非小細(xì)胞肺癌患者血清雌激素水平與肺癌組織中雌激素受體表達(dá)及其臨床病理意義

劉政宏??晏淼??張蕾??楊成喜

[摘要] 目的 探討非小細(xì)胞肺癌患者血清雌激素水平與肺癌組織中雌激素受體表達(dá)及其臨床病理意義，為非小細(xì)胞肺癌的防治提供一些參考。 方法 選擇2010年1月～2012年12月本院收治的經(jīng)病理證實(shí)的肺腺癌患者36例作為觀察組，同時(shí)選擇同期在我院治療的經(jīng)病理學(xué)證實(shí)的肺鱗癌患者32例作為對(duì)照一組和來我院體檢肺部健康的志愿者30例作為對(duì)照二組，然后利用免疫組織染色化學(xué)技術(shù)對(duì)所有參與實(shí)驗(yàn)的人員肺部組織進(jìn)行瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）的檢測(cè)，分別對(duì)觀察組、對(duì)照一組、對(duì)照二組患者的瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）進(jìn)行比較，然后對(duì)觀察組男性肺腺癌患者和女性肺腺癌患者的瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）進(jìn)行比較。 結(jié)果 觀察組與對(duì)照一組、對(duì)照二組相比，瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）陽性表達(dá)明顯高于其他兩組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與男性相比較，觀察組女性患者體內(nèi)的瘦素、血清雌激素（E）陽性表達(dá)變化不顯著（P>0.05），但是女性患者中ER陽性表達(dá)顯著高于男性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 非小細(xì)胞肺癌患者的瘦素、血清雌激素（E）、雌激素受體（ER）的陽性表達(dá)高于正常人的，說明這三種因素可能參加著非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生，可作為診斷非小細(xì)胞肺癌的重要依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 非小細(xì)胞肺癌；肺腺癌；肺鱗癌；血清雌激素；雌激素受體

[中圖分類號(hào)] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）18-181-04

肺癌是一種呼吸系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率的增長(zhǎng)在所有惡性腫瘤里最快，已嚴(yán)重威脅著人類的身體健康和生命安全。近50年來，在許多國(guó)家，肺癌的發(fā)病率和死亡率都明顯增高，在中國(guó)亦如此，肺癌已成為全球癌癥的首要死因。在組織學(xué)上，肺癌主要分為小細(xì)胞癌和非小細(xì)胞癌，而非小細(xì)胞肺癌患者占所有肺癌患者總數(shù)的約80%～85%，是肺癌的主要類型。肺腺癌和肺鱗癌成為非小細(xì)胞肺癌的主要代表，因此這兩種癌癥種類又成為有關(guān)醫(yī)學(xué)專家的主要研究類型[1-3]。當(dāng)前雖然對(duì)非小細(xì)胞肺癌的有關(guān)研究在不斷深入，但其病理病因機(jī)制尚不清楚，因此目前對(duì)該病的治療雖然取得一定的進(jìn)展，但是治療效果和預(yù)后仍然很差，防治仍然缺乏根本有效措施，在治療方面急需尋找新的治療方法進(jìn)行突破，積極探索該病的病因病理和高危因素成為突破的關(guān)鍵。近年來，有關(guān)研究者們發(fā)現(xiàn)雌激素（E）與肺癌尤其是非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展存在著一定的密切關(guān)系。本研究通過對(duì)2010年1月～2012年12月我院收治的非小細(xì)胞肺癌患者并對(duì)其進(jìn)行瘦素、血清雌激素（E）、雌激素受體（ER）的相關(guān)分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010年1月～2012年12月我院收治的肺腺癌患者36例作為觀察組，其中男11例，女25例，年齡42～73歲，平均61.6歲，均為初次治療。其中ⅢA期17例、ⅢB期14例、Ⅳ期5例。選擇同期在我院治療的肺鱗癌患者32例作為對(duì)照一組，其中，男27例，女5例，年齡45～72歲，平均59.2歲，均為初次治，其中ⅢA期12例、ⅢB期15例、Ⅳ期5例。選擇同期在我院進(jìn)行健康檢測(cè)的肺部健康志愿者30例，其中男25例，女5例，年齡45～72歲，平均60.5歲。該研究得到所有志愿者同意并簽訂同意協(xié)議書。

1.2 方法

首先對(duì)所有參與研究人員進(jìn)行血清雌激素（E）水平的檢測(cè)。所有參與研究人員均于檢測(cè)當(dāng)天早晨空腹抽取肘靜脈血1mL，并進(jìn)行2000r/min離心5min，然后吸取上層血清，采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行血清雌激素水平檢測(cè)，具體操作流程按照試劑盒操作說明書進(jìn)行，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果詳細(xì)記錄。

其次對(duì)所有組織樣本進(jìn)行瘦素和血清雌激素受體檢測(cè)。采集到的全部組織均采用10%甲醛溶液進(jìn)行固定，然后采用石蠟進(jìn)行包埋處理，再將各個(gè)標(biāo)本制成厚度為4μm的組織切片（共9張），電熱恒溫箱內(nèi)60℃烤片4h，石蠟切片常規(guī)脫蠟和水化后，自來水沖洗。取其中一張行HE染色進(jìn)行病理診斷。其余8張分兩組行免疫組織化學(xué)染色。將切片浸入0.01mmol/L、pH6.0的檸檬酸鈉鉀中高溫加熱30min進(jìn)行抗原修復(fù)，緊接著用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗3次，2min/次，然后除去PBS液，每張切片加入PicTure-Plus液，室溫孵育15～30min，然后PBS液沖洗3次，2min/次，每張切片加100μL新鮮配置的二氨基聯(lián)苯胺（DAB），光鏡下控制5min，接著進(jìn)行蒸餾水沖洗，蘇木素復(fù)染，PBS或者自來水沖洗返藍(lán)，最后進(jìn)行封片。鼠抗人雌激素受體按照1：40的比例進(jìn)行稀釋，采用PBS緩沖液作為陰性對(duì)照，陽性對(duì)照采用的是已發(fā)現(xiàn)典型癥狀的陽性組織切片。瘦素兔抗人抗體采用1：100的比例進(jìn)行稀釋，陰性對(duì)照同上，陽性對(duì)照采用的是脂肪組織切片的染色結(jié)果。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

標(biāo)本中瘦素以細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色或棕褐色為陽性細(xì)胞，試劑由博士德生物有限公司提供。計(jì)算出陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（即陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)=陽性表達(dá)的細(xì)胞/全部細(xì)胞總數(shù)），并取其均值設(shè)為陽性表達(dá)率。按染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)進(jìn)行判定，細(xì)胞呈棕黃色或>50%細(xì)胞呈黃色判定為陽性結(jié)果；細(xì)胞不著色或<50%判定為陰性結(jié)果，細(xì)胞呈棕黃色、淡黃色。雌激素受體（ER）以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，雌激素受體（ER）的試劑由長(zhǎng)海長(zhǎng)嘉生物有限公司提供。計(jì)算出陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，并取其均值設(shè)為陽性表達(dá)率。按染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)進(jìn)行判定，細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒>25%判定為陽性結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)原理

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，具體采用x2檢驗(yàn)和Fisher's確切概率法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，其中采用的檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05， P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 所有研究對(duì)象瘦素、血清雌激素（E）及血清雌激素受體（ER）的表達(dá)情況

觀察組與對(duì)照一組、對(duì)照二組相比，瘦素、血清雌激素（E）及雌激素受體（ER）陽性表達(dá)明顯高于其他兩組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 性別對(duì)肺腺癌患者瘦素、血清雌激素（E）及血清雌激素受體（ER）的表達(dá)影響

女性肺腺癌中的瘦素、血清雌激素（E）陽性表達(dá)與男性的相比差異均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

而女性肺腺癌中的雌激素受體（ER）陽性表達(dá)高于男性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。具體情況見表2。

3 討論

近10年來，肺癌成為世界各國(guó)最常見的惡性腫瘤之一，其總死亡率位居各類惡性腫瘤之首[4-6]。有關(guān)研究發(fā)現(xiàn)雌激素（E）是不但有重要的生理作用調(diào)節(jié)著人體的環(huán)境，而且還在多種惡性腫瘤的發(fā)病中起到重要的作用。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在非小細(xì)胞肺癌中，女性所患的肺癌種類以肺腺癌為主，相比較男性而言，女性雖然抽煙更少、發(fā)病年齡低，但更容易患肺腺癌，預(yù)后效果更好[7-9]。Taioli等的病例配對(duì)研究資料中顯示在女性中停經(jīng)較早者患肺腺癌危險(xiǎn)度低（OR=0.3）；用雌激素替代治療（hormone replacement therapy，HRT）發(fā)生肺腺癌的危險(xiǎn)性則高（OR=1.7）；此外，妊娠次數(shù)多、絕經(jīng)晚和口服避孕藥可增加肺腺癌發(fā)生的危險(xiǎn)性。因此可以說明肺腺癌的發(fā)病存在著性別的關(guān)系，女性相比較男性而言更容易患肺腺癌，雌激素在肺癌尤其是女性肺腺癌的發(fā)生中起到一定的作用。

瘦素（leptin）是由肥胖基因編碼的一種蛋白質(zhì)產(chǎn)物，目前研究顯示瘦素除與代謝調(diào)節(jié)密切相關(guān)外，瘦素與人類多種腫瘤相關(guān)，已被作為腫瘤標(biāo)志物應(yīng)用于腫瘤的早期診斷。目前瘦素與肺癌的關(guān)系得到學(xué)者們的關(guān)注。本研究發(fā)現(xiàn)非小細(xì)胞肺癌患者的瘦素表達(dá)明顯高于正常人的，而在肺腺癌患者中，女性患者的瘦素表達(dá)與男性患者的無明顯差異，表明瘦素是否刺激內(nèi)分泌激素的產(chǎn)生雌激素并與其一起在肺腺癌的發(fā)生中起協(xié)調(diào)作用，尚不確定[10-12]。

本研究通過對(duì)肺癌患者和正常人利用免疫組織化學(xué)技術(shù)進(jìn)行雌激素受體（ER）檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)肺癌患者相比較正常人有較高的雌激素受體（ER）表達(dá)。我們推測(cè)，雌激素（E）在癌變的發(fā)生、發(fā)展中主要是通過雌激素受體（ER）來發(fā)揮作用的，雌激素受體（ER）陽性肺癌組織的生長(zhǎng)可能需要雌激素環(huán)境的維持。有關(guān)研究者們長(zhǎng)期研究發(fā)現(xiàn)雌激素受體（ER）在某些癌變的過程中被全部保留。在肺癌中，雌激素受體（ER）信號(hào)傳到通路中，在與雌激素（E）結(jié)合后，然后通過基因途徑和非基因途徑產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。雌激素及其受體表達(dá)與女性肺腺癌的研究取得了一定進(jìn)展，但是雌激素在非小細(xì)胞肺癌發(fā)病機(jī)制中的作用尚未明確，還有很多問題需要解決，如女性肺腺癌中雌激素及其受體表達(dá)有無差異，女性肺腺癌組織中雌激素及其受體表達(dá)與肺腺癌的臨床生物學(xué)特性關(guān)系如何，其表達(dá)與療效及預(yù)后有無相關(guān)性，目前報(bào)道較少，還需要大樣本、前瞻性的規(guī)范研究。

綜上所述，非小細(xì)胞肺癌患者的雌激素及雌激素受體表達(dá)明顯高于正常人，肺腺癌患者的雌激素及雌激素受體表達(dá)又高于肺鱗癌患者的，說明雌激素及雌激素受體參與肺腺癌的發(fā)生的可能性最大，但是也不代表雌激素及雌激素受體不參與著肺鱗癌的發(fā)生。因此在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生中，雌激素及雌激素受體均可能參加。由于臨床實(shí)驗(yàn)的病例偏少，因此雌激素及雌激素受體在非小細(xì)胞肺癌的作用還需進(jìn)一步研究，但是雌激素及雌激素受體可以作為非小細(xì)胞肺癌的一種重要診斷指標(biāo)，有利于臨床判斷預(yù)后。

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（收稿日期：2014-07-29）