼珍，沈生榮.茶葉生物化學[M].第三版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2003.

[2] 王在貴，王 磊，高麗萍，等.茶葉總黃酮的提取工藝研究[J].飼料工業(yè)，2009，30（24）：42-44.

[3] 李 葉，唐浩國，劉建學.黃酮類化合物抑菌作用的研究進展[J]. 農(nóng)場品加工·學刊，2008（12）：53-55.

[4] 何書美，劉敬蘭.茶葉中總黃酮含量測定方法的研究[J].分析化學，2007，35（9）：1365-1368.

[5] 王 慧.黃酮類化合物生物活性的研究進展[J].食品與藥品，2010，12（9）：347-350.endprint