山苦茶對(duì)運(yùn)動(dòng)小鼠的肝糖原和丙二醛的影響

覃業(yè)亮等

【摘 要】為探討山苦茶提取物對(duì)運(yùn)動(dòng)小鼠肝糖原和醛二酮的影響。方法 小鼠隨機(jī)分為運(yùn)動(dòng)對(duì)照組和組。蟲草組每天蟲草混懸液灌胃， 對(duì)照組給予等量生理鹽水。將30只SD 小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組和服藥組，通過游泳訓(xùn)練6周后，測(cè)定力竭后對(duì)照組和服藥組小鼠的肝糖原（LG）、肌糖原（MG）肝（肌）糖原和丙二醛（MDA）的生化指標(biāo)。 結(jié)果表明：山苦茶組肝糖原（肌）含量顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；而丙二醛比對(duì)照組含量降低明顯（ P<0.05） 。結(jié)論：說明山苦茶具有顯著的抗疲勞效果， 能夠提高小鼠的運(yùn)動(dòng)能力。

【關(guān)鍵詞】山苦茶；丙二醛；肝糖原；肌糖原；小鼠

【中圖分類號(hào)】R587.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）06-3468-01

山苦茶俗稱為鷓鴣茶，系大戟科野生桐屬，其主要分布在中國(guó)的海南島、及雷州半島一帶。有研究報(bào)道，其含有豐富的多種礦物質(zhì)、氨基酸等，具有清熱解毒、利膽消食等功效，人們習(xí)慣把葉子曬干后泡制成茶，具有濃郁的海南地方特色和民族特色[1]。慢性疲勞已成為困擾人們的正常生活、工作，關(guān)于茶葉抗疲勞的已有報(bào)道表明綠茶、和普洱茶和烏龍茶等等，具有較好的抗疲勞作用[2]；本文以山苦茶作為原料，通過對(duì)運(yùn)動(dòng)小鼠的各項(xiàng)生化指標(biāo)檢測(cè)，探討山苦茶對(duì)其作用效果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性昆明種小鼠， 體重25～ 30g， 由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。按實(shí)驗(yàn)組分籠飼養(yǎng)， 同時(shí)購(gòu)買基礎(chǔ)飼料，自由進(jìn)食和飲水，經(jīng)過1周適應(yīng)期后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 材料為海南野生類型山苦茶， 由海南省當(dāng)?shù)剞r(nóng)民提供。山苦茶提取物的制備將天然植物海南野生山苦茶加水浸泡1小時(shí)，煮沸2 次 每次1 h， 過濾，合并濾液，乙醇沉淀，靜置48 h，回收濾液中的乙醇，濃縮濾液，使得每毫升濾液含生藥0.10 g[2]。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 絞股藍(lán)提取物的制備將天然植物海南野生絞股藍(lán)加水浸泡1 h， 煮沸2 次， 每次1 h， 過濾，合并濾液，乙醇沉淀，靜置48 h，回收濾液中的乙醇，濃縮濾液，使得每毫升濾液含生藥0.10 g[3]

1.3.2 動(dòng)物的給藥和分組 將實(shí)驗(yàn)小白鼠隨機(jī)分成2組：運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)照組、運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練山苦茶預(yù)處理組， 并按每籠15只分籠飼養(yǎng)。給藥組采用灌胃法給藥， 按生藥1.5 g/kg.d 的劑量進(jìn)行灌胃（根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)和中藥藥理學(xué)， 按照60kg 成人用量9.3 倍進(jìn)行計(jì)算）， 對(duì)照組灌胃相應(yīng)劑量的生理鹽水作為安慰劑。每天1次，連續(xù)6周。

1.3.3 訓(xùn)練方案訓(xùn)練組采用遞增負(fù)荷式進(jìn)行4周的游泳訓(xùn)練，每周游6 d，水溫（31±1）℃，水深35cm。第1周每天游泳30 min，以后每周遞加10min，至第6周游泳每天80min，第6周訓(xùn)練結(jié)束后處死，在處死前稱重， 稱重后進(jìn)行最后1 次力竭性游泳， 記錄游泳時(shí)間。力竭判斷的標(biāo)準(zhǔn)為：當(dāng)小鼠游至連續(xù)3 次沒入水底，每次超過10 s，且放在平面上無法完成翻正反射視為力竭疲勞[4]。力竭運(yùn)動(dòng)后即刻處死。采用斷頭法采取血樣后，用離心機(jī)以3 000 r/min 速度離心10 min，分離血清，檢測(cè) MDA. 然后立即取出肝臟和骨骼肌組織，置于冰生理鹽水中洗凈血液，檢測(cè)LG和MG。

1.3 測(cè)試指標(biāo)

根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究的需要， 選擇肝糖原（LG）、肌糖原（MG）肝（?。┨窃捅∕DA）的生化指標(biāo)等作為測(cè)試指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行對(duì)比測(cè)試.。

1.3.1 ?。?肝） 糖原的測(cè)定 蒽酮比色法： 取出肝臟和骨骼肌組織， 用0.9%NaCl 溶液沖洗后， 再用濾紙吸干， 準(zhǔn)確稱取100g ， 放入盛有3mL30% KOH 的試管中， 置沸水浴30min， 取出冷卻后， 將其轉(zhuǎn)移至50mL 容量瓶中， 用水多次洗滌試管， 一并收入容量瓶， 加水至刻度， 搖勻待用。向樣品管中加入1.0mL 去離子水， 空白管中加入2.0mL 去離子水， 標(biāo)準(zhǔn)管中加入2.0mL 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液， 再向各試管中加入4.0mL 蒽酮比色液（ 當(dāng)日配制） ， 搖勻， 置沸水浴10min， 冷卻后在620nm 波長(zhǎng)處測(cè)吸光值（ A） ， 空白管調(diào)零。

肌糖原含量（ g/100g 肌肉） = （ A 樣品管/A 標(biāo)準(zhǔn)管ⅹ標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量（mg）/1000ⅹ稀釋倍數(shù)ⅹ100ⅹ0.9

上式中， 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖含量為0.10mg ； 稀釋倍數(shù)為100； 0.9 為此法測(cè)得的葡萄糖含量換算成糖原含量的系數(shù)。

1.3.2 血丙二醛含量的測(cè)定： 采用硫代巴比妥酸法。分離血清， 按照試劑盒說明操作， 測(cè)定血丙二醛含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

用SPSS12.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理， 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，均數(shù)間比較采用析因方差分析，P<0.05 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

表2 絞股藍(lán)對(duì)小鼠肝糖原和肌糖原的影響

組別 組數(shù) 肝糖原/（mgg-1） 肌糖原/（mg·g-1） 丙二醛nmol#ml-1）

對(duì)照組 15 3.05±4.16 1.06±1.02 4.93±0.73

山苦茶組 15 4.97±3.56* 2.32±0.94* 3.28±0.84*

* 與對(duì)照組比較P<0.05

3 討論

目前尋找一種既能增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)員的體能、延緩運(yùn)動(dòng)疲勞， 又能含有違禁成份以及毒副作用的藥物或是食物，是現(xiàn)代運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)界非常關(guān)注且熱門的研究課題。運(yùn)動(dòng)性疲勞主要是指由運(yùn)動(dòng)引起身體能力下降的現(xiàn)象， 其產(chǎn)生的機(jī)制非常復(fù)雜， 有代謝產(chǎn)物堆積、能量耗竭、離子代謝紊亂、氧自由基損傷、保護(hù)性抑制等等多種學(xué)說。本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，山苦茶能夠使運(yùn)動(dòng)小鼠無氧糖酵解增強(qiáng)，當(dāng)機(jī)體缺氧或劇烈運(yùn)動(dòng)使肌肉局部血流相對(duì)不足時(shí)， 能量主要通過糖酵解獲得。

運(yùn)動(dòng)能量重要的來源之一是糖原，糖原的儲(chǔ)備量的提高則有助于提高運(yùn)動(dòng)耐力和延緩疲勞的產(chǎn)生，而肌糖原則是大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)的主要能量來源，在長(zhǎng)時(shí)間大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)中， 運(yùn)動(dòng)前肌糖原的儲(chǔ)量可以決定達(dá)到力竭的時(shí)間，并直接影響耐力訓(xùn)練和比賽的運(yùn)動(dòng)能力，因而，大多數(shù)專業(yè)人士認(rèn)為 對(duì)一些以糖醇解供能為主的運(yùn)動(dòng)項(xiàng)目，賽前足夠的肌糖原儲(chǔ)備也是非常必要的，因?yàn)槿艏√窃瓋?chǔ)量過低就會(huì)抑制乳酸生成和降低無氧代謝能力；肝糖原對(duì)運(yùn)動(dòng)能力的重要性反映則表現(xiàn)在耐力運(yùn)動(dòng)中， 在長(zhǎng)時(shí)間亞極量的運(yùn)動(dòng)過程中，肌糖原首先被動(dòng)員消耗，隨著肌糖原的消耗的不斷增加，為維持血糖水平，肝糖原分解加快，肝臟釋放葡萄糖入血，導(dǎo)致肝糖原儲(chǔ)備減少[5]. 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，山苦茶組小鼠肝糖原和肌糖原的含量明顯高于各自的對(duì)照組，提示給小鼠服用山苦茶，對(duì)小鼠骨骼肌、肝細(xì)胞膜的正常結(jié)構(gòu)和機(jī)能可能具有保護(hù)作用，可明顯增加肝糖原及肌糖原的含量，增加其體內(nèi)糖的儲(chǔ)備量，以保證中樞神經(jīng)系統(tǒng)、運(yùn)動(dòng)肌及紅細(xì)胞等組織能量的充足供給，從而提高運(yùn)動(dòng)能力以及延緩運(yùn)動(dòng)性疲勞的發(fā)生。

近年研究表明， 運(yùn)動(dòng)造成骨骼肌脂質(zhì)過氧化可導(dǎo)致肌纖維膜及線粒體膜等生物膜損傷， 從而引發(fā)細(xì)胞代謝和功能紊亂， 使肌肉工作能力下降進(jìn)而產(chǎn)生疲勞[6]。本實(shí)驗(yàn)表明， 游泳運(yùn)動(dòng)可使機(jī)體血丙二醛含量有所增高， 提示機(jī)體脂質(zhì)過氧化增強(qiáng)。脂質(zhì)過氧化多為自由基（ free radical） 攻擊生物膜造成的后果。山苦茶能顯著降低血丙二醛含量， 說明其有抗氧化作用。

參考文獻(xiàn)

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[4] 龍碧波.海南野生絞股藍(lán)抗運(yùn)動(dòng)性疲勞的實(shí)驗(yàn)研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué).2009 ，36 卷第4 期712-716.

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